几种灵芝rDNA基因间隔序列分析与鉴定

目的  基于基因间隔序列（ITS）序列对灵芝进行分类。方法  培养灵芝、提取DNA、优化聚合酶链反应（PCR）体系、纯化与克隆、测序、构建遗传进化树、进行遗传分析。结果  经过一系列的梯度实验得知优化的PCR体系为25μl反应混合物中含模板DNA 25 ng、Mg2+为2.0 mmol/L、dNTPs 200μmol/L、Taq 1.5 U、引物为20 pmol;最佳反应程序为93℃预变性4 min,93℃变性40 s,59℃退火40 s,72℃延伸1 min,共35个循环,72℃继续延伸7 min,4℃无限循环。所采用的HZ002、DZ003、NZ004和XC005在遗传进化树上面十分接近,说明其可以划分为同一菌属,同属于灵芝菌属。结论  基于ITS序列对灵芝进行分类,与其他的分子标记技术所取得的分类结果一致,证实依据ITS序列来对真菌菌属进行分类是十分合理的。

     

《浙江医学》对医学论文中有关实验动物描述的要求

在医学论文的描述中,凡涉及实验动物者,在描述中应符合以下要求:(1)品种、品系描述清楚,(2)强调来源,(3)遗传背景,(4)微生物学质量,(5)明确等级,(6)明确饲养环境和实验环境,(7)明确性别,(8)有无质量合格证,(9)有对饲养的描述(如饲料型、营养水平、照明方式、温度、温度要求),(10)所有动物数量准确,(11)详细描述动物的健康状况,(12)对动物实验的处理方式有单独清楚的交代,(13)全部有对照,部分可采用双因素方差分析。     

弥漫性大B细胞淋巴瘤t(14;18)易位及bcl-2基因扩增的检测

目的探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）t（14;18）染色体异位及bcl-2基因扩增在其分类及临床分期、疗效评估中的作用。方法先对60例DLBCL的标本进行显微切割,获取相对比较纯的肿瘤组织,再使用细胞核芯片荧光原位杂交（FISH）对标本进行t（14;18）易位及bcl-2基因扩增检测,采用免疫组织化学SP法在组织微阵列上同步观测CD20、CD10、bcl-6、MUM1的表达,进行生发中心样（GCB）和非生发中心样（non-GCB）分类;通过病例分析得出治疗效果及临床分期的信息,并统计分析以上各因素之间的关系。结果在60例DLBCL中,10例bcl-2／IgH阳性,18例bcl-2基因扩增;GCB29例（48．3％）,non-GCB31例（51．7％）。经FISH检测t（14;18）阳性10例中,GCB8例,non-GCB2例,差异有统计学意义（P=0．031）。t（14;18）阳性及bcl-2基因扩增的病例bcl-2表达均增高。在36例正规CHOP治疗的病例中,bcl-2扩增13例,无扩增23例,bcl-2扩增的13例之治疗结果显效、部分有效、无效率分别为3例（23．1％）、4例（30．8％）和6例（46．2％）;临床分期情况为Ⅰ-Ⅱ期1例（7．7％）,Ⅲ-Ⅳ期12例（92．3％）,这两项指标与bcl-2不扩增的相比差异均有统计学意义（P=0．019、0．046）。结论t（14;18）易位及bcl-2基因扩增均是引起DLBCL之bcl-2蛋白表达的原因,bd-2阳性者与预后有关的原因难以确定,可能是由于引起其阳性表达的原因不同所致;bcl-2基因扩增与治疗效果较差及临床分期较晚有关;FISH检测t（14;18）染色体易位可用于DLBCL的分类。     

常染色体隐性遗传性皮肤松弛症的相关基因研究进展

常染色体隐性遗传性皮肤松弛症是遗传性皮肤松弛症的常见类型,其发病机制尚未完全明确,但其可能的致病基因功能及其下游信号通路逐渐成为当前的研究热点。对与皮肤松弛症相关的基因及相应的信号通路的深入研究不仅为明确其发病机制奠基了良好的基础,同时,也为指导优生优育咨询指明了方向。本文主要综述近年来与常染色体隐性遗传性皮肤松弛症发病相关的基因及其信号通路的最新研究进展。     

核质置换技术治疗线粒体疾病的研究进展

线粒体疾病是线粒体基因组发生基因突变所导致的一类遗传疾病,目前尚无治愈方法。近年核质置换技术的出现为线粒体疾病的治疗提供了新思路。现有的核质置换技术包括生发泡移植、纺锤体移植、极体移植和原核移植技术,其中生发泡移植涉及的体外成熟可影响卵母细胞的发育潜能;纺锤体移植最大的挑战是纺锤体组装对机械刺激敏感,缺乏核膜包绕,操作过程可能对纺锤体造成损伤;极体移植违背了自然选择过程,其远期影响尚不明了;原核移植操作方便、基础研究证据充分,具有短期内向临床转化的潜能,但使用已经受精的合子作为胞质供体面临的伦理争议较大。本文就4种核质置换技术治疗线粒体疾病的应用现状进行综述。     

携带小鼠 KLF4 基因重组慢病毒的构建及对 RAW264.7 细胞增殖的影响

目的 构建小鼠 Krüppel 样因子 4（KLF4）慢病毒表达载体,并建立 KLF4 过表达小鼠腹腔巨噬细胞 RAW264.7 细胞株。方法 采用聚合酶链式反应（PCR）技术扩增目的基因 KLF4 后,构建重组质粒 pLVX-KLF4,并 通过 PCR、双酶切和测序方法对其进行鉴定。重组质粒与 pSPAX2、pMD2.G 辅助质粒通过 Lipofectamine® 3000 共转 染 293T 细胞,包装病毒并测定病毒滴度。将获得的慢病毒感染 RAW264.7 细胞,实时定量 PCR 法检测 KLF4 mRNA 的表达。分选流式细胞仪分选 GFP 阳性 RAW264.7 细胞。流式细胞术检测 KLF4 对 RAW264.7 细胞周期的影响。 EdU 法检测 KLF4 对 RAW264.7 细胞增殖的影响。结果 经 PCR、双酶切鉴定和测序证实,成功构建了包含小鼠 KLF4 基因的慢病毒穿梭质粒,RT-PCR 证实 Lenti-KLF4 感染的 RAW264.7 细胞中 KLF4 mRNA 表达高于未感染的 对照组 RAW264.7 细胞（P＜0.05）。初次浓缩后测定小鼠 KLF4 基因重组慢病毒的滴度为 2.05×108 TU/mL。分选出 KLF4 过表达的 RAW264.7 细胞。KLF4 过表达的 RAW264.7 细胞周期变化显示为 S 期延长,G0/G1 期缩短。EdU 检 测显示 KLF4 过表达的 RAW264.7 细胞增殖活性增高。结论 成功构建了 KLF4 的慢病毒表达载体,并建立 KLF4 过表达的 RAW264.7 细胞株,KLF4 过表达促进了 RAW264.7 细胞的增殖。     

273例曾生育非整倍体患儿父母染色体核型分析

目的：探讨曾生育非整倍体患儿父母染色体核型异常的检出情况。方法：利用G显带技术对273例曾生育非整倍体患儿父母以及116例健康体检者进行染色体核型分析,必要时加做C显带。结果：273例样本中共检出72例染色体变异,其中包括4例染色体结构异常,检出率为1.46%;68例染色体多态变异,检出率为24.91%;剔除高龄女性样本后,多态变异检出率为64/255（25.10%）。116例对照组染色体核型共检出1例染色体结构异常,5例染色体多态变异,多态变异检出率为4.31%,2组多态变异检出率差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：曾生育非整倍体患儿父母染色体多态变异具有较高检出率,应引起临床医生的重视。     

1例华法林过度抗凝治疗的原因分析

目的 分析导致患者发生过度抗凝的可能原因,并指导临床用药.方法 回顾病例资料,从遗传因素、环境因素等角度出发,查阅相关文献报道,探讨各因素与过度抗凝之间的相关性.结果 患者VKORC1基因型为突变纯合型,华法林抗凝期间合并使用苯溴马隆、注射用头孢尼西钠、阿托伐他汀钙片,维生素K摄入量减少,合并肝功能异常、心力衰竭两种疾病状态,且存在华法林给药方案调整欠妥当的问题,以上因素均可能在一定程度上导致患者的过度抗凝治疗.结论 临床药师应从遗传因素、环境因素各个角度出发,筛查发生过度抗凝的高危人群,及时给医生提出建议,减少过度抗凝的发生,促进临床用药安全.     

消旋酶法DL-丙氨酸的遗传毒性研究

目的 评价消旋酶法DL-丙氨酸的遗传毒性。方法 小鼠骨髓细胞微核实验设阴性对照组（纯水）、阳性对照组（环磷酰胺40 mg/kg）和消旋酶法DL-丙氨酸3个剂量组（10 000、5 000和2 500 mg/kg）,观察各组小鼠胸骨骨髓细胞微核发生率;小鼠精原细胞染色体畸变实验设阴性对照组（纯水）、阳性对照组（环磷酰胺40 mg/kg）和消旋酶法DL-丙氨酸3个剂量组（10 000、5 000和2 500 mg/kg）,观察各组小鼠睾丸精原细胞染色体畸变类型并计算畸变率。细菌回复突变实验（Ames实验）设空白对照组、溶剂对照组、阳性对照组和消旋酶法DL-丙氨酸5个剂量组（50、158、500、1 580、5 000 μg/皿和8、40、200、1 000、5 000 μg/皿）,计数各组回复突变菌落数。结果 小鼠骨髓细胞微核实验结果显示,各剂量组消旋酶法DL-丙氨酸微核细胞率与对照组的差异无统计学意义（P>0.05）;小鼠精原细胞染色体畸变实验结果显示,各剂量组消旋酶法DL-丙氨酸动物睾丸精原细胞染色体畸变率与对照组的差异无统计学意义（P>0.05）;细菌回复突变实验结果显示,在加或不加S9的情况下,各剂量组消旋酶法DL-丙氨酸对TA97a、TA98、TA100、TA102、TA1535菌株均无致突变作用,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 消旋酶法DL-丙氨酸未见明显遗传毒性。     

2012年-2016年青岛地区串联质谱检测结果分析

目的对2012年-2016年青岛地区串联质谱检测情况进行总结分析。方法对2012年1月-2016年12月青岛地区出生的新生儿足跟血进行氨基酸代谢异常、有机酸代谢异常、脂肪酸代谢异常等26种遗传代谢病串联质谱检测,总结目前青岛地区新生儿串联质谱筛查工作现状,分析筛查情况的逐年变化,比较青岛地区与国内外其他地区遗传代谢病发病率及种类分布,同时分析临床样本遗传代谢病的发病情况。结果青岛地区2012年串联质谱筛查5 904例,确诊1例;2016年串联质谱筛查115 791例,确诊58例,疾病种类为15种,其中以高苯丙氨酸血症和甲基丙二酸血症为主;临床可疑阳性遗传代谢病样本呈下降趋势,2016年临床样本中确诊3例遗传代谢病患者。结论青岛地区随着串联质谱筛查量的增加,遗传代谢病确诊人数和疾病种类不断增加,及时的诊疗避免了临床损害。因此,新生儿遗传代谢病串联质谱筛查非常必要,是三级预防的重要手段,对于提高人口质量意义重大。