钙调蛋白基因缺陷HIS3酵母菌株的构建和鉴定

目的：构建白念珠菌钙调蛋白基因（CMD1）缺陷HS3酵母菌体,为进一步探讨钙调蛋白基因突变对真菌生长周期及致病性的影响奠定基础。方法：首先将含cmd1::TRP1置换序列的质粒I转化二倍体酵母菌株YPH501(his3trplural）,经Soutthern印迹法筛选出含TRP1序列的菌株。其次,将含CMD1序列的质粒Ⅱ转化以上TRP1阳性菌株,进行减数分裂后选择得到TRP1阳性酵母菌株单倍体。最后,将含trp1:HIS3置换序列质粒Ⅲ转化上述TRP1阳性单倍体菌株,用不含His培养基培养得到钙调蛋白基因缺陷HIS3酵母菌株。结果：经Southern印迹法证实cmd1：TRP1基因置换克隆;减数分裂后选择得到了TRP1阳性酵母菌株单倍体;质粒Ⅲ转化单倍体后经不含His培养基培养得到CMD1缺陷HIS3菌株,接种于不含Trp倍养基上未见有菌落生长,说明质粒Ⅲ转化单倍体后已将his3TRP1转换成HIS3trp1。结论：成功构建了钙调蛋白基因缺陷HIS3酵母菌株,基因型为cmd1trp1HIS3。     

正、反义组织金属蛋白酶抑制剂1基因转染对肾小球系膜细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的 探讨正、反义组织金属蛋白酶抑制剂1（TIMP－1）对肾小球系膜细胞凋亡的影响。方法 利用前期工作中克隆出的人TIMP－1全长cDNA,分别构建出表达正义及反义TIMP－1的重组真核表达载体pcDNA3-TIMP-1(PTs),pcDNA3-ATIMP-1(PTas),并将上述重组质粒转染至大鼠的肾小球系膜细胞中,Northern杂交检测正、反义TIMP－1的表达。无血清诱导大鼠系膜细胞凋亡,利用DNA缺口末端标记（TUNEL）分析、DNA电泳技术在无血清后的不同时间点检测细胞凋亡,RT－PCR的方法检测凋亡相关基因的表达。结果 转染PTas的大鼠系膜细胞可以高效表达反义TIMP－1,无于血清诱导12h开始发生凋亡;无外源基因转染及空载体转染的大鼠系膜细胞在无血清48h发生凋亡;而转染正义TIMP－1的大鼠系膜细胞可高效表达正义TIMP－1,在无血清4d时才发生凋亡。TIMP－1的高表达或低表达可引起大鼠系膜细胞bax的下调或上调,但并不影响bcl-2的表达。结论 TIMP－1可以抑制无血清诱导的大鼠系膜细胞的凋亡,反义TIMP－1对之则有促进作用。这提示TIMP－1在肾脏除了抑制细胞外基质的作用外还具有新的功能。     

pcDNA3—EGFP基因转染骨髓间充质干细胞的实验研究

目的 探讨外源性pcDNA3-EGFP基因转染修饰兔骨髓间充质干细胞的可行性。方法 用增荧光绿色蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP)cDNA作为报告基因,采用重组真核表达载体系统（pcDNA3-EGFP)以脂质体法转染原代骨髓间充质干细胞,观察转染结果、表达情况及对靶细胞活力的影响。结果 经荧光显微镜下观察证实：成功地对骨髓间充质干细胞实现了基因转染,持续表达时间超过8周;没有发现明显的细胞毒作用及对细胞活力的显著影响。结论 采用真核转染技术可以介导外源基因转染骨髓间充质干细胞,为今后采用基因增强组织工程方法治疗肌肉、骨骼系统疾病提供了实验基础。     

AT2R转染表达促进人肾间质纤维母细胞凋亡

目的 探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）2型受体（AT2R）基因表达对人肾间质纤维母细胞凋亡的影响。方法 构建带AT2R基因的重组复制缺陷型腺病毒载体（AdCMV-AT2R),转染培养的人肾间质纤维母细胞,用流式细胞仪检测AT2R细胞表达率,RT－PCR方法检测AT2R,bcl-2和bax mRNA表达,肾间质纤维母细胞凋亡用流式细胞仪、原位末端标记法检测。结果 构建的AdCMV-AT2R转染培养肾间质纤维母细胞表达率为90．6％。AT2R峰值表达时,其凋亡发生率较末转染组增加3．2倍（P＜0．01）,bax表达增加76．3％（P＜0．05）,bcl-2则无明显变化,TUNEL检测结果表明转染组出现大量凋亡细胞。结论 AT2R转染表达可显著增加体外培养肾间质纤维母细胞的凋亡,这对延缓肾间质纤维化是有益的。     

大鼠肾脏系膜细胞转染人TGF—β1基因可增强MMP—2表达

目的 研究转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）对培养的大鼠肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）基质金属蛋白酶－２（ＭＭＰ－２）表达的影响。方法 采用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将人ＴＧＦ－β１基因转染培养的大鼠ＭｓＣ,经Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ鉴定其转染成功否;又分别应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ,酶谱分析法检测阳性表达人ＴＧＦ－β１的ＭｓＣＭＭＰ－２ｍＲＮＡ蛋白及酶活性变化。结果成功获得稳定过     

效率:素质教育评价的至重砝码

教育评价、教育目标、教育活动是现代教育教学系统三大因素。构建科学的素质教育评价体系应提到战略高度来认识和解决。“高效”是素质教育的“特质” ,实现“高效化”是实施素质教育的必由之径。素质教育的“效率”是“投入”与“产出”之比 ,其投入包括时间、物力、人力、脑力等投入 ,其“产出”也是一个动态的结构系统     

提高国产防尘口罩阻尘效率的探讨

防尘口罩是粉尘作业场所人员必须佩戴的个体防护用品,其阻尘效率的高低是衡量防尘口罩技术性能优劣的重要标志。长期佩戴防尘口罩可以预防或减少尘肺病的发生和发展。目前,我国尘肺病的发病情况仍然比较严重,每年尘肺病的发病人数不是在逐年下降,而是呈上升趋势。以煤炭行业为例,据近两年的不完全统计,现有尘肺病人约１７万例,死亡人数每年约２５００例,新增尘肺病人约４５００例,每年国家用于该项的医疗等费用高达３５亿元。因此,在采取降尘措施的同时,粉尘作业场所的人员还必须佩戴防尘口罩进行个体防护。由此提高防尘口罩的阻…     

军队医院医疗服务技术效率测量研究

目的：建立精确考核医院技术效率的测量方法．为考核医院医疗服务技术效率提供方法学依据。方法：在对38所军队综合医院卫生资源利用情况描述性分析的基础上,采用随机前沿成本模型,设立产出指标,计算效率残差,进行军队医院技术效率的对比研究。结果：平均低效率为31％。以300～500张床位的医院效率最低。结论：军队医院技术效率偏低,与其规模及供给能力不符。     

医疗服务系统效率研究进展

本介绍了医疗服务系统效率研究的背景与重要性;指出目前效率的概念及内涵,包括筹资、配置与技术效率;论述了系统特点是多元性,以及国内外较通用的针对多元系统的效率测量方法;概述了国内外研究现状、存在问题及研究意义,提出采用多元系统效率测量医疗系统低效率程度与环节,是方法研究的方向。