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91.
例 1女 ,12岁因车祸墙蹋造成致伤急诊入院。查体 :神志清楚 ,面色苍白 ,面部右下胸、背部及左上臂见挫裂伤。腹肌软 ,轻度压痛 ,反跳痛。移动性浊音阳性。血色素 2 8克 ,血压 11 7kpa ,心率110次 分。CT扫描未见明显肝脾破裂影像 ,但提示腹腔积血 ,经腹腔穿刺 ,可抽出不凝固血 ,临床诊断腹腔内实质性脏器破裂 ,行急诊气管插管全麻下剖腹控查术。术中见肝右前叶、右后叶、肝右内叶、肝左叶均无破裂 ,脾脏完整。所见网膜孔血凝块 ,剪开小网膜见尾状叶约1 5cm横形裂口出血。腹腔内出血量约15 0 0ml,因暴露困难 ,加之仍在出血 ,但出… 相似文献
92.
目的 构建7种常见的MBL基因单倍型标准质粒。方法以已确认MBL基因单倍型及基因型的DNA样本为模板.利用SSP-PCR技术扩增出包含MBL基因启动子区及第一外显子的单倍型片段并将其克隆人T载体;用定点突变技术分别将其第一外显子52和57位密码相应的碱基突变;采用PCR和测序进行鉴定。结果以单倍型及基因型已确认的DNA样本为模板,采用SSP-PCR和分子克隆技术获得单倍型HYPA、LXPA、LYOA、LYPA和LYPB重组质粒;以单倍型HYPA及LYOA重组质粒为模板,采用定点突变技术获得单倍型HYPD及LYOC标准质粒。结论构建成功常见的7种MBL基因单倍型标准质粒,为采用SSP-PCR、Real-time PCR等技术分析MBL基因相应的SNP及其单倍型与基因型提供了标准对照。 相似文献
93.
目的探讨广东地区宫颈癌组织中HPV16肿瘤相关性抗原E7基因序列的多态性.方法采用通用引物PCR直接测序法对宫颈癌标本中的HPV分型,从含有HPV16型的标本中采用自行设计的多重引物通过巢式PCR扩增出HPV16E7,经DNA序列测定法检测其基因变异,进而寻找其热点突变.结果50例宫颈癌组织HPV-DNA的检出率为78%,其中HPV16和HPV18型混合感染18例,单纯HPV16型感染15例.33例含有HPV16型的标本中扩增出25例HPV16E7,其中17例647位核苷酸“T”变异“C”,导致相应的蛋白质由天冬氨酸变异为丝氨酸.结论广东地区宫颈癌组织中HPV16E7DNA序列发生碱基替换的区域主要在647位至846位,热点突变点为Nt647和Nt846. 相似文献
94.
本实验将赖型钩端螺旋体(简称钩体)DNA基因库的克隆pCX7制备成 ̄(32)P-重组DNA探针,对8个不同血清群的17株问号状钩体、双曲钩体PatocⅠ株以及细螺旋体3055株DNA进行打点杂交;同时用15种DNA片断进行限制性内切酶谱分析。结果表明,该重组DNA具有问号状钩体种(Species)特异性,但与不同问号状钩体之间的同源性程度有差别;限制性内切酶谱分析发现pCX7重组DNA片段长约1.7kb,具有1个Bg1Ⅱ识别位点和3个BstB1识别位点。 相似文献
95.
构建具有λPR与T7双启动动子的新型原核表达载体pDOG,以便使用同一载体研究不同诱导条件下,重组蛋白在大肠杆菌中表达,降解以及折叠的情况,从而选择最佳的诱导条件。方法采用pBV220与PET-3表达载体作为原始材料,将PET-3上包括T7启动子与T7g-10释译起始序列的一段序列克隆到 相似文献
96.
目的:利用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)作为基因佐剂,提高东部马脑炎病毒E2基因重组质粒的免疫效果.方法:分别扩增E2基因与GM-CSF基因,连接进入含有内部核糖体插入位点(IRES)的真核表达载体中,构建共表达质粒.Lipofectamine2000介导转染真核细胞BHK-21,反转录PCR检测E2和GM-CSF两个基因的转录,Western印迹法和间接免疫荧光法(IFA)检测细胞内E2基因表达产物的抗原性.通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠,IFA法测定血清抗体效价,FACS测定免疫小鼠脾细胞中CD4 /CD8 淋巴细胞构成比,初步观察共表达质粒的免疫原性.结果:经酶切鉴定与序列测定证明重组共表达质粒中含有E2和GM-CSF两个基因且序列正确.转染细胞的反转录PCR可见E2和GM-CSF两个基因的转录.Western印迹结果可见转染细胞的裂解液在相对分子质量50 000位置有特异性条带.将转染细胞制成荧光抗原片,经IFA检测可见胞浆中出现特异荧光.免疫小鼠的最高血清抗体效价为1:160,但细胞免疫未观察到明显的提高.结论:构建的共表达质粒pE2-IRES-mGM-CSF具有良好的免疫原性,能有效刺激小鼠特异性体液免疫应答,提高了E2基因重组质粒诱导的血清抗体效价. 相似文献
97.
新生儿病房铜绿假单胞菌的血清学分型,质粒分析研究 总被引:1,自引:0,他引:1
新生儿病房1989年10月~1990年12月、1996年3~6月两个时间段分离40株铜绿假单胞菌,血清学分型率97.5%,第一时间段以O11型最多,占30.4%,集中在1990年6~10月,第二时间段O3型占93.8%,集中在1996年3~6月,表明该病房发生两次铜绿假单胞菌医院感染流行。质粒检出率42.9%,O11型菌株质粒谱为8.1、46.5、179.1kb,并经HindⅢ酶切进一步证实为同一克隆。对氟哌酸、阿米卡星及头孢他啶的敏感率分别为100%、97.3%和95%。对庆大霉素耐药率明显上升,提示控制铜绿假单胞菌医院感染的重要性。 相似文献
98.
细粒棘球蚴95抗原基因的克隆及原核表达质粒的构建 总被引:9,自引:2,他引:7
目的:克隆细粒棘球蚴95(Eg95)抗原基因,构建携带目的基因的原核表达载体,为细粒棘球蚴抗原的免疫保护机制研究提供材料。方法:应用PCR方法从细粒棘球蚴cDNA文库中克隆获得Eg95抗原基因,将其克隆至pUCm-T载体,测序确定其正确性。利用定向克隆技术将Eg95抗原基因片段克隆至原核表达质粒pET28上,根据选择标记的卡那霉素抗性基因筛选到阳性克隆,通过酶切分析和PCR鉴定筛选出阳性克隆,测序确定序列。结果:测序表明所有pET28-Eg95阳性克隆均为正确连接95抗原基因的重组质粒。结论:pET28-Eg95可以进一步用于重组蛋白的表达及抗细粒棘球蚴感染的实验研究。 相似文献
99.
PCR检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究快速、特异、灵敏的检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法,并比较单一PCR和多重PCR对检测灵敏度的影响.方法选择O157∶H7的O抗原、H鞭毛抗原及SLT1和SLT2毒素基因特异的4对引物,分别或共同进行PCR扩增,检测40株O157∶H7和非O157∶H7菌株,将细菌按10+1~10+6稀释后比较PCR的检测灵敏度.结果所有O157∶H7菌株均在497 bp和625 bp处出现O157抗原基因和H7抗原基因产物,其产毒株在484 bp和(或)210 bp处出现SLT2和(或)SLT1基因产物,非O157∶H7菌株PCR结果均为阴性;单一PCR检测灵敏度为150 CFU/PCR反应,多重PCR为>1 500 CFU/PCR反应.结论在经过增菌后,多重PCR比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏和简便,为产毒和非产毒O157∶H7的诊断提供了新的手段. 相似文献
100.
目的 建立检测人CEA的T7 RNA聚合酶催化的荧光扩增技术.方法 以亲和素作为连接分子,连接生物素化的检测抗体和生物素化的DNA,加入T7RNA聚合酶进行转录扩增反应,对生成的RNA产物进行荧光检测,并同时进行夹心ELISA方法检测人CEA.结果 成功的建立了检测人CEA的T7 RNA聚合酶催化的荧光扩增技术,其检测CEA的灵敏度达2×10 -3 ng/ml,比夹心EL ISA 方法灵敏度高125倍.结论 T7 RNA聚合酶催化的荧光扩增技术较夹心ELISA方法具有更高的敏感性,有可能作为一种新的检测方法用于临床的早期诊断. 相似文献