褪黑素对重症急性胰腺炎相关性肺损伤保护作用的研究

在重症急性胰腺炎（SAP）引起的多器官功能衰竭中,呼吸功能衰竭占SAP第1周病死率60％,肺功能障碍是除腹部脏器功能障碍外最突出的表现,因此同时着眼于胰腺和肺组织是治疗SAP的新策略。     

褪黑素对血管内皮细胞损伤的保护作用及机制

目的研究褪黑素对脂多糖引起的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用,以及对其机制探讨。方法在体外建立脂多糖血管内皮细胞损伤模型,添加不同浓度的褪黑素（低剂量组100μmol／L,高剂量组500μmol／L）,采用MTT法观察褪黑素对血管内皮细胞存活率的影响;用流式细胞仪检测细胞凋亡率,细胞免疫荧光技术检测细胞色素C的释放;用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定细胞裂解液中超氧化物歧化酶的浓度;用划痕修复实验检测血管内皮细胞的迁移功能。结果脂多糖损伤后,血管内皮细胞存活率减少约50％,凋亡细胞百分比增加35．7％,细胞色素c大量释放到细胞质中,细胞裂解液中超氧化物歧化酶浓度下降约50％,且血管内皮细胞的迁移能力受损。加入褪黑素后,可明显减轻脂多糖对细胞的损伤作用,恢复细胞存活率至70％-80％,减少细胞凋亡率至15．1％-20．6％,保护细胞的迁移能力,且呈剂量依赖性,高剂量组的效果明显好于低剂量组,各指标差异有统计学意义（P〈0．05）。结论褪黑素可保护和修复脂多糖引起的血管内皮细胞损伤,其作用途径可能与抑制细胞凋亡．减轻氧化损伤以及保护迁移功能有关。     

褪黑素对大鼠腹膜透析相关性腹膜纤维化的影响

目的观察褪黑素(melatonin,MT)对大鼠腹膜透析相关性腹膜纤维化的影响。方法将38只雄性SD大鼠分为对照组(6只)、腹膜纤维化模型组(8只)、模型+低剂量MT(5mg·kg~(-1)·d~(-1))腹腔给药组(8只)、模型+中剂量MT(10mg·kg~(-1)·d~(-1))腹腔给药组(8只)、模型+高剂量MT(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))腹腔给药组(8只)。腹腔注射4.25%腹膜透析液100 ml·kg~(-1)·d~(-1)建立腹膜纤维化大鼠模型。实验第28天行4h腹膜平衡实验(peritoneal equilibration test,PET),量取超滤量(ultrafiltration,UF),检测腹透液尿素氮浓度(dialysate urea nitrogen concentration,D)、血浆尿素氮浓度(plasma urea nitrogen concentration,Purea)、初始腹膜透析液葡萄糖浓度(D0)、4 h后透出液葡萄糖浓度(D4),并计算D/Purea、D4/D0。取大鼠壁层腹膜组织行HE和Masson染色,采用免疫组化方法检测转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1),胶原Ⅰ(collagenⅠ,Col-Ⅰ)和α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达。结果 4 h PET显示模型组与对照组相比,UF和D4/D0明显减少(P0.05),D/Purea明显增加(P0.05);MT各给药组与模型组比较,UF和D4/D0明显增加(P0.05),D/Purea明显减少(P0.05);HE和Masson染色显示对照组腹膜菲薄,间皮细胞连接紧密,模型组腹膜明显增厚,部分可见间皮细胞缺失,间皮下可见胶原沉积,MT各给药组上述腹膜病理改变较模型组明显减轻;免疫组化显示模型组TGF-β1、Col-Ⅰ、α-SMA表达明显高于对照组(P0.05),MT各给药组表达明显低于模型组(P0.05)。结论 MT能通过改善腹膜的结构和功能来发挥其对抗大鼠腹膜纤维化的作用并能抑制TGF-β1、Col-Ⅰ和α-SMA表达。     

Neu-P11在胰岛素抵抗脂肪细胞模型中对胰岛素受体后信号通路的影响

2型糖尿病为影响人类生存质量的主要病因之一,在过去十年里,2型糖尿病在全球范围的发病率显著增加[1].其主要特征是胰岛素相对不足和存在胰岛素抵抗.2型糖尿病的胰岛素抵抗作用和人体肝脏、骨骼肌及脂肪组织中的胰岛素信号转导通路紊乱关系密切[2].     

褪黑素通过激活自噬抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的生长和转移

目的 探讨褪黑素对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长和转移的作用及其机制。方法 将MDA-MB-231细胞设置对照组以及1、3、5 mmol/L褪黑素处理组,Western blot检测自噬对细胞生长、转移的影响时,添加3-甲基腺嘌呤（3-MA）组、3-MA联合褪黑素组。使用不同浓度褪黑素处理MDA-MB-231乳腺癌细胞24、48 h,并加入0.1%无水乙醇的细胞作为对照,CCK-8法检测细胞增殖活性确定最佳处理浓度和时间,筛选出3 mmol/L褪黑素用于后续实验。集落形成实验及划痕实验检测不同浓度褪黑素对乳腺癌细胞集落形成能力和迁移能力的影响;流式细胞术、免疫荧光检测3 mmol/L褪黑素对MDA-MB-231细胞凋亡率和自噬蛋白阳性着色情况;Western blot检测自噬相关蛋白LC3、P62、Beclin1,凋亡相关蛋白Bcl2、Bax,上皮-间质转化（EMT）相关蛋白E-cadherin、Snai1的水平。结果 CCK-8结果显示,与对照组相比,褪黑素呈浓度及时间依赖性抑制乳腺癌细胞的增殖（P<0.05）;集落形成实验显示,3个浓度褪黑素处理组的集落数低于对照组;褪黑素作用24 h后明显抑制乳腺癌细胞划痕愈合速度（P<0.01）,并诱导细胞凋亡率增加（P<0.01）;且与对照组相比,褪黑素组的促凋亡蛋白Bax表达增加（P<0.05）,抗凋亡蛋白Bcl2表达下调（P<0.05）,Bcl2/Bax的比值逐渐减低（P<0.01）;转录因子Snail减少,上皮细胞标志蛋白E-cadherin增加;单独使用褪黑素能够诱导细胞内自噬标记蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1表达增加,P62表达减少（P<0.05）以及Beclin1蛋白阳性着色增强,P62蛋白阳性着色减弱;3-MA+褪黑素组中自噬相关蛋白Beclin1（P<0.001）、LC3-ΙΙ/LC3-（Ι P<0.05）以及凋亡蛋白Bax（P<0.01）、上皮细胞标志蛋白E-cadherin（P<0.001）明显低于褪黑素组,抗凋亡蛋白Bcl2（P<0.05）、转录因子Snail以及Bcl2/Bax的比值（P<0.01）高于褪黑素组。 结论 褪黑素可通过诱导MDA-MB-231乳腺癌细胞发生自噬,抑制乳腺癌细胞增殖、转移并促进其凋亡,而减少自噬,可减弱褪黑素对乳腺癌细胞生长和转移的抑制作用。     

不同光照方式对慢性阻塞性肺疾病急性加重 患者血清褪黑素水平及近期预后的影响

目的 探讨不同光照方式对慢性阻塞性肺疾病急性加重（acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD）患者血清褪黑素（melatonin,Mel）及近期预后的影响。方法 选取2019年7月至2020年12月浙江省人民医院收治的96例AECOPD患者为研究对象,按照随机数字表法分为对照组（n=46）和观察组（n=50）。对照组患者给予24h持续光照,观察组患者采用间断光照方式,8:00至20:00给予持续光照,20:00至次日8:00关闭光照并为患者佩戴黑色眼罩,连续观察10d。比较两组患者血清Mel及尿6-羟基硫酸褪黑素（6-sulphatoxymelatonin,6-SMT）水平变化及撤机成功率、重症监护室（intensive care unit,ICU）停留时间、多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome,MODS）发生率、住院28 d生存率差异。结果 观察组患者7:00和22:00的血清Mel及尿6-SMT水平均呈现升高趋势,且入院后第5天和第10天上述指标均显著高于同期对照组（P<0.05）。观察组患者撤机成功率显著高于对照组,ICU停留时间显著短于对照组,MODS发生率显著低于对照组（P<0.05）。观察组患者住院28d的生存率略高于对照组,但两组比较差异无统计学意义（84.0% vs 73.9%,χ2=0.390,P=0.532）。结论 对AECOPD患者实施间断光照能够明显提高患者体内Mel及其代谢产物水平,改善近期预后,值得在临床中推广应用。     

褪黑素调控Nrf2/ARE信号通路延缓髓核间充质干细胞退变的实验研究

  目的  探讨褪黑素对氧化应激条件下的大鼠髓核间充质干细胞(NPMSCs)的影响及调节机制。  方法  使用差速贴壁法获取大鼠NPMSCs。显微镜下观察细胞状态,鉴定第三代细胞三系分化潜能和细胞表面免疫标志物;采用CCK-8法检测不同浓度过氧化氢和褪黑素诱导对大鼠NPMSCs活力的影响确定最佳浓度和实验分组;免疫荧光和流式细胞学技术检测NPMSCs活性氧水平;免疫印迹分析外基质标志蛋白(Ⅱ型胶原、糖胺聚糖)和通路核心蛋白(Nrf2、HO-1)表达情况。  结果  褪黑素在氧化应激下保护了NPMSCs的活性,且1 μmol/L浓度保护效应最为明显(0.717±0.018,t=7.102, P＜0.01)。褪黑素可抑制NPMSCs在H₂O₂诱导后的活性氧水平(阳性率70.0% vs. 32.7%)。此外,褪黑素还能显著提高Nrf2/ARE信号通路中关键蛋白核因子E2相关因子(1.925±0.024,t=13.150,P＜0.01)和血红素氧合酶-1(1.605±0.019,t=12.940, P＜0.01)的活性,改善NPMSCs的功能。褪黑素治疗后,细胞基质蛋白Ⅱ型胶原(0.850±0.010,t=25.200,P＜0.01)和糖胺聚糖(0.335±0.013,t=10.640,P＜0.01)表达增加。  结论  褪黑素通过调控Nrf2/ARE信号通路可以影响NPMSCs退变的生物学特性。      

褪黑素介导抗炎、抗氧化、抗骨质疏松作用在椎间盘退变修复中的研究进展

目前,椎间盘退行性疾病（disc degeneration disease,DDD）已成为临床上中老年人的常见病,且发病年龄有年轻化趋势。椎间盘退变（intervertebral disc degeneration,IDD）是指椎间盘（intervertebral disc,IVD）在内外部因素共同作用下引起的老化、退化等一系列生理、病理过程,被认为是DDD的基本病理过程,是引发患者腰痛的主要原因,因此修复IDD是治疗DDD的重点。IDD过程中伴随着炎症介质的产生、炎症相关信号通路的活化以及氧化应激的发生。褪黑素作为一种吲哚类激素,具有显著的抗炎及抗氧化作用,近年来受到研究者关注,越来越多的研究表明褪黑素对IVD具有保护作用,对治疗骨质疏松症（osteoporosis,OP）也有一定的作用,其有望成为IDD修复的治疗药物。笔者拟对褪黑素在椎间盘退变修复中的最新研究进展做一综述,以期为后续研究及IDD的早期药物干预和修复治疗策略提供思路。     

褪黑素通过抑制NLRP3减轻MPP+诱导的HT22细胞焦亡/炎性损害

目的 研究褪黑素(MT)预处理抑制NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)水平,减轻神经细胞焦亡,改善帕金森病症状的作用及分子机制。方法 正常培养的HT22细胞记为空白对照组（Sham组）;细胞进行10 mmol/L 1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP⁺)处理24 h,制成帕金森病细胞模型后,记为MPP⁺组;先用5 μmmol/L MT预处理6 h后,再造模后,记为MPP⁺+MT组;各组细胞处理后经培养24 h后取材。采用CCK8检测细胞死亡变化;采用荧光免疫组化法和Western-blotting方法检测NLRP3分布和表达变化;使用标准ELISA试剂盒检测IL-1β和 IL-18表达变化。结果 与Sham组相比,MPP⁺组神经细胞大量死亡,NLRP3在存活细胞的胞膜和胞浆中高表达,相应的炎症因子IL-1β和IL-18也大量释放,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。相较于MPP⁺组,MPP⁺+MT组细胞存活率升高,细胞中NLRP3染色阳性率降低,表达量也降低,相应的IL-1β和IL-18表达量也降低,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MT可有效抑制NLRP3表达和炎症因子的释放,减轻神经细胞焦亡,从而减轻MPP⁺造成的HT22细胞损伤。     

早年职业性睡眠剥夺对退休护士认知功能的影响

目的 探讨早期职业性睡眠剥夺对退休护士认知功能的影响及可能的机制。 方法 整群选取退休护士107人,根据其参与值夜班工作年限、每月夜班频率,将其分为睡眠剥夺组（n=82）和非睡眠剥夺组（n=25）,通过简易智能精神状态检查量表（MMSE）、蒙特利尔智能评估量表（MoCA）、画钟试验（CDT）评估其认知功能;并检测其血清中褪黑素、低密度脂蛋白、三酰甘油等指标水平,探讨睡眠剥夺影响认知功能的可能机制。 结果 与非睡眠剥夺组相比,睡眠剥夺组MMSE及MoCA评分降低,总胆固醇、低密度脂蛋白、褪黑素水平增高（均P<0.05）;组间比较发现,睡眠剥夺对定向力、注意力和计算力影响较为显著（均P<0.05）。睡眠剥夺和低密度脂蛋白是认知障碍的危险因素（均P<0.01）。 结论 护理人员青中年期职业性睡眠剥夺会对中老年期认知功能产生影响,低密度脂蛋白可能是中老年认知功能的危险因素。针对长期参与倒夜班的护理人群应早期筛查,早期干预,以降低其发展为老年性痴呆的风险。