蛋白酶体抑制剂Z-LLL-CHO对人骨肉瘤细胞株MG-63作用的体外研究

目的　探讨蛋白酶体抑制剂Z LLL CHO对人骨肉瘤细胞株MG 63的作用 ,并探讨其作用机制。方法　将不同浓度的Z LLL CHO作用于骨肉瘤细胞株MG 63 ,采用荧光显微镜观察细胞形态改变、电镜观察细胞超微结构变化、MTT法检测细胞增殖活力、琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡、流式细胞仪分析细胞凋亡率及细胞周期改变。结果　Z LLL CHO可有效抑制MG 63细胞株的生长 ,并诱导细胞发生凋亡。凋亡细胞表现为浓染致密的颗粒块状荧光 ,胞核固缩、染色质凝聚并边缘化 ,DNA呈“阶梯状”排列的条带。流式细胞仪分析显示 ,Z LLL CHO在 1.0 μmol/L作用 2 4h、3 6h、48h后 ,细胞凋亡率分别为 5 .4%、2 0 .5 %、5 2 .7%。随药物浓度增高及作用时间延长 ,细胞周期被阻滞于G2 /M期。结论　蛋白酶体抑制剂Z LLL CHO可有效抑制人骨肉瘤MG 63细胞株的生长增殖 ,阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡可能起重要作用。     

蛋白泛素化降解途径与病毒感染的关系

泛素是具有高度保守性的76个氨基酸蛋白质，通过蛋白酶降解蛋白质。泛素．蛋白酶体途径是真核细胞内重要的蛋白质质控系统，参与调节细胞周期进程、抗原提呈、转录和信号转导等多种细胞生理过程，泛素化底物及其随后的降解过程贯穿于整个细胞的质膜系统，从细胞膜、内质网到核膜等等。病毒也利用泛素．蛋白酶体途径逃避宿主的免疫监测。因此，了解由泛素系统紊乱而引起的病毒感染具有重要意义。     

蛋白酶体功能障碍对多巴胺能PC12细胞的特异性损伤

目的探讨蛋白酶体抑制剂lactacystin对多巴胺能PC12细胞的特异性损伤。方法不同浓度的lactacystin(1、5、10、15和20μmol/L)分别处理多巴胺能PC12细胞和胶质瘤U251细胞24 h,MTT法检测细胞活力;50μmol/L的lactacystin处理U251细胞24 h,MTT法检测细胞活力;10、20μmol/L lactacystin处理PC12细胞,W estern B lot检测细胞内多泛素化蛋白含量;单胺氧化酶B抑制剂selegiline(500μmol/L)和特异性酪氨酸羟化酶抑制剂-αMT(1 mmol/L)提前4 h预处理PC12细胞,再与10μmol/Llactacystin共同作用24 h,MTT法检测细胞活力,W estern B lot检测多泛素化蛋白含量。结果Lactacystin呈剂量依赖性损伤多巴胺能PC12细胞,其对胶质瘤U251细胞无毒性作用,而且其毒性与细胞内多泛素化蛋白生成增加相关。用以增加细胞内多巴胺含量的selegiline和用以减少细胞内多巴胺含量的α-MT都导致lactacystin毒性增强。结论蛋白酶体功能障碍特异性损伤多巴胺能细胞,而其特征性的神经递质多巴胺在其易感性中的作用复杂。     

泛素-蛋白酶体复合通路在妇科恶性肿瘤中的研究

泛素-蛋白酶体复合通路是一种高效蛋白降解途径，主要负责真核细胞内蛋白质的选择性降解。该通路通过其特殊的蛋白酶体裂解活性，上调或下调妇科恶性肿瘤中某些细胞周期蛋白、抑癌基因和转录因子等的表达，并可以通过改变组织相容性复合物限制性Ⅰ类抗原（MHC-Ⅰ）限制性抗原肽的生成．参与妇科恶性肿瘤的发生和发展。新近研究资料表明，特异性蛋白酶体抑制剂可诱导多种肿瘤细胞系凋亡，为妇科恶性肿瘤治疗提供新思路。     

锰对PC12细胞增殖及蛋白酶体活性的抑制作用

目的：探讨锰对PC12细胞蛋白酶体20s复合物活性的影响.方法：以MTT以及平板克隆形成实验筛选作用浓度,不同时间以及不同浓度作用之后,提取细胞总蛋白,分别检测总蛋白提取液中20s复合物3种酶的活性.结果：含有MnCl2 300μmol/L的培养基对蛋白酶体3种酶活性的抑制率随着作用时间的延长而增高.作用3 d后,对3种酶活性的抑制率均超过20%.在作用时间相同的条件下,随着作用浓度的增高,锰对PC12细胞蛋白酶体活性的抑制作用逐渐增强.同样作用3 d后,当MnCl2浓度达到500μmol/L时,锰对3种酶活性的抑制率均超过40%.结论：蛋白酶体20s活性的抑制可能在锰所诱导的神经毒性过程中发挥着一定的作用.     

当归芍药散调控泛素-蛋白酶体途径改善SAMP8小鼠认知能力的作用及其机制

目的 探讨当归芍药散（DSS）调控泛素-蛋白酶体途径（UPP）改善SAMP8阿尔茨海默病（AD）模型小鼠认知能力的作用机制。方法 15只SAMR1小鼠为正常组，60只SAMP8小鼠随机分为模型组及DSS高、中、低剂量组（57.6、28.8、14.4 g·kg^-1·d^-1），连续灌胃给药8周。Morris水迷宫实验测试定位航行与空间探索能力；苏木素-伊红（HE）染色法检测海马CA1区神经元病理结构改变；免疫组化法（IHC）和酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测海马β淀粉样蛋白（Aβ）和磷酸化（p）-Tau蛋白含量，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马组织泛素（Ub）、泛素连接酶E3（E3）、26S蛋白酶体、泛素羧基端水解酶1（UCHL1）、UCHL3 mRNA和蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组小鼠逃避潜伏期延长（P<0.05），穿越平台象限次数和平台象限停留百分比减少（P<0.05）；CA1区神经元明显减少、胞体聚缩；β-淀粉样前体蛋白（β-APP）和p-Tau阳性细胞数量明显增多（P<0.05）；Aβ和p-Tau蛋白水平升高（P<0.05）；Ub mRNA和蛋白表达升高（P<0.05）；E3、26S蛋白酶体、UCHL1、UCHL3 mRNA和蛋白表达下降（P<0.05）。与模型组比较，DSS高、中剂量组逃避潜伏期缩短（P<0.05），穿越平台象限次数和停留百分比增加（P<0.05）；DSS各剂量组CA1病理改变明显改善；各剂量组β-APP及中、低剂量组p-Tau阳性染色细胞数量减少（P<0.05）；各剂量组Aβ及p-Tau蛋白水平下降（P<0.05）；各剂量组 Ub mRNA表达降低（P<0.05），高、中剂量组26S、E3、UCHL3 mRNA表达水平升高（P<0.05），中剂量组UCHL1 mRNA表达升高（P<0.05）；各剂量组Ub蛋白表达降低，高、中剂量组26S、E3、UCHL1+3蛋白表达升高（P<0.05）。结论 DSS可改善SAMP8小鼠认知能力，其机制可能与降低UPP途径中Ub及升高E3、26S、UCHL1、UCHL3的表达，减少Aβ和p-Tau异常沉积有关。     

认知功能障碍中泛素蛋白酶体通路的作用

众多信号转导通路功能稳定是保持正常认知的生物学基础，其中，泛素蛋白酶体通路 （UPP）功能障碍会导致蛋白质降解出现障碍，神经元稳定性遭到破坏，出现神经元变性坏死。现通过介 绍突触可塑性中起关键作用的分子与UPP的相互关系，阐述认知功能障碍中UPP的作用机制。     

硼替佐米治疗多发性骨髓瘤致帕金森样表现2例

病例1:女性,68岁。因骨穿检查诊断为"多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)"于2009年10月22日收入血液科。病来纳差,周身疼痛,略有乏力,偶有头晕,二便正常,无发热和出血倾向,体质量无明显变化。3年前患"脑梗死",治疗后好转未留后遗症,2年前确诊高血压并继续治疗中。入院时体温36.8℃,脉搏86次/min,血压140/80mm     

自噬在心力衰竭中的微观、宏观作用研究

自噬是在溶酶体的介导下降解细胞内受损的分子物质和细胞内容物,进而维持细胞内环境的稳态。随着自噬作用机制的逐步揭示,其在心力衰竭中的分子作用机制也备受关注。心肌细胞在缺血、缺氧、饥饿等应激状态下,相应的细胞器,如线粒体、内质网、泛素-蛋白酶体遭受破坏,细胞内环境在发生改变过程中可观察到自噬活动的增加,并清除受损的蛋白质和细胞器等,进而阻止心力衰竭的进展。自噬不仅可以维持心肌细胞的内环境,而且也参与了心肌细胞的重构和凋亡,对维持心肌细胞的形态和功能发挥重要作用。因此,如何调控心力衰竭中心肌细胞的自噬活动,将可能成为未来心力衰竭治疗的突破点。