蛋白激酶C激活调控FOS表达参与缺血诱导神经元凋亡的研究

目的：探讨蛋白激酶C（PKC）与神经元凋亡的可能机制，方法：采用大鼠全脑缺血模型，观察脑缺血／再灌流后PKC活性，FOS表达及神经元凋亡的变化。结果：脑缺血／再灌流可以导致PKC的移位激活伴FOS表达及神经元凋亡的增加；用蛋白激酶C抑制剂灯盏花可以阻止上述变化。结论：蛋白激酶C的激活可能通过促进FOS表达参与了脑缺血／再灌流诱导的神经元凋亡。     

神经化学传递与颅脑外伤

颅脑外伤后的一系列生化改变可加重脑水肿和神经功能障碍,本文对颅脑损伤后神经递质的释放及其受体的变化、Ca~(++)潴留以及蛋白激酶C的活化等对脑组织的继发性损害做一简要综述。     

三氧化二砷对人脐静脉内皮细胞中蛋白激酶C活性和白细胞介素-15分泌、表达的影响及其临床意义

目的 通过研究三氧化二砷(As2O3)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中蛋白激酶C(PKC)活性和白细胞介素(IL)-15表达和分泌的影响,探讨内皮细胞在As2O3抑制白血病或肿瘤中的作用。方法用不同浓度的As2O3作用于培养的HUVEC细胞,测定其生长情况、胞膜和胞浆PKC活性以及对IL-15基因表达和分泌的影响。结果0.25 μmol／L~50 μmol／L的.As2O3均抑制HUVEC细胞的增殖(P<0.01),随着药物浓度或作用时间的增加,细胞逐渐死亡。在As2O3作用细胞4 h测定胞浆和胞膜的PKC活性,两者在不同浓度作用下活性水平均得到提升(P<0.01),但胞膜的活性上升幅度更大。在As2O3的测定浓度范围内,PKC的活性水平与As2O3的浓度呈正相关。1、5、16 μmol／L的As2O3导致IL-15基因表达和分泌水平的增加(P<0.01),并呈浓度依赖性关系。结论As2O3可能是通过激活内皮细胞的PKC活性,促进IL-15或其他细胞因子的分泌,来抑制白血病或肿瘤发展的。     

白藜三醇对黄嘌呤—黄嘌呤氧化酶致平滑肌细胞核因子-κB活化及蛋白激酶Cα表达的干预

为探讨红葡萄酒的最有效成分之一白藜三醇拮抗黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶对血管平滑肌细胞内核因子活性和蛋白激酶Cα表达的影响，以培养幼兔主动脉平滑肌细胞为研究对象，分别给予不同剂量的黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶和/或白藜三醇，采用噻唑蓝法、电泳迁移率改变分析法、免疫组织化学和原位杂交技术检测不同处理组平滑肌细胞增殖及核因子的活性和蛋白激酶Cα蛋白及其mRNA的表达变化。结果发现，不同浓度黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶的系统所产生的氧自由基可明显增加体外培养血管平滑肌细胞增殖及核因子的活性和蛋白激酶蛋白Cα及其mRNA的袁达水平，白藜三醇呈剂量依赖性的抑制氧自由基对体外培养血管平滑肌细胞的增殖作用和核因子的活性，并下调蛋白激酶Cα的表达水平；其中以终浓度100μmol／L的白藜三醇对氧自由基介导的核因子活性的抑制作用最强，终浓度200μmol／L的白藜三醇对血管平滑肌细胞的增殖作用及蛋白激酶Cα表达的抑制作用最强。实验结果提示，红葡萄酒的有效成分白藜三醇可能是通过抑制核因子的诱导合成而阻断黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统所产生氧自由基的促蛋白激酶Cα的表达效应，进而抑制平滑肌细胞增殖，发挥其抗动脉粥样硬化的作用。     

丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1对血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制

目的 研究丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP1)对血管平滑肌细胞增殖的影响及机制。方法 转染MKP1质粒72h后，收集培养的血管平滑肌细胞(VSMC)，利用P^42／P^44磷酸化抗MAPK抗体通过免疫印迹法测定MAPK活性，用流试细胞仪测定细胞周期、细胞周期素和P27蛋白的表达。结果 转染MKP1质粒后，MAPK活性明显下降，VSMC阻滞于G0-G1期，同时抑制了细胞周期素D、E的表达，P27蛋白表达却明显增加。结论 MKP1抑制VSMC增殖可能是通过降低MAPK活性，抑制细胞周期素表达和增加P27蛋白表达途径实现的。     

可成药基因组的一次更新

人类基因组已经完全解析清楚，现在是寻找可成药基因组的大好时机。Russ等分析认为，大约有2000～3000个基因可用于发展药物，这与以前的估计基本一致（约3000个），但主要靶标家族的份额有明显变化，视紫质样G蛋白偶联受体（GPCR）和蛋白激酶数量相对减少，蛋白水解酶数量相对增加。     

靶向性蛋白激酶B1和环氧合酶-2 shRNA腺病毒载体的构建和在人胃癌细胞的表达

Objective To construct a short hairpin RNA (shRNA) adenovirus vector targeting protein kinase BI (PKB1/Akt1) and cyclooxygenase-2 (COX-2) and observe their expression in human gastric carcinoma cell line SGC-7901. Methods Akt1 and COX-2 shRNA expression frames were sub-cloned to pGSadeno adenovirus vector by homologous recombination technology to construct pGSadeno-Aktl + COX-2 ( pGSadeno-A + C) vector. Furthermore after screening and amplification,recombinant ade-novirus vector was digested with Pacl and transfected into HEK293 cells. The replication adenovirus rAd5-A + C was packed and amplified in the HEK293 cells, and its titer was detected. After human SGC-7901 cells in vitro were transfected by rAd5-A + C,Akt1 and COX-2 mRNA and protein expression levels were detected by real-time PCR and Western blot respectively. Compared with rAdS-A + C,SGC-7901 and gen-eral rAd5-HK were selected as the negative controls. Results The recombinant adenovirus rAd5-A + C was constructed successfully and its titer reached 1.0 ×1010 pfu/ml. Aktl and COX-2 mRNA expression was downregulated significantly, and their ACt values ( 12.26±0.05 and 5.41±0.09 respectively ) were higher than rAd5-HK group (10.63±0.02 and 3.75 +0.08 respectively) and control group (10.57± 0.02 and 3.73±0.08 respectively) (P <0.01 ). There was no significant difference between rAd5-HK and control groups (P >0.05). Aktl and COX-2 protein expression was downregulated by 70.5% and 63.7% respectively ( P < 0.01 ) in rAd5-HK group as compared with control group ( P > 0.05 ). Conclu-sion The shRNA aclenovirus vector targeting Akt1 and COX-2 can specifically inhibit Akt1 and COX-2 expression,and this may be a new strategy in gastric carcinoma gene therapy targeting Akt1 and COX-2.     

卵巢癌中蛋白激酶C的表达及其临床意义

目的　探讨上皮性卵巢癌组织蛋白激酶C (proteinkinaseC ,PKC)的表达和化疗耐药的关系 ,以及与P -糖蛋白 (P -gp)的相关性。方法　用免疫组化S -P法检测 35例卵巢上皮性肿瘤组织、 2 0例卵巢良性肿瘤组织和 2 0例正常卵巢组织中PKC和P -gp的表达 ,并进行相关临床因素分析。结果　①PKC、P -gp在卵巢恶性肿瘤中的表达明显高于在良性及正常组织中的表达 ;并且PKC和P -gp的表达有相关性 (P <0 0 5 ) ;②卵巢癌PKC的表达与临床病理因素无直接关系 ;③恶性肿瘤中 ,初治和复发的PKC表达阳性率分别为 34 8%和 75 % ;④化疗对PKC表达阳性和阴性卵巢癌患者的有效率分别为 2 3 5 %、 6 6 7% (P <0 0 5 ) ;⑤PKC表达阴性患者的预后优于阳性者 (P =0 0 39)。结论　PKC表达与卵巢癌组织化疗耐药明显相关 ,可能在P -gp介导的卵巢癌多药耐药中起重要作用。     

大肠杆菌脂多糖对人红细胞蛋白激酶C活性的影响

正常成人红细胞与大肠杆菌脂多糖温育后,胞膜蛋白激酶C活性显著增加,脂多糖这种作用呈现剂量和时间依赖性。结果提示脂多糖能激活红细胞蛋白激酶C。