荧光RT—PCR快速检测禽流感病毒H5亚型的研究

本研究根据禽流感病毒H5亚型的RNA4节段，设计、合成多对引物、探针，并通过筛选获得灵敏度、特异性好的组合，在此基础上对荧光RT-PCR反应体系中的各组分进行优化，并建立对各种禽类样品中病毒核酸的提取方法。通过对阳性鸡胚尿囊液及人工攻毒的SPF鸡、肉鸡、肉鸭的各脏器进行检测，并与传统鸡胚病毒分离进行对比，显示该方法与传统鸡胚病毒分离灵敏度接近，但检测时间由原来的21天缩短为4小时。     

Cr:LiSAF激光在组织自体荧光光谱研究中的应用

目的　该文以Cr:liSAF激光作为激发光源 ,针对生物大分子设计了荧光实验 ,以探讨其在组织自体荧光研究中的应用。方法　氙灯泵浦Cr:LiSAF二次谐波用来产生可调谐蓝光脉冲激光输出 ,并设计了自体荧光试验。结果　最后设计并实现了可调谐蓝光脉冲激光输出 ,得到了良好的输出特性。结论　氙灯泵浦Cr:LiSAF二次谐波产生可调谐蓝光脉冲激光输出得到了良好的输出特性 ,该实验为进一步研究肿瘤组织与正常组织自体荧光产生机制打下了基础。     

东部马脑炎病毒E2基因与GM-CSF共表达质粒的构建及其免疫原性初步研究

目的:利用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)作为基因佐剂,提高东部马脑炎病毒E2基因重组质粒的免疫效果.方法:分别扩增E2基因与GM-CSF基因,连接进入含有内部核糖体插入位点(IRES)的真核表达载体中,构建共表达质粒.Lipofectamine2000介导转染真核细胞BHK-21,反转录PCR检测E2和GM-CSF两个基因的转录,Western印迹法和间接免疫荧光法(IFA)检测细胞内E2基因表达产物的抗原性.通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠,IFA法测定血清抗体效价,FACS测定免疫小鼠脾细胞中CD4 /CD8 淋巴细胞构成比,初步观察共表达质粒的免疫原性.结果:经酶切鉴定与序列测定证明重组共表达质粒中含有E2和GM-CSF两个基因且序列正确.转染细胞的反转录PCR可见E2和GM-CSF两个基因的转录.Western印迹结果可见转染细胞的裂解液在相对分子质量50 000位置有特异性条带.将转染细胞制成荧光抗原片,经IFA检测可见胞浆中出现特异荧光.免疫小鼠的最高血清抗体效价为1:160,但细胞免疫未观察到明显的提高.结论:构建的共表达质粒pE2-IRES-mGM-CSF具有良好的免疫原性,能有效刺激小鼠特异性体液免疫应答,提高了E2基因重组质粒诱导的血清抗体效价.     

UF-100型全自动尿液沉渣检测仪测定参考范围调查

目的　确定UF - 10 0型全自动尿液沉渣检测仪检测健康人尿沉渣检测的参考值范围。方法　用UF - 10 0型全自动尿液沉渣检测仪随机检测 5 2 0例健康人不离心尿液标本 ,对尿液沉渣进行分析。结果　尿液中红细胞 (RBC)、白细胞 (WBC)、上皮细胞 (EC)、管型 (CAST)各年龄组之间检测值经 F 检验 ,差异无显著意义 (P >0 .0 5 ) ,但男、女性别之间差异有显著意义 (P <0 .0 5 )。结论　尿液RBC、WBC、EC的多少与年龄无关 ,但与性别有关。健康人参考值的确立 ,为尿液常规检验定量标准化和临床应用提供了依据     

整合素和转化生长因子β受体在瘢痕组织中表达相关性的定量研究

目的了解整合素与TGF-β受体在增生性瘢痕形成过程中的相互关系.方法采用荧光定量PCR法,分别测定经原代细胞培养后,瘢痕成纤维细胞中整合素α1、β1与TGF-βR mRNA的表达量,并对两者间的表达强度进行相关分析.结果整合素α1和β1与TGF-βRⅠ间在表达的强度上,均成正相关的关系(r=0.74、0.68,P＜0.05).结论整合素和TGF-β受体在瘢痕形成的过程中,可能存在着相互协同和促进的作用.     

T7 RNA聚合酶催化的荧光扩增技术检测人CEA

目的 建立检测人CEA的T7 RNA聚合酶催化的荧光扩增技术.方法 以亲和素作为连接分子,连接生物素化的检测抗体和生物素化的DNA,加入T7RNA聚合酶进行转录扩增反应,对生成的RNA产物进行荧光检测,并同时进行夹心ELISA方法检测人CEA.结果 成功的建立了检测人CEA的T7 RNA聚合酶催化的荧光扩增技术,其检测CEA的灵敏度达2×10 -3 ng/ml,比夹心EL ISA 方法灵敏度高125倍.结论 T7 RNA聚合酶催化的荧光扩增技术较夹心ELISA方法具有更高的敏感性,有可能作为一种新的检测方法用于临床的早期诊断.     

荧光定量PCR法筛查混合血浆中HCV的临床意义

输血是感染丙型肝炎的主要传播途径。我国在九十年代开始对献血员进行抗一HCVELISA法检测，较好地控制了输血后丙型肝炎的传染。但因“窗口期”、病毒变异、免疫静默感染等原因，血清学方法筛查丙型肝炎抗体仍存在一定的漏检，因而可能会造成少数患者输血后感染HCV。为了解我市献血员中（抗-HCV阴性）隐匿性HCV感染状况，笔者采用FQ—PCR方法对2000例抗-HCV阴性献血员血液进行FQ—PCR检测，现报告如下。     

荧光分析法测定血清中微量硒

为测定血清中微量硒,较低温度消化后,用2,3-二氨基萘为试剂,以荧光法测定,取得了满意的结果。方法简便快速,结果稳定准确。血清中加入标准硒,8次测定的回收率为96.6％～102.4％,平均值±标准差为99.6±1.8％。