JNK信号通路在游离胆固醇诱导巨噬细胞凋亡中的作用

目的 研究JNK信号通路在游离胆固醇诱导巨噬细胞凋亡中的作用.方法 收集兔腹腔巨噬细胞进行体外培养,使用100μg/ml乙酰低密度脂蛋白及10μg/ml胆固醇乙酰转移酶抑制剂-58035促进FC聚集,以JNK特异性抑制剂SP600125进行干预,Annexin-V和PI双染后用流式细胞仪检测细胞凋亡,用Western-bolt检测JNK蛋白表达.结果 普通培养基孵育的巨噬细胞无磷酸化JNK表达,只有少量细胞凋亡,普通培养基加上胆固醇乙酰转移酶抑制剂和乙酰低密度脂蛋白孵育的巨噬细胞磷酸化JNK表达明显,8h后凋亡细胞占总细胞的(19.8±0.6)%;使用JNK特异性抑制剂SP600125可以有效抑制JNK活性,减少细胞凋亡.结论 游离胆固醇聚集是诱导巨噬细胞凋亡的重要原因,JNK信号途径参与这一过程,JNK特异性抑制剂SP600125通过抑制JNK活性对游离胆固醇诱导的巨噬细胞凋亡具有保护作用.     

白藜芦醇对戊四氮致痫大鼠脑脊液、血清S1OOB蛋白的影响

目的 研究白藜芦醇(Res)对戊四氮致痫大鼠脑脊液、血清S100B蛋白的影响.方法 采用戊四氮(PTZ)腹腔注射建立慢性癫痫模型,造模成功后予以Res(15 mg/kg·d)灌胃干预10 d;采用酶联免疫吸附法测定脑脊液、血清S100B蛋白含量,海马标本行Nissl染色.结果 经28 d连续给药,18只大鼠符合Racine点燃标准,Res干预组大鼠痫性发作潜伏期明显延长,且发作时间明显低于癫痫模型组、二甲基亚砜组(P＜0.05).海马Nissl染色提示Res干预对大鼠海马CA1、CA3区神经元有保护作用(P＜0.05),而对齿状回保护作用不明显(P＞0.05).Res干预组大鼠脑脊液、血清S100B蛋白含量低于癫痫模型组、二甲基亚砜组(P＜0.05).结论 Res降低PTZ致痫大鼠脑脊液、血清S100B蛋白含量,或许减缓癫痫发作脑损伤发挥神经保护作用.     

吡格列酮治疗血管性痴呆的实验研究

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)激动剂吡格列酮对血管性痴呆(VD)的治疗作用.方法 将SD大鼠随机分为假手术组、VD组、吡格列酮高剂量[20 mg/(kg·d)]组及低剂量[5 mg/(kg·d)]组,采用Pulsinelli改良四血管结扎法建立VD模型;各组予以相应的药物干预7 d;检测各组大鼠Morris水迷宫定航试验潜伏期;应用免疫组化法观察脑组织PPARγ阳性神经元数及PPARγ的表达.结果 与VD组相比,吡格列酮高、低剂量组大鼠定航试验潜伏期明显缩短(均P<0.01);皮质区PPARγ阳性神经元数量及PPARγ表达量明显增加(均P<0.01);高剂量组的改变更明显.结论 吡格列酮可有效改善VD大鼠的认知功能,其神经保护作用可能与增加神经元PPARγ表达有关,并且呈剂量依赖性.     

硫酸化岩藻糖单糖的合成

目的 制备硫酸化岩藻糖单糖。方法 以C2-位羟基裸露、C3,4-位羟基异亚丙基缩醛保护的岩藻糖乙硫苷作为原料,经过2-亚甲基萘化、脱保护、氯硫酸异丁酯化等5步反应得到目标化合物Ⅰ。结果与结论 收率49.8%,目标化合物Ⅰ的结构经¹HNMR、¹³CNMR及HRMS(ESI)确证。该方法为含硫酸化岩藻糖化合物的合成奠定了基础。     

PI3K/Akt-eNOS-NO信号通路与脑缺血后适应的研究进展

缺血后适应对缺血性脑卒中具有内源性保护作用,其机制尚未完全阐明.PI3 K/Akt信号通路作为细胞内重要信号转导通路之一,通过影响下游多种效应分子的活化状态,达到对缺血性脑卒中的神经保护作用.缺血后适应通过激活PI3 K/Akt信号通路,从而激活下游内源性eNOS-NO系统,实现多条途径保护缺血脑组织.     

蝙蝠葛酚性碱与褪黑素对缺血再灌注损伤神经元的作用比较

BACKGROUND： Recent studies have demonstrated that phenolic alkaloids from Menispermum dauricum （PAMD） can protect the heart and brain from ischemia/reperfusion injury, and promote neuron survival by inhibiting neuronal Bax and upregulating Bcl-2 expression following ischemia/reperfusion.
OBJECTIVE： To investigate the neuroprotective effects of PAMD versus exogenous melatonin against ischemia/reperfusion injury.
DESIGN, TIME AND SETTING： Observation and comparison experiments at a cellular level were performed at the Department of Biochemistry and Molecular Biology, Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology between February 2007 and February 2008.
MATERIALS： PAMD （95% purity） was provided by Kunming Institute of Botany, Chinese Academy of Sciences; melatonin was provided by Sigma, USA.
METHODS： N2a mouse neuroblastoma cells were cultured in vitro deprived of glucose, serum and oxygen for 90 minutes, then cultured in normal medium containing different concentrations of PAMD （0.1, 1.0, 10 mg/L） or melatonin （1, 10, and 100 μmol/L）. Cells cultured in normal conditions served as a control.
MAIN OUTCOME MEASURES： The culture solution was collected to determine the content of ex- citatory neurotransmitters such as glutamic acid and aspartic acid; cell viability was detected by MTT methods; reactive oxygen species production was determined by fluorescence spectroscopy; mito- chondrial transmembrane potential （？Ψm） was detected by laser confocal scanning; cytochrome C was measured by western blotting; and caspase-3 activity was determined by visible spectropho- tometry.
RESULTS： Melatonin and PAMD both promoted oxygen-glucose-serum deprivation-mediated N2a cell survival （P 〈 0.01） and inhibited glutamic acid release （P 〈 0.01）, but melatonin did not inhibit aspartic acid production. The protective effects were the strongest using melatonin 100 μmol/L and PAMD 10 mg/L, so subsequent experiments were the performed at those doses. Although PAMD could no longer maintain mitochondrial transmembrane potential 6 hours after reperfusion, its in- hibitory effects on cytochrome C release from mitochondria and scavengers of reactive oxygen species were stronger than those of melatonin （P 〈 0.01）. However, its inhibitory effect on caspase-3 activity was weaker than that of melatonin： PAMD could inhibit caspase-3 activity 12 hours after reperfusion （P 〈 0.01）, but melatonin inhibited caspase-3 activity 28 hours after reperfusion （P 〈 0.01）.
CONCLUSION： The results show that melatonin and PAMD have neuroprotective effects, but that the mechanisms are varied. Melatonin can maintain mitochondrial transmembrane potential, but its inhibitory effects on cytochrome C release, caspase-3 activity, and reactive oxygen species scav-enging are different from those of PAMD.     

嗅鞘细胞条件培养液中神经生长因子的保护作用

背景：近年研究证实嗅鞘细胞具有支持和促进多种神经元存活和轴突再生的作用,与其分泌的神经营养活性物质相关,如神经生长因子、脑源性神经营养因子等。神经营养活性物质在维持神经元存活、生长以及损伤后修复与再生方面的作用值得关注。 目的：探讨神经生长因子是否在嗅鞘细胞条件培养液的神经保护中发挥重要作用。 设计、时间及地点：细胞学体外对照观察,于2006-01/2007-03在解放军南京军区南京总医院神经内科实验室完成。 材料：成年SD大鼠30只用于嗅鞘细胞培养,出生24 h内的SD乳鼠60只用于脑海马神经元培养。 方法：采用差速贴壁法纯化大鼠嗅鞘细胞,添加Forskolin和碱性成纤维细胞生长因子促进细胞增殖,培养至10 d,取生长状态良好的细胞,按1×109 L-1密度接种,待细胞贴壁后加入含B27的Neurobasal培养基,48 h后收集上清液。待所有嗅鞘细胞条件培养液收集完毕后,将其混合,低温离心后收集浓缩的嗅鞘细胞条件培养液,-80 ℃保存备用。取体外分离培养的乳鼠脑海马神经元,设立正常组、谷氨酸损伤模型组、嗅鞘细胞条件培养液组、抗神经生长因子抗体+嗅鞘细胞条件培养液组。 主要观察指标：海马神经元活性,上清液中乳酸脱氢酶浓度,神经元凋亡率。 结果：与正常组比较,其余3组神经元活性均明显下降（P < 0.05或0.01）;与谷氨酸损伤模型组比较,嗅鞘细胞条件培养液组、抗神经生长因子抗体+嗅鞘细胞条件培养液组神经元活性均明显增高（P < 0.01或0.05）,且前者升高幅度大于后者（F=5.85,P < 0.05）。与正常组比较,其余3组乳酸脱氢酶浓度及神经元凋亡率均明显增高（P < 0.05或0.01）;与谷氨酸损伤模型组比较,嗅鞘细胞条件培养液组、抗神经生长因子抗体+嗅鞘细胞条件培养液组乳酸脱氢酶浓度及神经元凋亡率均明显下降（P < 0.01或0.05）,且前者下降幅度大于后者（F =5.04,F =5.16,P < 0.05）。 结论：嗅鞘细胞条件培养液可提高损伤海马神经元活性,抑制上清液中乳酸脱氢酶释放和神经元凋亡;消除神经生长因子后,以上保护作用减弱,提示嗅鞘细胞条件培养液中存在多种营养物质共同发挥神经保护作用,尤以神经生长因子为重。     

重视供肝机械灌注研究,推动肝移植高质量发展

随着器官捐献数量不断增加和扩大标准供者(ECD)供肝定义不断拓展,供肝质量必然成为影响肝移植高质量发展的突出问题,也是相关领域的研究重点.最大限度解决器官短缺和推动器官移植高质量发展是我国器官捐献与移植事业发展的方向.近年来,利用机械灌注(MP)对供肝进行灌注、保存、评估及修复,已成为当前国际上提高肝移植质量的研究热点...     

基于AMPK/mTOR/ULK1通路探讨解毒通络保肾方改善糖尿病肾脏疾病的作用机制

目的 通过动物实验及细胞实验观察解毒通络保肾方对糖尿病肾脏疾病(DKD)大鼠肾脏病理形态及大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)增殖的影响,探讨其改善DKD的作用机制。方法 (1)从85只健康雄性SD大鼠中任取10只纳入正常组,其余大鼠采用高脂饲料喂养与链脲佐菌素注射诱导为DKD模型。造模成功的大鼠按体质量随机分为模型组,厄贝沙坦组(16 mg/kg),解毒通络保肾方低、中、高剂量组(0.5、1.0、2.0 g/kg)。正常组及模型组给予等量生理盐水灌胃。每日1次,连续灌胃8周。采用光学显微镜和透射电镜观察肾脏组织病理形态,蛋白质印迹法检测肾脏组织自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin-1)、自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)、泛素结合蛋白P62(P62)、自噬相关蛋白5(ATG5)的表达。(2)培养HBZY-1细胞,分为空白对照组(5.5 mmol/L葡萄糖),模型组(30 mmol/L葡萄糖),解毒通络保肾方低、中、高剂量组(50、100、200 mg/L),厄贝沙坦组(5μmol/L)。采用CCK8法检测细胞增殖率,划痕实验检测细胞迁移能力,蛋白质印迹法检测LC...     

Megalin和cubilin生理表达与相关疾病

Megalin和cubilin是两个大分子、多配体的受体糖蛋白,广泛分布于极化的上皮细胞内。在体内,尤其在肾脏,它们通过胞吞作用在介导蛋白质和许多维生素的吸收方面发挥着重要的生理功能。两受体任何一方功能异常或缺失会出现明显的蛋白尿和某些肾病,因此两种受体的病理生理作用越来越受到人们的关注。本文就Megalin和cubilin的生理功能及其相关疾病简要综述。