妇科肿瘤组织中线粒体DNA基因突变的研究

目的 探讨原发性肿瘤组织中线粒体DNA(mtDNA)基因突变及其在肿瘤发生、发展中的作用。方法 采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR—SSCP)及DNA测序方法,对32例妇科恶性肿瘤患者(观察组)、8例妇科良性肿瘤患者(对照组)的肿瘤组织和瘤旁正常组织标本进行mtDNA基因突变检测。观察组中子宫颈癌5例,子宫内膜癌10例,卵巢癌17例。对照组中,卵巢上皮性肿瘤4例,子宫肌瘤4例。结果 观察组mtDNA基因突变率和多态性频率分别为68．8％和56．3％。对照组mtDNA基因突变率和多态性频率分别为2／8和4／8。两组mtDNA基因突变率比较,差异有显著性(P＜0．05);mtDNA基因突变热点位于Cytb基因区;mtDNA基因突变为多基因、多位点的突变,其中63．6％涉及到2个以上的基因。结论 在妇科恶性肿瘤组织中,存在mtDNA基因编码区的高频率变异,这种变异可能是妇科恶性肿瘤发生机理中的一个重要的核外分子遗传学改变。     

丙型肝炎病毒感染孕妇羊水中丙型肝炎病毒RNA检测的临床意义

目的 通过检测丙型肝炎病毒（HCV）感染孕妇的羊水中HCV RNA,探讨HCV母婴传播的途径及HCV基因型。方法 应用荧光定量聚合酶链反应（PCR）和逆转录巢式PCR（RT－nPCR)技术,检测孕妇血清和羊水中的HCV RNA。对34例（研究组）血清HCV RNA阳性标本采用酶切分型法检测,依据限制性片段长度多态（RFLP）图谱判断HCV基因型。另选40例正常孕妇（对照组）的血清和羊水作为对照。结果 在研究组孕妇羊水中仅有2例（5．95）检测出HCV RNA,病毒滴度分别为10^5、10^6拷贝／ml;对照组孕妇血清和羊水标本中均未检测出HCV RNA。研究组孕妇血清中HCV RNA阳性标本HCV基因分型为：Ⅱ型27例（79．4％）,Ⅲ型5例（14．7％）,Ⅱ／Ⅲ型混合型2例（5．9％）。结论 HCV感染孕妇的羊水中HCV RNA阳性率极低,提示羊水不是HCV母婴传播的主要途径。HCV感染孕妇的HCV RNA基因型以Ⅱ型为主。     

M-CSF targeting into LCL nucleus behaves as a malignancy promotor

Objective: To investigate the functions of nM-CSF in malignant cells. Methods: recombinant M-CSF was targeted into cell nucleus by employing a eukaryotic expression plasmid vector pCMV/myc/nuc. The constructed plasmid was transfected into cells of EBV transformed lymphoblastoid cell line (LCL). RT-PCR, Western blot and immunofluorescent staining showed that recombinant M-CSF was localized into LCL cell nucleus. The transgenic cells showed elevated proliferation potential, enhanced resistance to apoptosis and increased ability of in vitro migration. Conclusion: Nucleus presenting M-CSF might act as a promoting factor in the processes of cellmalignancy.     

脐带血HLAⅠ类定型研究

分别采用血清方法和PCR-SSP基因定型方法对102份脐带血HLA-A,-B位点进行了检测,经对比分析结果显示血清学近18.6%不能得出满意结果,HLA-A,-B位点错定率分别在6.1%和10.8%,总错误率16.9%。我们设计了16条引物,以PCR-SSP方法特异性扩增B15等位基因,并与血清学做了比较,发现大多数B15裂解物的血清学检测结果是错误的。     

血清饥饿和表皮生长因子上调人肝癌细胞中血管内皮生长因子mRNA表达的研究

目的探讨血清饥饿及表皮生长因子(EGF)对人肝癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的调节.方法以次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)为内标,将VEGF与HPRT比值作为VEGF表达水平的参数,对VEGF PCR产物相对定量,分析血清饥饿和5,25ng/ml浓度的EGF在6h时对人肺癌细胞VEGF mRNA表达水平的影响.结果对照组、血清饥饿组、5ng/ml、25ng/ml EGF刺激组VEGF mRNA表达的相对量分别为(24.73±3.19)%、(52.73±9.58)%、(76.30±10.78)%和(114.87±13.55)%,并且EGF组VEGF mRNA的表达水平比血清饥饿组高(P<0.05)、25ng/ml EGF刺激组明显高于5ng/ml EGF刺激组(P<0.05).结论血清饥饿和EGF能刺激人肝癌细胞VEGF基因的表达,提示在人肝癌细胞生长过程中,实质性肝癌细胞的生长可能是呈现出一种"周期性爆炸性生长"的方式.     

群体血管紧张素原基因T174突变检测与心肌梗死临床意义

血管紧张素原（angiotensinogen，AGT）是体内惟一的血管紧张素Ⅱ的前体，血管紧张素Ⅱ有很强的升压作用，其作用较去甲肾上腺素强数十倍，更重要的是具有促醛固酮分泌的作用。在AGT基因的第二个外显子存在多态性，此种多态性在心血管疾病发病患者中其基因型等位基因频率在民族、地域等方面存在差异，结论尚不统一。为了解AGT基因在人群中的分布，以及和某些常见疾病及相关因素的联系，我们进行了AGT基因T174M多态性与群体心肌梗死发病的相关性探讨。现报告如下。     

抗菌肽Alloferon-1串联式重组表达及其表达产物体外抗肿瘤活性的研究

目的:构建串联式表达Alloferon-1的原核重组表达系统,检测合成及重组表达的Alloferon-1体外抗肿瘤细胞活性。方法:采用连接引物PCR法,构建含6×His-EK-8×Alloferon-1-EK-6×His序列的人工融合基因;采用常规分子生物学方法克隆并构建该人工融合基因及其原核表达系统;采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统了解目的重组产物8×rAlloferon-1-EK表达情况和产量;采用Ni-NTA亲和层析及EK酶切和Sephadex G-50层析法提纯8×rAlloferon-1-EK及rAlloferon-1-EK;采用MTT法检测rAlloferon-1-EK体外抑制KB、SGC和HL-60肿瘤细胞增殖的作用,并与直接合成的Alloferon-1(sAlloferon-1)和Alloferon-1-EK(sAlloferon-1-EK)的抗肿瘤作用比较。结果:获得了序列正确的目的人工融合基因克隆及其原核表达系统pET42a-8×rAlloferon-1-EK-E.coliBLDE3。在IPTG诱导下,该原核重组表达系统可表达串联式目的重组蛋白8×rAlloferon-1-EK,其产量约为细菌总蛋白的30%。Ni-NTA和Sephadex G-50层析后,可分别获得8×rAlloferon-1-EK和rAlloferon-1-EK。在25~100μg/ml剂量范围内,sAlloferon-1、sAlloferon-1-EK和rAlloferon-1、rAlloferon-1-EK均有明显抑制KB、SGC和HL-60肿瘤细胞生长及增殖的效果(P<0.01),且四者抑制作用无明显差异(P>0.05)。结论:本研究成功构建了串联表达rAlloferon-1的原核表达系统,其表达产物具有与合成的Alloferon-1和Alloferon-1-EK相似的体外抗肿瘤细胞活性。     

肠杆菌属细菌高产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的表达状况研究

目的 研究超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和高产AmpC酶在肠杆菌属细菌的表达状况以及ESBLs的基因型,了解肠杆菌属细菌对β-内酰胺类抗生素的耐药机制。方法 采用酶提取物三维及抑制试验检测121株肠杆菌属细菌高产AmpC酶和产ESBLs的情况;采用聚合酶链反应检测产ESBLs菌株的基因型。结果 在121株肠杆菌属细菌中,酶提取物三维及抑制试验共检出产ESBLs菌株29株（24.0%）,高产AmpC酶并产ESBLs菌株14株（11.5%）,高产AmpC酶并产ESBLs的菌株占总高产AmpC酶菌株的43.8%（14/32）。在25株PCR扩增阳性菌株中,TEM型为7株,SHV型10株,CTX-M-1组6株,CTX-M-13组7株,OXA组为阴性,其中有5株同时检测出两种ESBLs基因型。结论 除高产AmpC酶外,产ESBLs也是肠杆菌属细菌对β-内酰胺类抗生素耐药的重要因素之一。肠杆菌属细菌产ESBLs的基因型包括TEM、SHV、CTX-M型,以CTX-M型为主。     

不同鼠疫检测技术在河北省鼠疫监测中的应用研究

目的通过用鼠疫血凝试验、胶体金标记免疫层析(金标)和ELISA 3种方法检测啮齿动物血清,用金标、ELISA、PCR与鼠疫反向血凝试验和细菌分离检测啮齿动物脏器,评价其在鼠疫监测中的应用效果。方法用鼠疫血凝试验、金标和ELISA 3种方法检测啮齿动物血清;用金标、ELISA、PCR、鼠疫反向血凝试验和细菌分离检测啮齿动物脏器。结果鼠疫血凝试验、金标和ELISA 3种方法对啮齿动物血清的阳性检出率分别为0.32%、0.32%和1.26%。金标、ELISA、PCR、鼠疫反向血凝试验和细菌分离对啮齿动物脏器的阳性检出率分别为3.15%、0.70%、4.90%、0.70%和0.70%。结论金标、ELISA、PCR值得推广应用,非常适合基层和快速诊断应用。     

2006年广州市登革热媒介及其带病毒现状调查

目的调查广州市登革热传播媒介的孳生情况及媒介蚊虫的登革病毒自然感染率,为今后预防和控制登革热流行提供科学依据。方法采用蚊幼虫调查法,调查广州市8区登革热媒介蚊虫的主要孳生情况,再以采集的蚊虫标本为研究对象,用反转录聚合酶链反应技术检测所取标本中是否携带登革病毒。结果广州市8区调查点的容器指数以白云区、荔湾区和天河区较高,分别为68.52%、52.54%和47.20%,其他依次为越秀区、番禺区、黄埔区、海珠区和花都区,分别为46.00%、42.25%、39.06%、34.00%和31.43%。白纹伊蚊的孳生容器类型有14种,以花盆底盘、废缸罐、废桶类最高,分别占全部积水容器的54.97%、14.67%和11.64%;在261个阳性积水容器中,以废旧轮胎、废缸罐和石穴阳性率最高,阳性率分别为57.14%、54.02%和47.62%;所采集的登革热媒介蚊虫标本均不携带登革病毒。结论广州市8个区的容器指数均较高,而媒介蚊虫登革病毒自然感染率较低,存在登革热流行的基本条件,一旦有病原输入极易引起疾病的流行传播。应采取以消灭蚊虫孳生地为主的综合性防制措施,防止登革热的发生。