pEGFP-N1-GGF2质粒的构建及其在大鼠脑内的表达

目的构建pEGFP-N1-GGF2质粒，观察其在大鼠脑组织中的表达。方法采用RT-PCR方法从人胚胎脑组织总RNA中扩增出人GGF2全长序列．并克隆到增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因真核表达载体pEGFP-N1上，构建pEGFP-N1-GGF2质粒．通过脂质体将pEGFP-NI-GGF2质粒转染大鼠脑组织．荧光显微镜下观察GGF2融合蛋白在大鼠脑内表达的时间和空间分布特征。结果成功构建了pEGFP-N1-GGF2表达载体，荧光显微镜观察可见，pEGFP-N1-GGF2表达载体转染6h大鼠脑内即可见GGF2融合蛋白表达．3d时融合蛋白表达最多，7d时表达量稍有下降但仍高，14d时表达量已明显下降。GGF2融合蛋白在脑内的表达以针道为中心向周围扩散．荧光信号可达皮层深部。结论脂质体介导的pEGFP-NI-GGF2质粒能够在大鼠脑内表达GGF2融合蛋白。     

用绿色点缀居室

在居室内点缀些绿色观赏性植物，不仅可以美化环境，还能使人精神焕发，心旷神怡。     

高新科技与人文关怀的有机融合--对“绿色医院“内涵的辩证思考

我国加入WTO和医疗卫生体制改革不断深入的形势 ,对医院的生存与发展提出了严峻的挑战 ,也带来了难得的机遇。为了抓住机遇、迎接挑战 ,我院党委以“三个代表”重要思想为指导 ,开拓性地提出了创建“绿色医院”的构想。我们把“绿色医院”定位在“高新科技”加“人文关怀”上 ,并具体化为“绿色环境、绿色服务、绿色管理”三大实践 ,积极探索 2 1世纪医院发展的新模式。下面通过对高新科技和人文关怀的辩证思考来诠释“绿色医院”的内涵。一、“高新科技”加“人文关怀” ,为创建“绿色医院”提供了与时俱进的理论定位医院是医学实践的载…     

深化医院急诊改革建立急救绿色生命安全通道

随着我国经济建设的发展和人民生活水平的提高，我国人口年龄结构、职业结构和人口死因构成也发生了变化，发展急救医疗服务已成为重要课题。1996年12月乘着全国卫生工作会议的召开，我院抓住机遇，大力加强急救医疗建设；强调以病人为中心，完成医疗、社会、心理服务，改变过去以“转诊为主”的工作方式为“自主型”的工作方式；建设方针上突出急病人所急，时间就是生命的指导思想；危重患者来院后，从接诊、检查到治疗，一切环节均开绿灯，建立起“急救绿色生命安全通道。1急诊医学领域急待解决的课题“急诊不急”是当前医院的一大问题，…     

论绿色中药材生产技术

随着我国经济发展，人民生活质量的提高，促进中药材多方位的开发利用。药用植物引种栽培过程中，遭受到各种病虫害的危害，目前主要依靠化学农药防治，造成农药在中药材中的残留和环境污染等严重问题。生产无污染、优质的绿色中药材是提高中药材质量的重要环节，本文就以生物防治为基本手段的无污染新技术、新方法的研究概况与发展前景作一介绍。     

HLA-A*0201与EGFP融合蛋白表达载体的构建及其在K562细胞的表达和定位

目的:构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与HLA-A^*0201(A^*0201)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法:以RT-PCR方法克隆A^*0201cDNA,构建A^*0201-EGFP融合蛋白表达载体,转染K562细胞,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果:从两个HLA-A2阳性供者外周血细胞中克隆到A^*0201cDNA编码区全长序列。通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码,成功构建A^*0201-EGFP融合蛋白表达载体。以该质粒转染K562细胞,5h后A^*0201和EGFP的表达百分率分别为25.12±2.26、27.37±3.59,24h后表达水平无明显提高。表达的融合蛋白主要分布于细胞膜上,胞内分布较少。相反,转染空载体的细胞不表达A^*0201分子,仅表达EGFP,且其在细胞内呈弥散样分布。结论:成功构建A^*0201-EGFP融合蛋白表达载体,并在K562细胞中得到表达,表达产物主要分布于细胞膜表面,提示表达该融合蛋白的K562细胞是潜在的人工抗原提呈细胞。     

重组MHCⅠ类分子K^b-EGFP分子的构建及表达

目的 构建绿色荧光蛋白标记的MHCⅠ类分子K^b(K^b-EGFP融合蛋白)，并在哺乳动物细胞中获得功能性表达。方法 RT-PCR的方法获得小鼠MHCⅠ类分子K^b cDNA，克隆入真核表达载体pEGFP-N1中EGFP分子的上游，脂质体转染COS-7细胞，G418加压筛选获得抗性重组细胞。荧光显微镜下观测重组分子的表达及胞内定位情况。结果 分子克隆的方法获得了预期的重组质粒，质粒经DNA序列测定证实阅读框无误，转染COS-7细胞后的抗性克隆胞浆内可以观察到明亮的绿色荧光，特征性地分布于细胞质膜，及核周、膜下的囊泡结构中。结论 所构建的K^b-EGFP融合蛋白在细胞内表达后具有MHCⅠ类分子的特征性分布，提示该重组分子具有野生型MHCⅠ类分子的生物学特性和胞内分布特征，为进一步深入研究MHCⅠ类分子胞内动态分布及分子功能提供了良好的细胞和分子模型。     

siRNA抑制外源绿色荧光蛋白在neuro-2a细胞株中的表达

目的：用RNAi技术抑制哺乳动物神经元中外源报告基因的表达，并探讨该过程中RNAi的时间及剂量效应，为利用RNAi技术研究神经元基因功能提供参考。方法：采用神经细胞来源的细胞系neuro-2a小鼠神经瘤细胞为模型，将外源绿色荧光蛋白（GFP）基因转染到neuro-2a细胞内，利用体外转录法合成siRNA，分为3个剂量组对其进行干扰。结果：Neuro-2a细胞可以被有效地转染，而且siRNA在neuro-2a细胞内可以有效发挥干扰作用。这种干扰作用呈现出一定的剂量效应。结论：RNAi技术可以成功用于neuro-2a细胞抑制基因的表达，这种对GFP表达规律及RNAi剂量效应的研究为利用RNAi技术研究神经元基因功能提供了一定的理论参考和依据。     

IL-13及其变异体真核表达载体的构建表达与亚细胞定位

目的：体外构建野生型人白细胞介素-13（whIL-13）及变异型人白细胞介素-13（mhIL-13）与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融和蛋白真核表达载体，分析其在COS-7细胞中的表达和亚细胞定位。方法：以RT-PCR方法扩增whIL-13、mhIL-13全长编码基因，构建EGFP-whIL-13、EGFP-mhIL-13融和蛋白真核表达载体，转染COS-7细胞，以激光扫描共聚焦显微镜观察融合蛋白的表达及其在细胞内的分布情况。结果：两种融和蛋白表达载体均构建正确，将其转染COS-7细胞后，在阳性克隆胞浆内均可见明亮的绿色荧光，胞核空虚。结论：成功构建EGFP-whIL-13、EGFP-mhIL-13融和蛋白表达载体，并在COS-7细胞中得到表达，表达的两种融和蛋白细胞内分布特征没有区别，均位于胞浆内。     

pEGFP/hVEGF121融合蛋白真核表达载体的构建及在骨髓间质干细胞中的表达

目的：构建携带人血管内皮细胞生长因子121及绿色荧光蛋白报告基因的融合蛋白真核表达质粒并检测其在骨髓间质干细胞（MSC）中的表达。 方法： 采用PCR技术，以pCD/hVEGF121质粒为模板扩增VEGF121基因全长，采用PCR产物的粘端克隆法，将VEGF121定向克隆入pEGFP-C1的多克隆位点，构建pEGFP/hVEGF121重组质粒，酶切、PCR及序列分析鉴定，脂质体介导转染体外培养的MSC，荧光显微镜及免疫细胞化学染色检测EGFP/VEGF融合蛋白的表达。 结果： PCR、酶切及测序证实目的基因VEGF121正确连接至pEGFP-C1的多克隆位点，pEGFP/hVEGF121重组质粒转染MSC后，荧光显微镜及免疫细胞化学检测EGFP/VEGF蛋白在MSC中存在表达。 结论： 成功构建了携带人VEGF121及EGFP报告基因的融合蛋白真核表达质粒，并在MSC中获得表达，为进一步研究VEGF基因治疗缺血性心血管疾病及MSC的分化奠定了实验基础。