基础医学

20080006热量限制对人二倍体成纤维细胞衰老相关基因表达的影响／金军华…／／中华老年医学杂志．-2007，26（7）．-520～523 用RT—P隙和Westernblot方法，对含低浓度（3．0retool／L）、高浓度（22．5mmol／L）葡萄糖和正常对照组（含5．0mmol／L葡萄糖）培养条件下的人二倍体成纤维细胞IMR-90细胞衰老相关基因p16、D21和p53的mRNA和蛋白表达水平进行分析。     

白藜芦醇对PC12生长周期停滞的研究

目的 研究白藜芦醇对PC12的细胞周期停滞调节的作用.方法 应用5μmol/L,10μnol/L,20μmol/L和50μmol/L不同浓度的白藜芦醇作用于PC12,用MTT和流式细胞术观察PC12细胞周期的变化.结果 随着白藜芦醇浓度增加细胞存活率降低,流式细胞术检测发现10μmol/LRSV使细胞G0/G1期明显延长(P=0.023).而50μmol/LRSV细胞凋亡增加(P＜0.005).结论 低浓度的RS、,能够诱导PC12细胞周期停滞而高浓度的RSV诱导细胞凋亡.     

端粒与细胞衰老

端粒是现代生物学研究的热点,端粒封闭了染色体的末端并维持了染色体的稳定性,端粒的缺失与细胞的衰老有密切的关系。本文就端粒的结构和功能与细胞老化的关系进行了综述。     

肺泡Ⅱ型细胞的分离培养及年龄对其增殖的作用

目的：建立肺泡Ⅱ型细胞的分离培养方法，研究年龄对其增殖的影响。方法：应用梯度离心和贴壁培养分离大鼠肺泡Ⅱ型细胞，比较幼年、中年和老年大鼠培养肺泡Ⅱ型细胞的增殖能力。结果：证明该分离方法最终每只鼠可收获（１．１±０．６）×１０７个细胞，细胞活力９４．１％，肺泡Ⅱ型细胞纯度为（９１．６±２．４）％。肺泡Ⅱ型细胞的增殖能力均呈现幼年组＞中年组＞老年组的变化。结论：成功地建立肺泡Ⅱ型细胞的分离培养方法。老年大鼠肺泡Ⅱ型细胞增殖能力下降。     

高压氧通过干预细胞衰老相关表型改善帕金森病患者临床症状的研究

目的探讨高压氧(HBO)治疗的抗细胞衰老作用, 并分析该作用与改善帕金森病(PD)患者临床症状之间的关系。方法选取2019年2月至2020年12月在解放军第九○四医院神经内科确诊的68例PD患者作为研究对象(PD组), 选择同期该院体检健康人群54例作为对照组, PD组患者在常规药物治疗的基础上给予HBO治疗。在HBO治疗前、治疗3个疗程后, 采用帕金森病统一评定量表(UPDRS)、计时运动试验及10 m米折返运动试验判断患者运动症状;采用非运动症状筛查问卷(NMSQuest)、汉密尔顿焦虑量表(HAMA)、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、简易精神状态检查量表(MMSE)、事件相关电位P300潜伏期和波幅、帕金森病睡眠量表(PDSS)测定并判断患者的非运动症状。治疗前后采集2组人员空腹血清, 检测血清肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β及基质金属蛋白酶-3(MMP-3)水平。结果与治疗前相比, PD组患者HBO治疗3个疗程后UPDRS总评分和UPDRSⅠ、UPDRSⅡ、UPDRSⅢ评分明显降低, 计时运动试验及10 m折返运动试验结果明显改善;HAMA、HAMD评分...     

8-甲氧补骨脂素和长波紫外线在细胞光老化中对端粒缩短机制的影响

Objective To investigate the mechanism of telomere shortening through 8-methoxypsoralen(8-MOP)and subsequent ultraviolet A(UVA)irradiation-induced photoaging model in human dermal fibroblasts(HDFs).Methotis Photoaging model was established by 8-MOP+UVA in skin HDFs.Flow cytometer.enzyme eytochemistry,immunofluorescence,Westem blot and Real-time PCR were employed.Results The percentage of G1 blockage of 8-MOP+UVA group were higher than that of control group at 24、48、72 h and 7 d(61.4%±1.5% vs 32.8%±1.5%.69.5%±2.2% vs 44.9% ±2.3%.88.2%±1.6% vs 59.8%±1.4%,90.7%±2.5% vs 68.5%±2.6%.all P＜0.01).The expression of SA-β-Gal of 8-MOP+UVA group were higher than that of control group at 24、48、72 h and 7 d(34.87%±0.59% vs 7.11%±0.78%,59.38%±0.46% vs 10.57%±0.47%.72.46%±0.98% vs 11.67%±0.87%,94.33%±0.13% vs 12.04%±0.12%,all P＜0.01).8-MOP+UVA treatment could significantly aggravate the oxidative DNA damages,the percentage of 8-oxo-dG positive cell of 8-MOP+UVA group(95.78%±0.14%)were significantly higher than that of control group(7.69%±0.09%,P＜0.01),8-MOP group(9.76%±0.11%,P＜0.01)and UVA group(35.29%±0.14%,P＜0.05).8-MOP+UVA treatment could accelerate the telomere shortening.the relative length of telomere of 8-MOP +UVA group were 2.57±0.05 lower than that of control group(6.63±0.12.P＜0.01).The levels of P53,P21WAF-1 and P16INK-4a of 8-MOP+UVA group were higher than that of control group(3.00±0.88 vs 0.54±0.10,2.50±0.51 vs 0.42±0.06,2.21±0.34 vs 0.38±0.05,all P＜0.01).Conclusion 8-MOP+UVA-induced photoaging of HDFs can be mediated though the regulation of telomere and subsequent P53-dependent signaling pathways.     

造血干细胞衰老的研究方法及其意义

学术背景:机体衰老过程中造血干细胞的数量和质量是逐渐降低的.造血干细胞衰老实验研究主要包括造血干细胞衰老模型的建立和衰老机制的探讨.目的:概述造血干细胞衰老的研究方法及其意义,为延缓造血干细胞衰老提供参考.检索策略:应用计算机检索PubMed数据库2000-01/2007-10期间有关造血干细胞衰老的文章,检索词"Hematopoietic stem cell aging",限定文章语言种类为English.同时计算机检索维普数据库2000-01/2007-10期间相关文章,检索词"造血干细胞、衰老",限定文章语言种类为中文.并查阅与干细胞实验研究有关的书籍.对资料进行初审,选取符合要求的有关文章查找全文.纳入标准:①有关细胞衰老机制检测的研究.②造血干细胞衰老机制的相关性研究.排除标准:重复性研究类文章.共收集到62篇相关文献,30篇文献符合纳入标准,排除的32篇为内容陈旧或重复文献.文献评价:符合纳入标准的30篇文献中,12篇涉及造血干细胞与衰老机制研究,16篇涉及造血干细胞衰老常用的实验研究方法及其意义,2篇涉及存在的问题与展望.资料综合:衰老是生物体不可避免的自然规律.衰老过程中造血干细胞经历了数量和质量上的衰竭,可以通过造血干细胞连续性移植、自我更新和多向分化能力检测,细胞周期分析、β-半乳糖苷酶测定建立细胞衰老模型,并运用Southern Blot、Western Blot、反转录-聚合酶链反应 (RT-PCR)、基因芯片等方法检测与衰老相关的端粒、蛋白及基因表达的改变来研究造血干细胞衰老的机制及延缓造血干细胞衰老的途径.结论:虽然衰老是无法抗拒的,但延缓衰老却是可能的,因此对造血干细胞衰老机制的研究将助于更深入阐述造血干细胞和衰老的生物学,并为延缓造血干细胞衰老的研究打下坚实的理论基础.     

DNA甲基化对基因表达的影响及其在衰老过程中的表现

DNA甲基化是真核细胞基因组重要修饰方式之一,参与基因的表达调控。由甲基化结合蛋白参与的复合体在抑制基因表达中发挥着重要作用。DNA甲基化表型的维持需要DNA甲基转移酶以催化“半甲基化”DNA的甲基化。细胞在增龄过程中甲基化水平明显降低,对该过程的基因表达可能具有一定的调控作用。     

神经细胞老化过程中细胞内脂质过氧化反应程度和超氧化歧化酶活性的动态变化

目的：观察体外培养的小鼠神经母细胞瘤细胞A2无血清培养条件下分化成神经细胞过程中，细胞内脂质过氧化的主要产物-丙二醛和自由基清除剂超氧化物歧化酶的变化，探讨脂质过氧化反应程度和抗氧化能力与细胞老化的相关性。方法：实验于2004—04／2005—02在上海第二医科大学附属仁济医院神经内科神经生物学实验室进行。①建立神经细胞老化实验模型：传代培养的小鼠神经母细胞瘤细胞A2中加入无血清培养液后，在37℃、含体积分数为0．05的CO2的空气中培养，24h后换培养液，以后每隔3d更换培养液；按不同的培养天数分为培养1，7和14d组。各组在培养至相应的天数后终止培养。②评估神经细胞变化的指标检测：采用显微荧光分光光度计测定细胞老化指标脂褐素水平（相对荧光值）反映细胞老化程度；以比色法测定细胞内丙二醛浓度评估细胞脂质过氧化程度，亚硝酸盐比色法得出超氧化物歧化酶活性反映细胞的抗氧化能力。结果：①细胞内脂褐素相对荧光值：培养1，7和14d组分别是（11．55&;#177;0．9）％，（22．41&;#177;1．99）％和（29．51&;#177;4．57）％，组间比较差异显著（F=478．04，P〈0．01）。②丙二醛浓度：培养1，7和14d组分别是（0．90&;#177;0．20），（1．91&;#177;0．19）和（2．98&;#177;0．20）μmol／L；组间比较差异显著（F=148．31，P〈0．01）。③超氧化物歧化酶活性：培养1，7和14d组分别是（685．30&;#177;107．85），（372．07&;#177;74．35）和（175．04&;#177;29．67）μkat／L：组间比较差异显著（F=66．10，P〈0．01）。结论：①随着无血清培养天数的增加，小鼠神经母细胞瘤细胞A2细胞内脂褐素逐渐增多，细胞在不断衰老。②细胞内丙二醛浓度随细胞老化而不断增加，而超氧化物歧化酶活性却随着细胞老化而下降。说明神经细胞的老化与细胞内脂质过氧化反应呈正相关，与细胞的抗氧化能力呈负相关。③体外神经细胞老化实验研究模型是科学和客观的，具有很强的应用价值。     

血管内皮细胞在传代中的衰老与线粒体膜电位的变化

目的探讨血管内皮细胞在传代过程中的衰老过程及机制。方法新鲜人脐静脉内皮细胞体外培养,免疫组织化学鉴定;电镜观察细胞结构;流式细胞术检测传代细胞周期;特异染料法检测细胞线粒体膜电位,流式细胞仪分析。结果在传代过程中,细胞结构逐渐退化。随着传代次数的增多,细胞从DNA合成前期进入DNA合成期的比例逐渐降低,从DNA合成后期进入分裂期的比例逐渐增加。其中,处于静止期和DNA合成前期的细胞由第2代的74.17%增加至第8代的88.80%,处于DNA合成期的细胞由第2代的20.04%降低至第8代的7.95%。细胞增殖指数由第2代细胞的25.83%降低至第8代细胞的11.41%。代表线粒体膜电位的平均荧光强度逐步降低。结论内皮细胞传代过程中,细胞结构退化,细胞生长渐趋停滞,出现衰老特征。线粒体膜电位降低,线粒体功能下降,可能是细胞衰老的机制之一。