骨髓树突状细胞融合瘤苗抗肿瘤免疫预防与治疗的实验研究

目的：进一步研究树突状细胞与肿瘤细胞的融合瘤苗细胞主动免疫诱导体内抗肿瘤免疫反应及对荷瘤小鼠的免疫治疗效果。方法：直接分离骨髓树突状细胞和体外生长因子诱导扩增培养相结合,获得大量高纯度的树突状细胞,再以５００ｇ／ＬＰＥＧ诱导其与ＮＳ１骨髓细胞融合,ＨＡＴ选择培养得到两者的融合细胞,体外进行混合淋巴细胞培养,并进行免疫预防与治疗的在体动物实验。结果：融合细胞也能诱导淋巴细胞的增殖反应,而ＮＳ１无此作用。体内免疫预防试验表明,融合细胞活瘤苗１次免疫后,诱导出较强的细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）,并获得抵抗野生型ＮＳ１攻击的保护性反应,但对无关瘤株则无此抵抗力。融合细胞对荷瘤小鼠的免疫治疗试验显示,融合细胞静脉注射后,能够明显抑制肿瘤生长,延长其生存期。结论：树突状细胞与肿瘤细胞融合后的瘤苗体内免疫,能有效地诱导抗肿瘤免疫反应,可望成为肿瘤免疫预防和免疫治疗的新途径。     

小鼠脾来源树突状细胞与NS_1骨髓瘤细胞融合体的抗肿瘤作用

目的：观察ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾来源树突状细胞（ｓｐｌｅｅｎｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｓ,ｓＤＣ）与肿瘤细胞融合体的抗肿瘤效应。方法：以灭活的ＮＳ１细胞免疫活化ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取其ｓＤＣ与ＮＳ１骨髓瘤细胞融合,并筛选出融合细胞;用此融合细胞作为瘤苗,免疫治疗皮下荷ＮＳ１瘤的小鼠２次,间隔１周。结果：融合细胞瘤苗本身无致瘤性。用融合细胞瘤苗免疫治疗荷瘤小鼠后,其瘤体消失,且在观察期６０ｄ内未见肿瘤转移和复发。结论：脾来源树突状细胞与ＮＳ１细胞融合瘤苗免疫荷瘤小鼠后,激发其体内存在的抗ＮＳ１肿瘤效应。     

精子与肿瘤细胞融合模型的建立

目的：构建一种稳定的精子与肿瘤细胞融合体系,为精子与肿瘤细胞融合研究提供生物模型。方法：采用体外共培养的方式进行精子与HeLa细胞等多种肿瘤细胞的融合实验;采用共聚焦显微镜三维重建成像的方法对精子与肿瘤细胞融合现象进行确证;采用嵌套式培养体系作为融合实验的对照研究;采用自主合成的精子与肿瘤细胞共培养基（STCM）对精子与肿瘤细胞融合模型进行优化。结果：精子与肿瘤细胞在体外可以发生融合,融合事件多发生于共培养后的1.5~2 h,精子与肿瘤细胞融合形成的嵌合型肿瘤细胞呈明显的球形改变,其贴附能力明显下降,通常漂浮于培养中。与RPMI 1640培养基相比较,STCM能够在不影响肿瘤细胞生长的情况下,显著提高精子与肿瘤细胞的融合率（P < 0.05）,并且能够加速精子与肿瘤细胞地融合。结论：采用体外共培养的方法,我们建立了精子与肿瘤细胞融合的生物模型。     

HBV适应性杂交细胞株的建立和初步研究

目的方法诱导HepG₂细胞产生HGPRT基因突变,将筛选出的HGPRT阴性的HepG2细胞与携带HBV的人原代肝细胞进行融合得杂交细胞,用HAT培养基筛选出异核体杂交细胞,再利用有限稀释法进行克隆,通过核型分析方法鉴定所得细胞。对所得杂交细胞及培养上清液进行HBV DNA和HBsAg、HBeAg的检测。实验同时,用未杂交的HepG2和人原代肝细胞作对照。结果经筛选后,有一杂交细胞株(HepCHLine3)克隆成功。HepCHLine3在形态学上与HGPRT^-HepG₂细胞相似,能体外传代培养,染色体核型分析示HepCHLine3杂交细胞染色体众数为99条,证明为融合细胞株,含所有来自HepG₂和人原代肝细胞的基因数。传代培养的HepCHLine3和其培养上清液用巢式PCR分别可检测到HBV DNA,培养上清液内检测到HBsAg和HBeAg。对照组的HepG₂和人原代肝细胞相应结果为阴性。提示该细胞携带并分泌HBV DNA。结论该杂交细胞兼具HepG₂细胞体外传代和人原代肝细胞对HBV易感的特性,是一新型杂交细胞系,为进一步建立新型HBV感染细胞模型奠定了基础。     

我国细胞工程制药的研究现状和发展前景

目的:总结综述我国在细胞工程制药相关技术领域,如细胞融合、核移植、染色体改造、转基因和大规模细胞培养等方面的研究现状和未来的发展前景。方法:文献调研与数据整理。结果:我国细胞工程制药相关研究起步晚,发展快,前景广阔。结论:目前研究重点应放在人源化抗体、分子药田动物药厂的研制和生产上     

巨细胞病毒单克隆抗体的制备及其初步应用

用CMV AD-169株感染自制人胚肺纤维母细胞，制备抗原，锣疲BALB／c小鼠，．取其脾细胞与Sp2／0-Ag14细胞融合，建立了一株稳定分泌抗HCMV特异性McAb的3B0杂交瘤细胞株。3B0McAb经鉴定属于IgG3亚娄。用间接免疫荧光法和间接酶免疫法证实为抗CMV特异性抗体。用微量细胞培养中和试验证实3B0McAb在加有豚鼠血清后可阻止HcMV感染后细胞病变的出现。3B0McAb经间接免疲荧光法检测中，晚期孕妇羊水细胞中HCMV抗原，在68例标本中有一例为阳性，阳性率为1．47％。该法方便，快速可为在胎儿时期诊断先天性HCMV感染提供依据。     

细胞电融合的扫描电镜观察

用扫描电镜观察人红白血病细胞株K_(562)细胞的电融合,得到如下结果:①细胞在高频交变电场中紧密接触,间隙仅几十纳米,这使得细胞融合成为可能。有些细胞虽紧密相连,但相连部位仅限于膜的突起如微绒毛,这可能是动物细胞融合率低于植物细胞的原因之一。②观察到细胞融合的各个时相,细胞融合始于二个细胞膜的沟通以形成“膜桥”,膜桥变粗以至细胞完全融合。同时还观察到三个细胞的融合。③当脉幅为3000V/cm时,光镜下未见细胞受电击而破碎的现象,但在扫描电镜下,可见有许多膜损伤的细胞,不仅如此,有很多细胞虽已融合,但膜结构不完整,明显损伤。此结果提示实际可生存的融合细胞远低于表观融合率。     

小鼠骨髓瘤细胞与活化B细胞的融合及其体外共刺激T细胞 …

将小鼠骨髓瘤细胞（ＳＰ２／０）与脂多糖（ＬＰＳ）活化的Ｂ淋巴细胞在聚乙二醇（ＰＥＧ）介导下融合，经筛选获得８株状态良好的阳性细胞。这些细胞（传代第二次）能耐受ＨＡＴ液，而对８－氮杂鸟嘌呤（２０μｇ／ｍｌ）敏感，其染色体数在１０５￣１１２条之间，表明这８株细胞均为ＳＰ２／０细胞与Ｂ细胞融合而成的杂交细胞。其中三株杂交细胞（ＩＦ６、ＩＦ１１、２Ａ６）能显著增强Ｔ淋巴细胞的增殖反应（Ｐ〈０．０１）。提示     

抗HSV—1杂交瘤细胞系的建立及单抗特性研究

以ＨＳＶ－１为抗原，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，取其脾细胞在ＰＧＥ介导下与ＳＰ２／０细胞常规融合，ＩＦＡ法筛选鉴定，反复克隆，共获得７株能稳定、持续分泌抗ＨＳＶ的ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系。核型分析染色体数为８７￣１０３条之间，Ｉｇ类型分别为ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３，腹水抗体效价在１０＾－５￣１０＾－７之间免疫沉淀。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，２株与１３２Ｋ多肽发生特异性反应，只具有ＨＳＶ－１型特异性，其余３