PCNA、Survivin蛋白在人绒癌细胞株BeWo合体化过程中表达变化的研究

目的:通过检测人绒癌细胞株Be Wo合体化过程中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、生存素(Survivin)蛋白表达的变化,探讨滋养细胞合体化后增殖性的变化,为恶性滋养细胞肿瘤,尤其是耐药恶性滋养细胞肿瘤的临床治疗提供新的思路和方法。方法:利用毛喉素(forskolin)诱导Be Wo细胞株融合;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测促融素(Syncytin)在forskolin作用不同时间的Be Wo细胞株中的表达;应用蛋白质印迹(Western blotting)检测PCNA、Survivin蛋白在forskolin作用不同时间的Be Wo细胞株中的表达;应用噻唑蓝比色分析实验(MTT)法检测forskolin作用不同时间的绒癌细胞株Be Wo的增殖能力。结果:1forskolin作用后的Be Wo细胞株Syncytin基因的表达增强,且随着forskolin作用时间的延长,Syncytin的表达更强,于48 h达到高峰。2forskolin作用后的Be Wo细胞株PCNA、Survivin蛋白的表达降低。3forskolin作用后的Be Wo细胞株的增殖能力下降,且不同作用时间的差异有统计学意义;forskolin作用的时间越长,Be Wo细胞株增殖能力下降越明显。结论:人绒癌细胞株Be Wo合体化后PCNA、Survivin蛋白的表达降低,说明人绒癌细胞株Be Wo合体化后增殖性降低,推测诱导滋养细胞合体化可能对临床治疗恶性滋养细胞肿瘤具有一定作用。     

骨髓树突状细胞融合瘤苗抗肿瘤免疫预防与治疗的实验研究

目的：进一步研究树突状细胞与肿瘤细胞的融合瘤苗细胞主动免疫诱导体内抗肿瘤免疫反应及对荷瘤小鼠的免疫治疗效果。方法：直接分离骨髓树突状细胞和体外生长因子诱导扩增培养相结合,获得大量高纯度的树突状细胞,再以５００ｇ／ＬＰＥＧ诱导其与ＮＳ１骨髓细胞融合,ＨＡＴ选择培养得到两者的融合细胞,体外进行混合淋巴细胞培养,并进行免疫预防与治疗的在体动物实验。结果：融合细胞也能诱导淋巴细胞的增殖反应,而ＮＳ１无此作用。体内免疫预防试验表明,融合细胞活瘤苗１次免疫后,诱导出较强的细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）,并获得抵抗野生型ＮＳ１攻击的保护性反应,但对无关瘤株则无此抵抗力。融合细胞对荷瘤小鼠的免疫治疗试验显示,融合细胞静脉注射后,能够明显抑制肿瘤生长,延长其生存期。结论：树突状细胞与肿瘤细胞融合后的瘤苗体内免疫,能有效地诱导抗肿瘤免疫反应,可望成为肿瘤免疫预防和免疫治疗的新途径。     

小鼠脾来源树突状细胞与NS_1骨髓瘤细胞融合体的抗肿瘤作用

目的：观察ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾来源树突状细胞（ｓｐｌｅｅｎｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｓ,ｓＤＣ）与肿瘤细胞融合体的抗肿瘤效应。方法：以灭活的ＮＳ１细胞免疫活化ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取其ｓＤＣ与ＮＳ１骨髓瘤细胞融合,并筛选出融合细胞;用此融合细胞作为瘤苗,免疫治疗皮下荷ＮＳ１瘤的小鼠２次,间隔１周。结果：融合细胞瘤苗本身无致瘤性。用融合细胞瘤苗免疫治疗荷瘤小鼠后,其瘤体消失,且在观察期６０ｄ内未见肿瘤转移和复发。结论：脾来源树突状细胞与ＮＳ１细胞融合瘤苗免疫荷瘤小鼠后,激发其体内存在的抗ＮＳ１肿瘤效应。     

小鼠脾来源树突状细胞与NS1骨髓瘤细胞融合体的抗肿瘤作用

观察ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾来源树突状细胞与肿瘤细胞融合体的抗肿瘤效应。方法以灭活的ＮＳ１细胞免疫活化ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取其ｓＤＣ与ＮＳ１骨髓瘤细胞融合,并筛选出融合细胞,用此融合细胞作为瘤苗,免疫治疗皮下荷ＮＳ１瘤的小鼠２次,间隔１周。     

抗重组SARS病毒N蛋白单克隆抗体制备及性质初步研究

目的：制备抗重组SARS病毒N蛋白单克隆抗体。方法：重组SARS病毒N蛋白免疫BALB／c雌性小鼠获得免疫脾细胞，利用杂交瘤技术将免疫脾细胞同骨髓瘤Sp2／0细胞融合，间接ELISA方法筛选阳性克隆并扩增。结果：获得了能稳定分泌抗重组SARS病毒N蛋白抗体的杂交瘤细胞株，经鉴定分泌的抗体IgG亚类为IgM。结论：制备了鼠源性单克隆抗体并初步研究了该抗体性质。     

风疹病毒济南地方株的生物学特性

研究了风疹病毒济南地方株,标准株G0S_(-10),疫苗株RA_(27/5)的某些生物学特性,结果表明,济南地方株在BHK_(21)细胞上病复发展迅速,产生细胞融合,细胞病变初期血凝素滴度最高,冻融次数和温度可影响血凝活性,绵羊和鸽子红细胞与一日龄的鸡红细胞对风疹病毒同样敏感。     

人细胞融合肝癌疫苗的制备及其融合细胞百分率的检测

手术病人新鲜肝癌组织及部分脾脏，分离纯化、激活B细胞，应用PEG融合肝癌细胞与激活B细胞，经培养灭活制得肿瘤疫苗。同时测定了融合肝癌疫苗的融合率、冻存后复苏活细胞百分率。结果显示，3例融合细胞的融合率分别为66.84%、74.43%、76.55%，融合细胞经DMSO和甘油冻存后复苏活细胞百分率分别为95%、97%。研究表明，人细胞融合肝癌疫苗具有很高的融合率和冻存后复苏活细胞百分率，便于制备及储存，适合临床应用。     

小鼠骨髓来源树突状细胞与NS1骨髓瘤细胞的融合瘤苗研制

为了提高肿瘤的免疫原性，有效地引发并增强突主体内抗肿瘤免疫应答，研制小鼠骨髓树太细胞与ＮＳ１骨髓瘤细胞的融合瘤苗。方法利用特异的ＣＤ４、ＣＤ８、Ｂ２２０单克隆抗体和补体缓冲液及ＤＣｓ的半粘附性，直接从骨髓细胞中分离出高纯度的ＤＣｓ及其前休     

树突状细胞与肝癌细胞瘤苗的实验研究

目的 :探讨杂交瘤苗H2 2 DC的生物学特性及特异性CTL活性。方法 :利用Metrizamide等分离小鼠脾DC ,融合DC与H2 2 细胞 ,磁式细胞分选器分选出H2 2 DC ,从BALB/C小鼠皮下接种H2 2 DC法检测小鼠脾CTL活性。结果 :(1)H2 2 DC虽在体外能分裂增殖 ,但明显低于H2 2 细胞 ,无体内致瘤性 ;(2 )活H2 2 DC免疫的小鼠 ,其脾CTL杀伤H2 2 细胞的活性明显高于对照组 (H2 2 +DC、H2 2 、PBS)小鼠 (P <0 0 1)。结论 :DC H2 2 能诱导出特异性的CTL活性 ,可望成为肝癌免疫治疗的新途径