CDK4在去甲二氢愈创木酸抑制恶性胶质瘤细胞增殖中的作用

目的：探讨细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4（CDK4）在去甲二氢愈创木酸（NDGA）抑制人恶性胶质瘤细胞系SHG－44细胞增殖中的作用。方法：采用细胞培养、细胞计数、流式细胞仪检测、免疫沉淀、免疫组化及图像分析等技术方法。结果：①在10－200μmol/L浓度范围内,NDGA可使SHG－44细胞增殖受阻,且NDGA液浓度越高,这种作用越明显,即呈明显的剂量依赖性;②NDGA对细胞周期抑制作用主要表现于G1→期;③NDGA处理后,SHG－44细胞CDK4蛋白激酶的活性降低,且这种作用与NDGA的处理浓度呈正相关,与NDGA对SHG－44细胞的增殖抑制作用相一致;④NDGA处理后,SHG－44细胞CDK4基因的蛋白表达明显减弱。结论：CDK4蛋白激酶活性降低在NDGA抑制SHG－44细胞增殖中起着十分重要的作用。     

手术对淋巴细胞亚群细胞周期的影响

目的观察实验动物围手术期脾脏淋巴细胞亚群细胞周期改变,分析手术对机体免疫功能的影响及其意义。方法对Balb／c小鼠行截肢术,分别于术后第1、2、3、4d处死,分离脾脏淋巴细胞,单克隆荧光抗体标记,流式细胞检测各淋巴细胞亚群的细胞周期。结果术后第1天CD3+、CD4+细胞的(S＋G2)期明显增高,分别为43.5±3.4％和46.5±4.1％,维持至术后第4天。CD8+(S＋G2)期术后第2天62.7±5.7％较对照组41.3±1.9％明显升高。sIG(膜表面免疫球蛋白)术后第2天(S＋G2)期明显升高。结论手术及应激可影响小鼠机体免疫功能。     

沙利霉素对口腔鳞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨沙利霉素(salinomycin)对口腔鳞癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨沙利霉素对信号通路的影响。方法:培养口腔鳞状细胞癌细胞系CAL-27,将1、2、4、8、16、32 μmol/L沙利霉素和1.25、2.5、5、10、20、40、80 μmol/L顺铂与CAL-27细胞共同培养,24 h和48 h后用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测沙利霉素和顺铂对CAL-27细胞增殖的影响;0、2、4、8 μmol/L沙利霉素和0、5、10、20 μmol/L顺铂与CAL-27细胞共培养48 h后,通过流式细胞术检测沙利霉素和顺铂对CAL-27细胞周期的影响,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CAL-27细胞中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteine-containing aspartate-specific proteases-3,Caspase-3)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9(cysteine-containing aspartate-specific proteases-9,Caspase-9)、脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)修复酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)和磷酸化蛋白激酶B (phosphorylated protein kinase B,p-Akt)的表达。结果:CCK-8实验表明沙利霉素和顺铂均能显著抑制口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖,且抑制作用呈时间依赖性和药物浓度依赖性,但是相对于临床一线化疗药物顺铂而言,沙利霉素对CAL-27细胞增殖的抑制效果更加显著(P<0.001)。细胞周期检测表明,与加入二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)的对照组相比,8 μmol/L沙利霉素与CAL-27细胞共同培养48 h后,细胞休眠期/DNA合成前期的CAL-27细胞比例明显升高(40.40%±1.99% vs.64.46%±0.90%,P<0.05), DNA合成期和DNA合成后期/有丝分裂期的CAL-27细胞比例出现降低(24.32%±2.30% vs.18.73%±0.61%,P<0.05,35.01%±1.24% vs.16.54%±1.31%,P<0.05);顺铂对CAL-27细胞周期没有特异性改变。蛋白免疫印迹法结果显示,沙利霉素在上调CAL-27细胞中Caspase-3和 Caspase-9蛋白表达(P<0.05)的同时下调PARP、Akt和p-Akt蛋白的表达(P<0.05)。结论:相对于顺铂而言,沙利霉素对CAL-27细胞增殖有更强的抑制作用,并且能将口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞周期阻滞在细胞休眠期/DNA合成前期,同时能够诱导CAL-27细胞发生凋亡,这一机制可能和Akt/p-Akt 信号通路相关。     

人参皂甙Rh_2对C_6胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的 :观察人参皂甙 Rh2 对 C6胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用 ,并在分子水平探讨其作用机理。方法 :细胞计数法检测细胞增殖 ,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡。结果 :1 Rh2 2 ,4,8μmol/L对 C6胶质瘤细胞有增殖抑制作用 ,且呈明显量效关系 ;2 Rh2 作用 72 h后 ,4μmol/L浓度对 C6胶质瘤细胞诱导凋亡作用最为明显 ;3 Rh2 作用后 ,G0 /G1期细胞百分率明显下降 ,而S期细胞百分率显著增加。结论 :Rh2 对 C6胶质瘤细胞有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用 ,且这种作用有周期特异性。     

两株小鼠肝癌细胞增殖状态比较研究

目的：探讨细胞增殖状态与细胞转移力的关系。方法：采用流式细胞术,测定两株腹水型肝癌细胞的ＤＮＡ含量,进而提供细胞增殖状态的信息。结果：Ｆ和Ｐ细胞的ＤＮＡ指数及细胞增殖指数均无显著性差异。Ｆ细胞的淋巴结转移瘤的Ｇ２／Ｍ期比率高于其原发瘤。结论：两株细胞的转移率与细胞的增殖状态无明显的相关性。     

8例B细胞淋巴瘤的T细胞基因CD4 V4突变及其相关蛋白的表达

【目的】检测B细胞淋巴瘤组织中T细胞的CD4V4基因突变情况及其相应病例的Fas/FasL、CD4、bcl 2和CyclinD1蛋白表达特征。【方法】PCR SSCP技术筛选检测 5 6例B细胞淋巴瘤CD4分子的V4外显子突变状况。用免疫组化方法检测有突变的B细胞淋巴瘤组织中L2 6 ,UCHL1,CD3,Fas ,FasL ,bcl 2和CyclinD1蛋白表达情况。【结果】 8例 / 5 6例(14 2 % )T细胞CD4V4外显子有变异。其中小淋巴细胞性淋巴瘤 (smalllymphocytelymphoma,SLL)和淋巴母细胞性淋巴瘤(lymphoblasticlymphoma ,LBL)的Fas,FasL和CD4蛋白均为弱或无表达 ;滤泡性淋巴瘤 (follicularlymphoma ,FL) 3项均强表达 ;3例弥漫性大B细胞淋巴瘤 (diffuselargeBcelllymphoma ,DLBL)和 1例套细胞淋巴瘤 (mantlecelllymphoma ,MCL)Fas和FasL强表达 ,CD4无或弱表达。Fas和FasL双强表达的 4例 ,均有bcl 2和 /或CyclinD1过表达。【结论】B细胞淋巴瘤中CD4V4基因有突变 ,并提示这种突变与细胞死亡和细胞周期调控异常有关。     

细胞周期调控相关基因与乳腺癌发病机制的研究

目的了解细胞周期p21 waf1/cip1调控途径中p53、p21 waf1/cip1、cyclinD1、cyclin E基因在乳腺癌发病机制中作用及相互间关系.方法用免疫组化方法于17例乳腺良性组织、19例癌前病变、69例乳腺癌(20例导管内癌、49例浸润性导管癌)中检测4种基因蛋白表达,原位RNA分子杂交、原位DNA分子杂交方法于25例乳腺癌、15例癌前病变(大部为cyclinD1蛋白过表达)中检测cyclinD1 mRNA水平及基因状况.结果①p53在良性、癌前病变组织中失表达,在乳腺癌中阳性表达率为28%;②p21表达与p53表达无负相关性;③p21在乳腺癌中过表达率为29%;cyclinD1、cyclin E过表达率为46%、51%,显著高于癌前病变及良性组织;cyclinD1过表达与淋巴结转移、cyclinE过表达与肿块大小呈正相关;④cyclinD1蛋白过表达的乳腺癌中其相关的基因扩增率为32%;⑤p21表达与cyclinD1、cyclinE表达正相关.结论①突变型p53基因参与乳腺癌发生;②乳腺癌中p21表达不完全依赖于野生型p53基因;③正、负性调控因子p21、cyclinD1、cyclinE基因表达异常及cyclinD1基因异常是乳腺癌早期频发的分子事件,参与乳腺癌发生发展,证实了周期失控是肿瘤发生的重要机制;④基因扩增是cyclinD1 mRNA过表达及蛋白过表达的分子机制之一;⑤p21可能间接调控cyclinD1、cyclinE表达.     

Adaptive response of thymocyte apoptosis and cell cycle progression induced by low dose X-ray irradiation in mice

The dose-effect of adaptive response of thymocyte apoptosis and cell cycle progression induced by whole-body X-ray irradiation (WBI) was studied in male Kunming mice. The inductive doses (D1) were 25, 50, 75, 100 or 200 mGy 6 h before the challenging doses (D2) of 1.0, 1.5 or 2.0 Gy. The changes in the percentages of the thymocyte apoptotic bodies (TAB) and the cells in different phases of cell cycle were measured with flow cytometry. The percentages of TAB decreased, the arrests of G1 and G2 + M phases diminished, and the cells of DNA synthesis of S phase increased when the D1 + D2 groups was compared with the D2 groups. When D1 was 200 mGy, the adaptive response of thymocyte apoptosis and cell cycle progression were no longer induced by low dose radiation (LDR). In addition, the extracellular fluid from the splenocytes were cultured with Con A for 48 h in vitro 24 h after 75 mGy WBI was placed in the murine thymocyte suspension from mice irradiated with 2.0 Gy WBI and co-incubated. The thymocyte apoptosis decreased. Especially, noteworthy was that the percentages of TAB after the incubation for 72 h were significantly lower than those in 2.0 Gy irradiated thymocytes (P < 0.05). These results indicate that when the mice were irradiated with 25-100 mGy (D1, 12.5 mGy/min) 6 h before 1.0-2.0 Gy (D2, 0.287 Gy/min) exposure, an adaptive response of thymocyte apoptosis and cell cycle progression may be induced under the condition of WBI, and LDR (75 mGy) may change the microenvironment of immune cells and decrease the thymocyte apoptosis.     

人脑胶质瘤的分子学机制研究进展

人脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤。多形性恶性胶质瘤 (Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａｍｕｔｉｆｏｒｍｅ,ＧＢＭ)是其中恶性程度最高的肿瘤 ,5年以上存活率 <5% [1 ] ,对人类健康的危害性极大。胶质瘤的发生和发展是一个多因素多阶段的过程 ,细胞和分子遗传学的研究结果表明 ,此过程包括许多相关癌基因和抑癌基因的变异 ,多种生长因子及其受体的异常表达及肿瘤微环境的影响。基因的异常表达通过多种生物学机制促使肿瘤发生 ,其中细胞分裂增殖失控、肿瘤细胞恶性增生导致胶质瘤的发生及恶性进展是目前研究最多的方面。本文总结近几年…