应用复合诱导突变分离PCR法检测mtDNA的单核苷酸多态性

目的应用复合诱导突变分离PCR(multiplexed mutagenically separated PCR,MS-PCR)技术、银染分型,建立线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)编码区单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism,SNP)分型系统,探讨其应用价值。并调查了成都汉族群体mtDNA编码区4个SNP基因座等位基因频率和单倍型分布情况。方法根据SNP基因座(C12705T、A8701G、G8584A、C10400T)设计两条片段相差4个碱基的等位基因特异性引物和一条公共引物,4个SNP基因座复合扩增,PCR产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染显带后确定样本的基因型。结果不同SNP基因座为长度不同的单一谱带,其分型结果与直接测序一致。在成都汉族160名无关个体中,4个SNP基因座C12705T、A8701G、G8584A、C10400T等位基因频率分别为0.3813/0.6187、0.4813/0·5187、0.8250/0.1750、0.4938/0.5062;共检出6种单倍型,单倍型的基因多样性为0.7137。结论建立的MMS-PCR银染分型系统是一种简单、快速、准确、有效的SNP分型方法,对建立mtDNA编码区SNP数据库,研究群体遗传学、进化学和进行法医学个人识别和亲子鉴定有重要意义。     

血小板活化因子受体拮抗剂的抗内毒素肝损伤作用研究

本文研究了血小板活化因子受体拮抗剂ＢＮ５２０２１及ＢＮ５０７３９的抗大鼠内毒素肝损伤的作用。结果表明ＢＮ５２０２１及ＢＮ５０７３９能使内毒素所致的肝线粒体膜磷脂降解及溶血磷脂的聚集，脂质过氧化反应的增强以及机体抗氧化能力的降低得到明显改善，提示ＢＮ５２０２１及ＢＮ５０７３９是两种强有效的抗内毒素肝损伤的药物，用于内毒素肝损伤的治疗。     

Leber遗传性视神经病（LHON）：各种线粒体DNA突变与临床的关系

本文阐述了Ｌｅｂｅｒ遗传性视神经病在临床上的特征：在２０￣３０岁发病的亚急性视神经病，累及双眼，视力下降至６／６０以下，中央视野严重缺损，色觉丧失，且视力很少能够恢复。视力严重及永久丧失，最近发现，在患有ＬＨＯＮ家族中线粒体ＤＮＡ发生多种突变，为诊断提供重要依据，并可有助于判断预后和认识发病机制。     

用噬菌体肽库筛选重组日本血吸虫线粒体相关蛋白的表位

目的：筛选和鉴定重组的日本血吸虫（中国大陆株）线粒体相关蛋白rSj38的表位。方法：用纯化的rSj338/26GST免疫家兔获得抗rSj338/26GST的多克隆抗体IgG，将抗体进一步纯化，获得抗rSj338单特异多克隆抗体IgG。用纯化抗rSj338抗体对噬菌体12肽库进行5轮免疫学筛选，挑取克隆。采用Western blot免疫识别，核苷酸序列测定分析其获得的表位并与rSj338/26GST进行同源性比较。将获得的不同表位的阳性克隆分别免疫小鼠，并采用Western blot及dot-ELISA方法筛选能刺激小鼠产生较高滴度抗rSj338抗体的阳性克隆，并将阳性噬菌体免疫的小鼠血清对纯化的rSj338/26GST,26GST，日本血吸虫成虫及虫卵抗原进行Western blot识别。结果：经5轮免疫学筛选后挑取的32个克隆，用Western blot方法30个克隆能被抗rSj338抗体识别，核苷酸序列分析发现共有11种表位，与rSj338无一级结构的同源性。经动物免疫初步实验筛选。共获得4个免疫原性较强的阳性克隆，其免疫鼠血清均可识别rSj338/26GST，日本血吸虫成虫及虫卵抗原。结论：获得了4种日本血吸虫中国大陆株线粒体相关蛋白rSj338的表位，均为模拟表位，这将为日本血吸虫病的疫苗研究开辟新的途径。     

人体乳腺硬癌癌细胞器形态结构的定量研究

目的:区分乳腺正常细胞器和各期乳腺癌细胞器之间的差异,从而建立检查量化指标。方法:本文对女性乳腺硬癌癌细胞器线粒体,溶酶体的16个形态参数进行体视学统计分析。结果:发现癌细胞与正常细胞比较,其线粒体、溶酶体的体积、表面积和面数密度等形态参数存在高度显著差异和显著差异。结论:探讨了癌细胞的线粒体,溶酶体形态变异与功能之间的关系,为乳腺癌临床诊断提供了重要的定量依据。     

线粒体DNA突变与人类肿瘤

线粒体是哺乳动物核基因组外唯一有自主复制能力的细胞器 ,它通过氧化磷酸化 (oxidative phosphorylation,OX-PHOS)过程产生机体所需的能量 ,并且以 ATP的形式储存起来。有关报道认为线粒体 DNA突变与细胞凋亡、肿瘤的形成与发展以及人类衰老过程都是紧密联系的。本文就线粒体 DNA突变与大肠癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌等实体瘤以及血液系统恶性肿瘤之间的关系做一简单的介绍     

NG-硝基-L-精氨酸对大鼠内毒素性肺线粒体损伤的影响

目的： 观察非选择性一氧化氮合酶(NOS)抑制剂NG-硝基-L-精氨酸(L-NA)对急性肺损伤大鼠肺线粒体功能的影响，并探讨其改善急性肺损伤的作用机制。方法: 将SD大鼠随机分为空白对照组、急性肺损伤组、L-NA治疗组，采用舌静脉注射脂多糖(LPS)复制大鼠急性肺损伤模型，于大鼠急性肺损伤3h后给L-NA治疗3h，断头放血处死大鼠，迅速取出肺脏，匀浆器混匀后，低温差速离心法提取肺线粒体，测定线粒体总ATP酶、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总一氧化氮合酶（T-NOS）、诱生型一氧化氮合酶（iNOS）、结构型一氧化氮合酶（cNOS）的活性，以及线粒体肿胀度、膜流动性和线粒体一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）含量；电镜观察大鼠肺线粒体超微结构的改变及治疗药对此改变的影响。结果: 在大鼠内毒素性急性肺损伤后，肺脏组织中线粒体表现为肿胀、膜流动性降低，线粒体中的T-NOS和iNOS活性显著升高，线粒体NO生成明显增加，而cNOS活性无明显变化；线粒体总ATP酶、SOD、GSH-Px活性均明显下降，线粒体MDA含量明显升高。急性肺损伤3h给予L-NA治疗3h,与急性肺损伤组相比，一氧化氮合酶活性有所改变，NO生成显著下降，总ATP酶、SOD、GSH-Px活性均显著升高，MDA含量下降。电镜结果显示内毒素性急性肺损伤后肺脏组织细胞水肿，线粒体肿胀、嵴断裂、溶解、消失；L-NA能改善内毒素性急性肺损伤引起的细胞水肿、线粒体肿胀和空泡化。结论: L-NA能明显抑制急性肺损伤后线粒体一氧化氮合酶活性，减少NO生成，改善线粒体能量供应，增加线粒体抗氧化作用，从而减轻急性肺损伤。     

中国Leber遗传性视神经病变G11696A突变两个家系分析

目的对两个中国Leber遗传性视神经病变(Leber’shereditary optic neuropathy,LHON)家系的临床和分子遗传学特征进行分析。方法眼科临床检查发现在这两个家系中只有先证者1人出现视力障碍,发病年龄分别为10岁和17岁。对这两个家系先证者使用24对有部分重叠的引物进行线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)全序列扩增分析。结果没有发现mtDNAG11778A、G3460A和T14484C3个常见的突变位点,而发现了与LHON相关的ND4G11196A同质性突变位点的存在,在167名正常对照只发现1例G11696A突变。结论线粒体DNA全序列分析发现两个家系呈现独特的mtDNA多态性,都属于东亚单体型D4。不完全外显率和正常对照频率(1/167)表明G11696A突变本身不足以导致LHON的发生,说明其它因素在这两个LHON家系的表型表达中也起一定的作用。在这些家系mtDNA中缺乏影响重要功能突变位点的存在,排除了线粒体背景对LHON临床表型的影响。因此,核修饰基因、环境因素可能对两个中国G11696A突变家系的外显率和发病严重程度起促进作用。     

我国辅酶Q10前景看好

辅酶Q10，又叫癸烯醌、泛醌，为脂溶性酮类化合物，化学名称2，3-甲氧基-5-甲基-6-癸异戊烯基苯醌。1957年由Frederick从牛心线粒体中分离得到。辅酶Q10作为人体中惟一的辅酶Q类物质，其代谢异常与人体的许多疾病相关联。辅酶Q10是细胞自身产生的一种天然代谢激活剂，能激活细胞呼吸、加速产生腺三磷(ATP)。它也是细胞自身产生的天然抗氧剂，能抑制线粒体的过氧化，保护生物膜结构完整性，对免疫有特殊的增强作用。     

二氧化锗诱导L6成肌细胞株的MyoD基因表达

目的：探讨成肌细胞的MyoD基因在线粒体肌病发生发展中的作用。方法：采用二氧化锗(GeO2)处理大鼠的成肌细胞系L6，观察细胞形态的变化，利用MTT分析GeO2对成肌细胞的影响，用RT-PCR检测MyoD基因表达。结果：发现GeO2在损伤成肌细胞的同时，能够诱导MyoD基因的表达，表明MyoD基因在线粒体肌病的发生发展中起着重要作用。结论：MyoD基因表达的增强是线粒体肌病中骨骼肌萎缩的一个信号分子，MyoD基因表达有可能成为线粒体肌病检测的参考指标。