三种连接方式行膀胱冲洗的比较

膀胱冲洗是泌尿外科常见的护理操作之一,其目的是预防长期留置尿管的病人发生泌尿系统感染.由于临床中没有供膀胱冲洗专用的一次性冲洗器,我们常用一次性输液器作为冲洗工具,在操作中常出现因产品不配套、管路连接不严密而致冲洗液外漏的情况,给病人带来不必要的痛苦.我科作为泌尿外科,需留置尿管的病人多且尿管留置时间长,为了减轻病人的痛苦、提高工作效率,我们对膀胱冲洗的装置进行改进,将输液器与尿管之间加入一连接装置--谓之为连接头,使输液器与尿管之间能紧密连接,克服了在冲洗过程中的冲洗液外漏及尿管漏尿等情况.我们将此方法与原来的另两种方法进行对比,现报告如下.     

邻苯二甲酸酯类对大鼠睾丸支持细胞毒性作用

目的探讨大鼠睾丸支持细胞间紧密连接结构能否作为邻苯二甲酸酯类(PAE)毒性作用效应的标志物。方法建立大鼠睾丸支持细胞原代双室培养模型,通过光镜、跨上皮电阻测定及免疫荧光定位方法研究PAE对大鼠支持细胞及支持细胞间紧密连接结构的影响。结果PAE染毒后,支持细胞单层破坏、细胞间的嵴线消失、跨上皮电阻值下降、紧密连接相关蛋白ZO-1、F-肌动蛋白和闭锁蛋白表达降低;600μmol·L-1浓度下,单乙基己基邻苯二甲酸酯(MEHP)对睾丸支持细胞的毒性大于单丁基邻苯二甲酸酯(MBP)。结论MEHP和MBP可破坏睾丸支持细胞间的紧密连接结构,跨上皮电阻值可作为PAE睾丸毒作用敏感的效应标志物。     

表皮生长因子对脑缺血血脑屏障的保护作用

目的血脑屏障(BBB)破坏是缺血再灌注损伤的重要标志,而表皮生长因子(EGF)具有增强紧密连接功能。本研究考察EGF对脑缺血BBB的保护作用。方法建立bEnd3的单细胞BBB模型,通过荧光黄渗透系数测定及紧密连接蛋白claudin-5和ZO-1免疫染色法评价BBB模型的紧密连接性;通过bEnd3细胞建立4 h糖氧剥夺模型,检测claudin-5和ZO-1的m RNA和蛋白表达水平、荧光黄渗透系数及细胞凋亡,考察EGF(250μg·L-1)对BBB的保护作用。结果 bEnd3细胞显著阻碍荧光黄的通透,其渗透系数为(1.3±0.13)×10-3cm·min-1,claudin-5和ZO-1免疫染色呈阳性,EGF可显著抑制糖氧剥夺引起的claudin-5和ZO-1表达减少和荧光黄通透性增加,此外对细胞活性无显著影响。结论本研究建立了一种基于bEnd3细胞的BBB体外模型,发现EGF对脑缺血BBB具有保护作用,可为缺血性脑卒中治疗提供新的潜在靶点和思路。     

加味逍遥散对2,4-DNCB诱导的特应性皮炎小鼠模型claudin-1、occludin、ZO-1的影响

目的 观察加味逍遥散对特异性皮炎(AD)模型的疗效,对皮肤组织、表皮屏障影响及其可能的机制。方法 将48只小鼠分为6组,即空白组,模型组,加味逍遥散低、中、高剂量组,西替利嗪组。通过2-二硝基氯苯诱导复制特应性皮炎模型,给予加味逍遥散低、中、高剂量及阳性对照药干预,比较记录治疗前后皮损评分、耳廓厚度、搔抓次数、皮肤含水量;苏木精和伊红染色(HE)观察皮肤组织病理变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IgE、IL-33、5-HT,皮损TLSP、5-HT,蛋白免疫印迹法Western blotting检测皮损中claudin-1、occludin、ZO-1蛋白的表达;采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测皮损中claudin-1、occludin、ZO-1的mRNA表达。结果 与空白组比较,2,4-DNCB诱导小鼠背部皮肤出现红斑、鳞屑、水肿/丘疹,皮损组织可见淋巴细胞、中性粒细胞浸润,皮损厚度增加,血清IgE、IL-33升高,皮损中claduin-1、occludin, ZO-1水平降低。加味逍遥散可改善皮损症状、减少抓挠次数和皮损厚度,降低血清IgE、IL-33...     

冬虫夏草对大鼠小肠黏膜机械屏障功能影响的研究

目的:探讨冬虫夏草对大鼠小肠黏膜机械屏障功能的影响。方法:实验分为正常对照组、内毒素灌胃组和内毒素灌胃+冬虫夏草组。内毒素灌胃组于实验开始第1天给予内毒素5 EU/kg灌胃,内毒素灌胃+冬虫夏草组每天给予冬虫夏草5 g/(kg.d)混悬液灌胃,对照组给予等量的等渗盐水灌胃,三组均自由进食和饮水。分别于灌胃第4、7、10天取8只大鼠,取小肠黏膜行流式细胞仪检测黏膜细胞的增殖指数(PI),透射电镜检测黏膜上皮细胞间紧密连接宽度,免疫组化染色检测黏膜增殖细胞核抗原(PCNA)。结果:内毒素灌胃+冬虫夏草组大鼠肠黏膜细胞的PI、PCNA比例和肠黏膜上皮细胞间的紧密连接第7天即恢复至正常水平,与内毒素灌胃组相比,有显著性差异。结论:冬虫夏草可促进大鼠小肠黏膜细胞的增殖,维持小肠黏膜上皮细胞间紧密连接的完整性,保护肠黏膜的机械屏障功能。     

养血解毒方对银屑病角质形成细胞紧密连接的调节作用

目的:观察银屑病样小鼠皮损紧密连接蛋白中水闸蛋白(claduin-1,claudin-7),闭锁蛋白(occludin)的表达,明确养血解毒方对银屑病表皮通透屏障的修复作用,为养血解毒方治疗银屑病提供科学依据。方法:将C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、甲氨喋呤组、养血解毒方组,制备甲氨喋呤溶液、养血解毒方水煎剂对应灌胃干预,同时小鼠背部剃毛后给予咪喹莫特涂抹诱导银屑病样皮损模型。每日拍照记录皮损形态并对严重程度指数(PASI)评分;水油测试笔检测皮损表皮含水量;苏木素-伊红(HE)染色观察其病理改变、测量表皮厚度;免疫荧光法检测增殖相关的核抗原(Ki67);免疫组化法检测表皮兜甲蛋白(loricrin),真皮中CD3^+T淋巴细胞浸润和紧密连接蛋白claduin-1,claudin-7,occludin的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测皮损中claudin-7,occludin的表达。模拟银屑病皮损微环境,建立白细胞介素-17(IL-17,1 mg·L^-1)刺激的角质形成细胞(Hacat)模型,制作养血组分、解毒组分、养血解毒方喷干粉进行干预。采用细胞增殖毒性检测试剂盒-8(CCK-8)法检测药物对Hacat细胞的毒性;细胞免疫荧光法检测药物对角质形成细胞claudin-1,claudin-7,occludin表达的干预作用。结果:与模型组比较,养血解毒方可显著减轻小鼠银屑病样皮损表现,降低PASI评分及皮损表皮厚度(P<0.01),增加皮损区表皮水分含量(P<0.01),减少表皮ki67,loricrin的异常表达和真皮CD3+T细胞浸润(P<0.01),并增加紧密连接蛋白claudin-1,claudin-7,occludin的表达(P<0.05),增加紧密连接结构的完整性;体外研究发现,与模型组比较,养血解毒方组和养血组分组明显升高紧密连接蛋白claudin-1,claudin-7,occludin的表达(P<0.05);与模型组比较,解毒组分组蛋白表达水平无统计学差异。结论:养血解毒方通过调节角质形成细胞间紧密连接的表达抑制其异常的增殖分化过程,进一步恢复破坏的表皮通透屏障,可能是其治疗银屑病的作用机制之一。其中养血解毒方的养血组分对调节紧密连接的修复起主要作用。     

桃红四物汤抗癫痫作用机制研究

目的研究桃红四物汤的抗癫痫作用机制。方法建立戊四氮(PTZ)点燃大鼠癫痫模型,随机分为对照组、模型组和桃红四物汤低、中、高剂量组。桃红四物汤剂量分别为0.7、1.4、2.1 g/kg,给药体积为10 m L/kg,每日ig给药1次,连续给药2周。给药第0、14天观察大鼠癫痫发作程度。给药结束处死大鼠,伊文思蓝(EB)法测定血脑屏障通透性,Western blotting法和免疫荧光法测定脑组织及不同部位3种紧密连接蛋白:闭锁连接蛋白-1(ZO-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Occludin蛋白表达水平。结果高、中、低剂量桃红四物汤可显著降低大鼠癫痫发作程度和血脑屏障通透性(P0.01)。低剂量桃红四物汤可显著升高大鼠脑组织皮层、海马及纹状体的MMP-9表达水平(P0.05);中、高剂量桃红四物汤可显著升高大鼠脑组织ZO-1、MMP-9、Occludin表达水平(P0.05、0.01)。结论桃红四物汤可显著减轻癫痫发作程度,作用机制可能与降低血脑屏障通透性及升高脑组织紧密连接蛋白表达水平有关。     

肠激安方对IBS-D大鼠肠道通透性的影响

目的:观察肠激安方对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠肠道通透性的影响,探讨肠激安方治疗IBS-D的作用机制。方法:SD雄性乳鼠,随机分为5组,分别为正常组,模型组,匹维溴铵组(0.018 g·kg~(-1)),肠激安高、低剂量组(33.48,16.74 g·kg~(-1)),除正常组外,均采用"母婴分离+醋酸刺激+束缚应激"三因素结合的方法建立IBS-D模型。给药后,采用透射电镜观察大鼠肠黏膜超微结构;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血浆D-乳酸水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠结肠紧密连接蛋白闭锁蛋白(Occludin),闭合蛋白-1(Claudin-1)的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Occludin,Claudin-1,紧密连接蛋白-1(ZO-1)mRNA表达。结果:与正常组比较,IBS-D模型组大鼠肠黏膜上皮细胞损伤,微绒毛排列较稀疏,紧密连接间隙增宽,有的不甚明显;血浆D-乳酸水平明显升高(P0.05),结肠中Occludin,Claudin-1 mRNA及蛋白表达降低(P0.05),ZO-1 mRNA表达降低(P0.05)。药物治疗后,与模型组比较,各给药组大鼠肠黏膜细胞损伤修复;匹维溴铵组、肠激安方高剂量组血浆D-乳酸水平明显降低(P0.05),肠激安方低剂量组血浆D-乳酸水平有降低趋势,但不具有统计学差异。各给药组大鼠结肠中Occludin,Claudin-1 mRNA及蛋白表达水平,ZO-1 mRNA表达水平升高(P0.05)。结论:肠激安方对IBS-D的治疗作用可能是改善肠道通透性实现的。     

白术对慢传输型便秘小鼠短链脂肪酸和肠道屏障的影响

目的：通过观察生白术对慢传输型便秘(STC)小鼠的短链脂肪酸和肠道屏障的影响,探究其治疗STC的作用机制。方法：将48只雄性KM小鼠随机分为空白组、模型组、生白术低、中、高剂量组(2.5、5、10g·kg^-1)及莫沙必利组(2.5 mg·kg^-1)。除空白组外,其余各组均灌胃洛哌丁胺混悬液(5 mg·kg^-1),2次/d,连续灌胃14 d,构建STC小鼠模型。同时各给药组给予相应的药物灌胃治疗,连续14 d,空白组和模型组灌胃等体积蒸馏水。观察生白术治疗对小鼠体质量、排便频率、粪便含水率、肠道推进率的影响;苏木素-伊红(HE)和过碘酸-雪夫(PAS)染色观察小鼠结肠的病理变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠血清中胃泌素(GAS)和胃动素(MTL)的含量;气相色谱质谱联用法(GC-MS)检测小鼠粪便中短链脂肪酸(SCFAs)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠结肠中闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、咬合蛋白(Occludin)和闭合蛋白-...     

基于TGR5及肠黏膜屏障功能探讨“疏肝健脾”疗法对肝损伤大鼠的影响及作用机制

目的:探讨"疏肝、健脾、疏肝健脾、先疏肝再疏肝健脾、先健脾再疏肝健脾"不同治疗方法对肝郁叠加肝损伤大鼠的影响及其作用机制。方法:制造6周肝郁叠加肝损伤大鼠模型,采用束缚叠加四氯化碳(CCl4)皮下注射法造模(5.89 g·kg^-1,1次/3 d),同时灌胃给药。48只清洁级雄性SD大鼠用随机数字表法分为8组:正常组,模型组,双环醇组(0.2 g·kg^-1),四逆散组(4.32 g·kg^-1),六君子汤组(9.26 g·kg^-1),柴芍六君子汤甲组(柴甲组;疏肝健脾,13.57 g·kg^-1),柴芍六君子汤乙组(柴乙组;先疏肝,再疏肝健脾,13.57 g·kg^-1),柴芍六君子汤丙组(柴丙组;先健脾,再疏肝健脾,13.57 g·kg^-1),每组6只。光镜、电镜下观察各组大鼠肝、结肠组织切片;全自动生化分析仪检测血清肝功能生化指标;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肝脏、结肠组织G蛋白偶联受体5(TGR5),肠黏膜闭锁连接蛋白-1(ZO-1),闭合蛋白(Occludin),紧密连接蛋白-1(Claudin-1)mRNA相对表达量;免疫组化法检测结肠增殖细胞核抗原(PCNA)阳性表达率。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清碱性磷酸酶(ALP),丙氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆红素(TBIL),直接胆红素(DBIL)水平显著升高(P<0.01),肝脏组织TGR5 mRNA表达显著降低,结肠组织TGR5 mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01),结肠ZO-1,Occludin,Claudin-1 mRNA及PCNA表达显著下降(P<0.01);与模型组比较,双环醇、柴丙组血清ALP,ALT,AST,TBIL,DBIL水平明显降低(P<0.05,P<0.01),六君子汤组、柴甲、柴乙、柴丙组肝脏组织TGR5 mRNA肝脏表达显著升高,结肠组织TGR5 mRNA的表达显著降低(P<0.01),双环醇组、柴甲、柴乙、柴丙组结肠ZO-1,Claudin-1 mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01),双环醇组、四逆散组、柴丙组PCNA表达显著升高(P<0.01);与柴丙组比较,双环醇组、四逆散组肝脏TGR5,结肠ZO-1 mRNA表达显著降低且结肠TGR5mRNA表达显著升高(P<0.01),六君子汤组、柴乙组结肠PCNA表达明显降低(P<0.05)。结论:肝损伤状态下进行先健脾治疗能减轻肝损伤,"健脾"治疗能提高肠黏膜紧密连接蛋白含量,进而改善胃肠道功能,这与TGR5激活进而改善肠黏膜屏障功能,促进肠干细胞更新并驱动损伤后的再生有关。