c-Src激酶对脂多糖致炎过程中occludin蛋白表达的影响

目的 探讨在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理小鼠肺泡上皮细胞(mouse lung epithelial-12,MLE-12)过程中,c-Src激酶对occhdin蛋白表达的影响. 方法 将培养的MLE-12细胞按随机数字表法分3组(每组3孔细胞):对照组(C组)、LPS实验组(L组)、LPS+c-Src激酶抑制剂PP2组(L+P组).C组不做任何处理;L组用LPS(浓度为10 mg/L)处理,处理时间为1、3、6 h;L+P组用PP2(浓度为100 μmol/L)预处理60 min,然后LPS(浓度为10 mg/L)处理6h.Western blot法和免疫荧光染色法分别检测各组不同时间点occludin蛋白的表达. 结果 Western blot发现,与C组比较:L组中6h时点occludin蛋白表达下调明显、c-Src表达明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);与L组6h比较,L+P组occludin蛋白表达上调(P＜0.05).免疫荧光染色显示,occludin蛋白主要表达于细胞膜上,LPS影响occludin蛋白在膜上分布,PP2可以减轻LPS的影响. 结论 LPS导致MLE-12细胞紧密连接蛋白occludin表达下调,c-Src激酶参与其调节.     

双歧杆菌通过Zonulin影响坏死性小肠结肠炎新生大鼠模型肠道通透性

目的 探讨双歧杆菌对坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)新生大鼠模型肠道通透性及血清Zonulin表达的影响,分析双歧杆菌保护NEC可能的机制.方法 将60只新生1d的SD大鼠按随机数字表法分为3组(n=20):对照组、坏死性小肠结肠炎新生大鼠组(NEC组)及双歧杆菌干预坏死性小肠结肠炎新生大鼠组(NEC+ BIF组).3组于第1、2、3天固定时间点测量体质量;第4天处死大鼠,HE染色观察回盲部肠组织病理学变化并行病理学评分,异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-Dextran)示踪法检测肠黏膜通透性,ELISA检测血清Zonulin的水平,Western blot及免疫组化检测肠组织紧密连接蛋白的表达及分布,将3组大鼠血清Zonulin水平与肠道通透性及紧密连接蛋白表达量行相关性分析.结果 与NEC组相比,双歧杆菌干预后大鼠肠上皮损伤明显改善;而与对照组相比,NEC组肠道通透性显著增高(P＜0.05),血清Zonulin表达明显增加(P＜0.05),肠上皮紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin、ZO-1的表达明显减少(P＜0.05),且分布不连续;与NEC组相比,NEC+BIF组肠道通透性降低(P＜0.05),血清Zonulin表达降低(P＜0.05),肠上皮紧密连接蛋白的表达增加(P＜0.05).相关性分析显示,3组大鼠血清Zonulin水平与肠道通透性呈正相关(r=0.923,P＜0.01),而血清Zonulin水平与肠组织紧密连接Claudin-1、Occludin、ZO-1蛋白表达量均呈负相关(r=-0.779,P＜0.01;r=-0.920,P＜0.01;r=-0.619,P＜0.01).结论 双歧杆菌可明显改善NEC大鼠的肠道通透性,其机制可能与抑制Zonulin的表达有关.     

山姜素对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠溃疡性结肠炎的保护作用及其作用机制研究

目的探讨山姜素对葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎小鼠的保护作用及其作用机制。方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和25、50、100 mg/kg山姜素组。模型组和治疗组每天给予3%葡聚糖硫酸钠溶液,连续7 d。治疗组每日ip生理盐水0.5 m L+25、50、100 mg/kg山姜素,对照组和模型组每天ip生理盐水0.5 m L,连续7 d。观察小鼠体质量变化、结肠长度、疾病活动指数(DAI)评分、组织学损伤评分等炎症反应;透射电镜观察肠上皮细胞间连接;免疫组织化学法、Western blotting法检测肠道紧密连接蛋白claudin-2、occludin、ZO-1、STAT3、p STAT3、IL-6的表达和STAT3/IL-6信号通路的表达情况。结果与模型组比较,山姜素能够显著缓解小鼠体质量减轻和肠管缩短,降低DAI和组织学评分。山姜素可增强小鼠肠黏膜occludin、ZO-1表达,减弱claudin-2表达,并能够抑制STAT3/IL-6信号通路。结论山姜素能够上调葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎小鼠结肠组织occludin、ZO-1的表达,下调claudin-2的表达,通过调节紧密连接蛋白的表达,保护肠上皮细胞屏障的完整性和通透性。通过抑制IL-6/STAT3通路,减轻结肠炎症反应。     

白藜芦醇苷对脑缺血再灌注损伤小鼠血脑屏障的 保护作用研究

目的:观察白藜芦醇苷（PD）对脑缺血再灌注损伤小鼠血脑屏障的保护作用及对紧密连接蛋白的影响。方法:CD-1 小鼠 （102 只）应用线栓法制作短暂性大脑中动脉闭塞（tMCAO）模型。随机将实验动物分成4 组:假手术组（28 只）、缺血再灌注 组（28只）、白藜芦醇苷低剂量组（30 mg/kg,18只）,白藜芦醇苷高剂量组（60 mg/kg,28只）。于缺血再灌注后24 h 进行行为学评 分、TTC 染色、干湿重测定、伊文思蓝染色,应用Western 印迹、免疫荧光检测内皮细胞标志物血小板内皮细胞黏附分子-1（CD- 31）、紧密连接蛋白闭锁小带蛋白-1（ZO-1）、咬合蛋白（Occludin）、闭合蛋白-5（Claudin-5）的表达情况。结果:（1）与缺血再灌注 组相比,白藜芦醇苷高剂量组改善了缺血再灌注小鼠行为学评分、减少了脑梗死体积[（33.76%± 13.27%）vs.（57.47%±9.53%）, P<0.05]、减轻了缺血再灌注小鼠脑水肿程度[（75.62%±7.95%）vs.（85.72%±6.20%）,P<0.05]、降低了伊文思蓝渗出量[（1.49±0.47） vs.（2.13±0.44）,P<0.05]。（2）Western印迹结果显示白藜芦醇苷上调了ZO-1、Occludin、Claudin-5（均P<0.05）的表达水平。（3）免 疫荧光结果显示:白藜芦醇苷组上调了CD-31 在皮层缺血半暗带区的表达,且可见微血管形态相较缺血再灌注组更加光滑、完 整,同时白藜芦醇苷减少了ZO-1、Claudin-5 的破坏。结论:白藜芦醇苷的干预对缺血再灌注损伤小鼠起到了保护血脑屏障的作 用,上调了紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-5 的表达水平。     

香叶木素对脓毒症所致小肠损伤大鼠模型的治疗作用

目的 探讨香叶木素（diosmetin, Dio）对脓毒症所致小肠损伤大鼠模型的治疗作用及相关机制。方法 利用盲肠结扎穿刺法构建脓毒症小肠损伤大鼠模型,将大鼠随机分为对照组(术后每日后腹腔注射生理盐水20 mg·kg-1,连续7 d)、模型组(术后每日后腹腔注射生理盐水20 mg·kg-1,连续7 d)、治疗组(术后每日腹腔注射Dio 20 mg·kg-1,连续7 d),每组10只。HE染色法观察各组大鼠小肠组织形态学改变;激光多普勒灌注成像仪检测3组大鼠小肠黏膜下血流灌注情况;ELISA方法检测3组大鼠小肠组织中IL-1β、IL-6以及TNF-α水平;Western blot检测3组大鼠小肠组织中ZO-1、Claudin-1及NF-κB p65表达水平;3组大鼠小肠组织切片进行免疫荧光染色。结果 Dio治疗可减轻脓毒症对小肠的损伤,使小肠形态得到明显改善;与模型组相比,Dio治疗可显著改善脓毒症大鼠空肠黏膜血流灌注（P<0.05）;Dio治疗组大鼠小肠组织中的炎症因子（IL-1β、IL-6及TNF-α）与模型组相比均显著下降（P<0.05）;与模型组相比,Dio治疗组大鼠小肠组织中ZO-1、Claudin-1及NF-κB p65水平显著下降（P<0.01）;免疫荧光染色显示Dio治疗组NF-κB p65数量明显下降。结论 Dio通过抑制NF-κB对脓毒症小肠损伤具有治疗保护作用。     

缺氧缺血对体外血脑屏障通透性的影响及其机制的研究

目的：探讨血脑屏障紧密连接（BBB-tight junction，BBB—TJ）蛋白和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在缺氧缺血诱导的体外血脑屏障（BBB）模型通透性增加中的作用及相互关系。方法：ECV304与原代培养的星形胶质细胞共培养建立体外BBB模型。实验分为正常对照组（C组）、缺氧缺血组（H／I组）、BB-1101预处理组（P组）3组。透射电镜分别观察各组BBB-TJ变化；通过吖计数仪测定核素标记牛血清白蛋白（^125I-BSA）通透量检测BBB屏障功能。直接免疫荧光观察细胞骨架蛋白Actin分布的改变，Westemblot检测Actin、Occludin、ZO-1和MMP-9表达量的改变。结果：电镜观察见C组内皮细胞间形成光滑、连续、较高密度的紧密连接，免疫荧光检测见细胞骨架蛋白Actin主要分布在细胞膜及细胞核周边。形成肌动蛋白丝带，轮廓内包含大量柬状排列有序的微丝结构，细胞间连接紧密。缺氧缺血后．H／I组细胞间连接开放，形成裂隙，而胞膜及胞核周边肌动蛋白丝带模糊、部分断裂，并有应力纤维形成，出现细胞间裂隙，BBB对岱I—BSA通透性明显增高，与C组和P组比较，差异有显著性（P〈0．01），同时ZO-1的表达量显著减少，MMP-9的表达显著增多，而Occludin和Actin的表达量无改变。BB-1101预处理后，P组细胞BBB-TJ破坏减少．周边肌动蛋白丝带重新出现，细胞间裂隙较少，岱I-BSA通透量较H／I组明显下降（P〈0．01）．MMP-9的表达较H／I组也明显减少（P〈0.01）。结论：（1）缺氧缺血能促使BBB—TJ的开放进而导致BBB通透性增加；（2）BBB-TJ的开放可能与BBBActin的重组及ZO-1的表达量降低有关；（3）缺氧缺血能增加MMP-9的表达：（4）MMP-9与缺氧缺血时BBBActin的重组及ZO—1的表达减少相关。     

健脾祛湿膏对大鼠胃肠功能的调节作用

目的探究健脾祛湿膏对大鼠胃肠功能的调节作用。方法采用冰番泻叶水煎液灌胃结合过度游泳复制脾虚腹泻大鼠模型,给药干预14 d后,检测各组大鼠胃内残留率和小肠推进率,采用酶联免疫吸附法(ELSIA)检测各组大鼠血清中生长抑制素(SS)、血浆中胃动素(MTL)、血管活性肠肽(VIP)水平,结肠水通道蛋白(AQP3)和肾脏水通道蛋白(AQP2)水平,采用蛋白印迹法(Western blot)检测各组大鼠结肠组织Occludin和Claudin-1蛋白水平。结果与模型组相比,健脾祛湿膏组大鼠小肠推进率、MTL和结肠AQP3水平上升,结肠Occludin和Claudin-1蛋白水平增加,胃内残留率、VIP、SS和肾脏AQP2水平降低。结论健脾祛湿膏可能通过上调MTL和结肠AQP3水平、结肠Occludin和Claudin-1蛋白表达,下调VIP、SS和肾脏AQP2水平,改善脾虚腹泻大鼠胃肠功能,从而达到治疗效果。     

Claudins蛋白及其在急性肾损伤中的研究进展

紧密连接蛋白由多种跨膜蛋白共同构成,包括claudin、occludin和连接粘附分子（JAMs）,以及相应的适应蛋白和粘连蛋白如ZO-1、ZO-2、ZO-3、菌环蛋白等外周胞浆蛋白组成。紧密连接不仅能调控离子从细胞一侧扩散到另一侧,还能阻止细胞膜顶端和基底侧面成分的相互混合,对保持细胞的极性有重要作用,而且参与细胞增殖、分化的调节。     

紧密连接蛋白claudin-1在肠易激综合征患者肠黏膜中的表达及意义

目的 探讨肠易激综合征(IBS)患者肠黏膜紧密连接蛋白claudln-1表达在排便性状和习惯改变中的意义.方法 用免疫组化方法检测对照组(痔疮10例、结肠息肉10例)和观察组(43例IBS患者,腹泻型23例、便秘型20例)小肠和结肠黏膜claudin.1表达.结果 免疫组化定位显示两组肠黏膜claudin.1均分布于肠上皮紧密连接的细胞膜,胞核及核膜无表达;与对照组比较,观察组腹泻型患者小肠和结肠黏膜clandin-1表达明显下降(P＜0.05),便秘型患者clandin-1表达明显上升高(P＜0.05),腹泻型与便秘型比较有显著差异(P＜0.05).结论 claudin-1表达异常在IBS患者排便性状和习惯改变形成中可能有重要作用.     

表皮生长因子对脑缺血血脑屏障的保护作用

目的血脑屏障(BBB)破坏是缺血再灌注损伤的重要标志,而表皮生长因子(EGF)具有增强紧密连接功能。本研究考察EGF对脑缺血BBB的保护作用。方法建立bEnd3的单细胞BBB模型,通过荧光黄渗透系数测定及紧密连接蛋白claudin-5和ZO-1免疫染色法评价BBB模型的紧密连接性;通过bEnd3细胞建立4 h糖氧剥夺模型,检测claudin-5和ZO-1的m RNA和蛋白表达水平、荧光黄渗透系数及细胞凋亡,考察EGF(250μg·L-1)对BBB的保护作用。结果 bEnd3细胞显著阻碍荧光黄的通透,其渗透系数为(1.3±0.13)×10-3cm·min-1,claudin-5和ZO-1免疫染色呈阳性,EGF可显著抑制糖氧剥夺引起的claudin-5和ZO-1表达减少和荧光黄通透性增加,此外对细胞活性无显著影响。结论本研究建立了一种基于bEnd3细胞的BBB体外模型,发现EGF对脑缺血BBB具有保护作用,可为缺血性脑卒中治疗提供新的潜在靶点和思路。