野生型INK4a/ARF基因共转染对A549细胞生物学行为的影响

背景与目的INK4a／ARF基因是重要的细胞周期调控基因，其表达产物p16INK4a和p14ARF蛋白分别在Rb和p53通路中发挥重要调节作用。本研究将野生型INK4a／ARF基因同时转染到该基因位点缺失的人肺腺癌A549细胞中，研究其对该细胞生物学行为的影响。方法利用阳离子脂质体介导的基因转染技术，将含有人全长野生型INK4a／ARF基因的真核表达重组质粒pcDNA3-p16INK4a和pcDNA3-p14ARF同时导入A549细胞系中，确定所编码蛋白p16INK4a和p14ARF稳定表达；在设立空白组和空质粒转染组的情况下，进行了转染前后细胞生长曲线、克隆形成率、周期分布、凋亡指数等指标的检测和分析。结果转染INK4a／ARF基因后的细胞G0／G1期比例为59．9％，与未转染（51．2％）及空质粒转染（50．3％）细胞相比差异显著（P值分别为0．043和0．025），同时S期和G2／M期的比例下降；转染后细胞克隆形成率为63％，未转染细胞和空质粒转染细胞分别为85％和87％（P值均〈0．01），凋亡指数明显增加，转染INK4a／ARF基因后的细胞凋亡率为8．0％，另两种细胞均为2．7％，差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论阳离子脂质体可以有效地将INK4a／ARF基因导入A549细胞，并可以抑制A549细胞的生长，促进凋亡作用的增强，为将来肺癌的基因治疗提供了实验依据。     

Inhibition of Proliferation of Human Osteosarcoma Cells Transfected with PIN1 Antisense Gene

目的观察以pIRES2-EGFP质粒为载体的PIN1反义基因转染对人骨肉瘤细胞增殖的抑制作用。方法用不同量(0、20、50、100、200、250μL)的以pIRES2-EGFP质粒为载体包装的反义PIN1基因转染人骨肉瘤细胞系MG-63细胞,收集转染前后的培养细胞和上清液,用MTT法观测转染前后细胞生长曲线;用流式细胞仪观测细胞生长周期变化和细胞凋亡情况;用免疫印迹法(Western-blot)检测Pinl蛋白的表达变化;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PIN1mRNA表达变化。结果MTT法和流式细胞仪显示反义PIN1基因转染能抑制细胞生长,促进其凋亡;Western-Blot结果表明转染反义Pin1基因的量越多,其灰度越低,测得空白对照组及不同量(0、20、50、100、200、250μL)的转染基因组其相应的吸光度比值分别为0．854±0．136、0．866±0．138、0．732±0．154、0．611±0．121、0．547±0．109、0．398±0．113、0．320±0．151,差异有显著性(P<0．05);RT-PCR检测其灰度比值分别为0．983±0．125、0．988±0．127、0．915±0．157、0．786±0．125、0．608±0．124、0．433±0．130、0．410±0．158,差异有显著件(P<0．05)。结论反义Pin1基因可封闭Pin1mRNA,使已转染反义Pin1基因的MG-63细胞表达的Pin1蛋白减少,从而抑制人骨肉瘤细胞MG- 63增殖。     

葛根素联合辛伐他汀治疗不稳定心绞痛疗效观察

在常规治疗的基础上。采用葛根素联合辛伐他汀治疗81例不稳定型心绞痛（UAP）患者，现报道如下。     

两种剂量辛伐他汀在急性冠脉综合征早期应用的临床研究

他汀类药物治疗不仅全面调／降脂，还可降低心血管事件的危险和病死率。急性冠脉综合征（ACS）早期应用他汀类药物治疗除有调降脂效益外，也有心脑血管保护作用，包括稳定斑块，改善内皮功能，减少炎症反应及抑制血栓形成等，从而降低心脑血管事件的发生，而且用药安全。本组研究观察两种不同剂量辛伐他汀在ACS早期应用的有效性及安全性。报告如下：     

人IL-24基因在CHO细胞中的表达及其抗肿瘤效应

目的构建人IL-24基因真核表达载体,在CHO细胞中进行稳定表达,并检测重组表达蛋白rhIL-24的抗肿瘤活性。方法将测序验证的人IL-24基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3,构建重组真核表达载体pcDNA3-hIL-24,转染CHO细胞进行稳定表达,经RT-PCR鉴定后用MTT法、Ho-echst染色和流式细胞术检测CHO细胞表达的rhIL-24诱导A549人肺腺癌细胞凋亡的抗肿瘤效应,用ELISA检测其刺激免疫细胞分泌IL-6和IFN-γ的功能。结果经双酶切和PCR鉴定,重组真核表达载体构建正确,人IL-24在CHO细胞中获得稳定表达,且所表达的人IL-24具有较强的诱导A549人肺腺癌细胞凋亡及上调免疫细胞表达IL-6和IFN-γ的免疫刺激活性。结论人IL-24基因的稳定表达和抗肿瘤效应的实验研究,为进一步研究人IL-24抗肿瘤的分子机制及潜在的应用奠定了基础。     

眶额叶皮质在条件性线索诱发渴求神经生物学机制的研究进展

世界范围内的毒品蔓延与泛滥已成为国际公害，严重影响了人类健康与社会稳定。在我国滥用人数最多、复吸率最高、危害最严重的毒品为海洛因。目前普遍认为对药物的强烈渴求（craving）是导致复吸的重要原因之一。国外学者研究发现与药物有关的环境线索与药物滥用多次同时出现后可演变为与成瘾药物同等的条件反射刺激，甚至比药物本身具有更大的吸引力，足以诱发出成瘾者对药物强烈的渴求心理和情绪反应，并进一步导致强迫性的觅药和用药行为。     

抑制端粒酶活性对人肾癌细胞生长的抑制作用

目的 :探讨抗端粒酶在肾细胞癌治疗中的意义。方法 :采用脂质体介导法将pBBS2 12 hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体 )导入人肾癌GRC 1细胞系中 ,采用TRAP法测定端粒酶活性 ,通过MTT法检测细胞动力学 ,观察细胞的增殖 ,电镜下观察其对细胞凋亡的影响。结果 :端粒酶反义RNA能显著抑制细胞的端粒酶活性 ,抑制细胞增殖并促进其凋亡。结论 :以端粒酶反义RNA抑制端粒酶活性是治疗肾癌的潜在途径     

多药耐药基因转染脐血单个核细胞及其表达与功能的体外研究

目的：为克服白血病化疗中的骨髓抑制，采用含人多药耐药（MDR1）基因全长cDNA逆转录病毒载体转染入脐血单个核细胞，探索一种MDR1基因导入脐血造血细胞稳定、有效的方法，评价MDR1基因转染脐血细胞及其功能的表达，为体内转染MDR1基因保护骨髓免受大剂量化疗药物损伤提供条件。方法：采用含有MDR1基因表达质粒pHaMDR1/A的包装细胞PA317传代培养产病毒法，通过浓缩病毒上清液将MDR1基因导入人脐血单个核细胞，应用聚合酶链反应（PCR）方法、免疫组化法、流式细胞学等方法从基因、蛋白质、功能及细胞生物学特性等不同水平检测MDR1基因在脐血单个核细胞的表达、转染率及其与转染时间的关系和功能的表达；转染行为是否影响脐血细胞生物学特性。结果：（1）建立了一种安全可行、稳定高效的MDR1基因体外转染脐血造血细胞的体系和方法；（2）PCR方法证实外源性MDR1基因可有效性地体外整合到脐血单个核细胞中；（3）免疫组化法测得2日、4日、6日转染率分别为18.0%、29.8％、34.7%;(4)柔红霉素排出试验证实导入的MDR1基因表达产物P-gp有正常的生物学功能；（5）转染后的脐血细胞周期生物学特异性无异常。结论：MDR1基因体外转染脐血造血细胞是安全可行的，且在体外有稳定、有效的表达。这一方法为进一步在化疗骨髓保护的体内实验提供了有利的依据。     

探讨MDR1基因转染k562细胞的最适条件

化疗实施中引起的肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性和化疗药物引起的骨髓抑制是化疗成功的最大障碍[1] 。本研究选用人类ｋ5 6 2细胞株作为多药耐药基因 (ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅ1,ＭＤＲ1)转移的靶细胞 ,了解最适的转染方式与条件 ,为进一步将ＭＤＲ1基因转染人骨髓干祖细胞及评估其在化疗中对骨髓造血细胞保护的可行性与可靠性奠定基础。材料与方法一、实验材料质粒 ｐＨａＭＤＲ1/Ａ由美国国立癌症研究所ＭｉｃｈａｅｌＭ .Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ教授惠赠。ｋ5 6 2细胞 (人类慢性粒细胞白血病急性红白变细胞系 )由重庆…     

原发上皮性卵巢癌患者血清中内皮稳定素水平的测定及其临床意义

目的：探讨内皮稳定素在原发上皮性卵巢癌血清中的表达水平及其与病理类型、临床分期和组织分化程度的关系。方法：采用竞争性酶联免疫的方法定量测定患者血清中内皮稳定素的水平。结果：原发上皮性卵巢癌患者（术前）血清中内皮稳定素水平低于正常妇女（P＜0．05）；患者血清中内皮稳定素水平在手术后明显升高（P＜0．05）；不同病理类型、临床分期和分化程度的卵巢癌患者血清中的内皮稳定素水平，无显著性差异（P＞0．05）。结论：内皮稳定素在原发上皮性卵巢癌患者血清中呈低水平表达；可能为应用内皮稳定素进行卵巢癌的抗血管生成治疗提供了一定的实验室依据。