兔骨髓间充质干细胞的分离、培养与鉴定

背景：目前对骨髓间充质干细胞常用的分离方法有密度梯度离心法、贴壁筛选分离法。目的：联合应用密度梯度离心法和贴壁筛选分离法体外分离培养、扩增兔骨髓间充质干细胞，并对其进行鉴定。设计、时间及地点：对比观察的细胞学实验，于2007-10／2008-03在上海市第六人民医院中心实验室完成。材料：2月龄新西兰纯种大耳白兔6只用于骨髓间充质干细胞取材与原代培养，1．073kg／L的Percoll分离液。方法：实验采用Percol分离液利用密度梯度离心法及结合贴壁分离筛选法来分离、纯化骨髓间充质干细胞，在采用密度梯度离心法得到骨髓间充质干细胞后，经贴壁培养及反复换液纯化骨髓间充质干细胞。分别取第3，5，7，9代骨髓间充质干细胞，行细胞计数，绘制细胞生长曲线。主要观察指标：倒置显微镜下观察原代及传代细胞的形态、生长情况。采用CD44及CD34抗体进行间接免疫荧光标记鉴定培养的干细胞。CD44染色呈阳性，CD34染色呈阴性，说明所提取、纯化的细胞是骨髓间充质干细胞。结果：增殖传代的骨髓间充质干细胞呈长梭形均匀分布生长，形态比原代培养的细胞更均匀，细胞生长旺盛、增殖迅速，胞核明显，核仁清晰，核浆比例大，细胞形态均匀，平行排列呈螺旋状或漩涡状，传代至第5代时无明显变化。随传代次数的增加，细胞增殖能力逐渐下降，第3～5代细胞增殖能力强。所分离培养的细胞均表达CD44，不表达CD34。结论：在体外采用密度梯度离心及贴壁培养法可获得高纯度的兔骨髓间充质干细胞。     

延迟性肌肉酸痛的机制及其理论研究

延迟性肌肉酸痛妨碍了大部分运动员或普通人运动能力的发挥,因此探讨延迟性肌肉酸痛的产生机制对于预防或治疗延迟性肌肉酸痛有着举足轻重的作用。但诱发延迟性肌肉酸痛的内在机制尚未完全清晰。新近的一些研究成果表明延迟性肌肉酸痛可能与肌节重塑过程、微循环紊乱和外周神经系统的变化有关。文章就形成延迟性肌肉酸痛的机制学说进行述评,并试图依据此提出相应治疗原则。     

等速离心肌力训练治疗膝关节骨关节炎的研究

运动Ｃｙｂｅｘ－６０００型等还肌力测试和训练系统对２０例膝关节骨关节炎患者进行 量等速离心肌力训练，观察训练对患膝肌力、疼痛及下肢功能的影响。结果表明：经过４周的训练，患膝 伸肌群各项测试指标均有不同程度提高，疼痛明显缓解，下肢功能显著改善。说明亚极量等速离心训练对膝关节骨关节炎２的近期疗效是明显的。     

离心对尿液低浓度红细胞镜检定量计数的影响

目的:探讨对低浓度红细胞尿液(10/μl-100/μl)使用不离心法镜检计数红细胞的可能性.方法:尿液中加入定量红细胞,理论定值为10/μl、25/μl、50/μl、100/μl.用离心镜检法和不离心镜检法计数红细胞.结果:离心镜检法与理论定值浓度差异较大,均值为4.52/μl、13.39/μl、29.91/μl、56.74/μl,平均偏差-46.15%;不离心镜检法结果与实际浓度比较接近,均值为9.11/μl、23.43/μl、47.42/μl、97.06/μl,平均偏差-5.82%;两法相比,t=2.52,P＜20.05,结果有显著性差异.结论:在尿液红细胞浓度较低时,不离心镜检计数比离心镜检计数更能敏感、准确地放映红细胞实际浓度.     

离心淘洗技术在分离大鼠肝非实质细胞亚群中的应用

目的采用离心淘洗技术分离纯化大鼠肝非实质细胞亚群.方法通过原粒肝脏酶灌注,准备肝非实质细胞悬液,离心淘洗,收集不同流速(20和40ml/min)的细胞群.结果经培养鉴定,流速21ml/min获得的为肝窦内皮细胞,40ml/min的为库普弗细胞,细胞纯度均大于95%.结论在本实验室,离心淘洗技术已能成功应用于肝脏细胞分离过程.     

离心淘洗技术在分离大鼠肝非实质细胞亚群中的应用

目的：采用离心淘洗技术分离纯化大鼠肝非实质细胞亚群。方法：通过原粒肝脏酶灌注,准备肝非实质细胞悬液,离心淘洗,收集不同流速(20和40ml／min)的细胞群。结果：经培养鉴定,流速21ml／min获得的为肝窦内皮细胞,40ml／min的为库普弗细胞,细胞纯度均大于95％。结论:在本实验室,离心淘洗技术已能成功应用于肝脏细胞分离过程。     

离心收缩训练联合ESWT对网球肘患者的疗效及预后评估

目的研究离心收缩训练联合体外冲击波疗法(ESWT)对网球肘患者的疗效及预后的影响。方法随机选取2015年12月-2017年12月于我院就诊的网球肘患者120例,按照随机数字表法分为两组,各60例。对照组采用ESWT治疗,观察组在对照组基础上给予离心收缩训练,两组患者均治疗6周,并在治疗后随访6个月。检测两组患者治疗前后炎症因子水平,采用视觉模拟疼痛评分(VAS)评估治疗前后疼痛情况,评估治疗前后无痛握力水平,采用日常生活活动能力调查问卷(ADL)评估患者治疗前后日常生活能力,统计治疗后随访期间复发率。结果治疗后两组患者白细胞介素-1(IL-1)、NO及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平均低于治疗前(P0.05);治疗后各时间点观察组VAS评分低于对照组,无痛握力均高于对照组,ADL得分均高于对照组(P0.05)。观察组治疗后总复发率(8.33%)低于对照组(26.67%)(P0.05)。结论离心收缩训练联合ESWT治疗网球肘VAS评分更低,复发率更低。     

成年鼠被毛毛乳头细胞分离方法的建立与评价

目的 寻求一种简单高效的分离培养小鼠被毛毛乳头细胞的方法.方法 取5周龄C57小鼠背部皮肤,刮去毛发后予0.2％Ⅰ型胶原酶37℃消化2h,刮下毛球部,经过2次Ficoll密度梯度离心后,得到纯净的毛乳头进行培养.检测毛乳头贴壁率、毛乳头细胞特异性标记表达及其体内毛囊重建能力.结果 该分离方法能显著降低工作强度,减少污染机会,获得的毛乳头贴壁快、细胞迁出快.qRT-PCR、细胞免疫荧光实验结果均证实体外培养的小鼠被毛毛乳头细胞可表达与毛囊诱导能力相关的特异性标记物ALP、β-catenin及Versican,且与触须毛乳头细胞相比差异无统计学意义(P＞0.05).体外培养的小鼠被毛毛乳头细胞具有诱导毛囊再生的能力.结论 胶原酶消化结合Ficoll梯度离心是一种简单、有效地分离获取小鼠背部毛乳头的方法.     

基于免疫磁珠法的不同筛选方案对胎儿有核红细胞富集效果的比较

目的：将密度梯度离心(density gradient centrifugation,DGC)与免疫磁珠法(magnetic-activated cell sorting,MACS)相结合,应用4种不同的筛选方案,对脐血中的胎儿有核红细胞(fetal nucleated red blood cells,FNRBC)进行分离,评估不同策略富集FNRBC的效果。方法：对10例脐血标本(12 mL/例)按4种不同方案进行筛选：DGC;DGC⁺MACS阴性筛选(CD45^-);DGC⁺MACS阳性筛选(CD71⁺);DGC⁺MACS阴性/阳性筛选(CD45-/CD71⁺)。通过细胞计数板计数,K-B染色后显微镜下人工FNRBC计数,从获得总细胞量、FNRBC量和FNRBC比例经t检验后评估不同方案富集FNRBC的效果。结果：(1)与其他3组相比,DGC方案可获得的总细胞量(0.95×10⁷/mL)最多,FNRBC数量(39.87/mL)最多,F...     

家兔脂肪组织总RNA提取方法的比较

目的对2种常用的脂肪组织总RNA提取方法进行比较,优选出脂肪组织提取的方法。方法取家兔新鲜脂肪组织,分别用2种不同的方法提取总RNA:1.离心柱法:用UNIQ-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒处理脂肪组织。2.Trizol法:利用传统Trizol法手提总RNA。提取后对2种不同的方法提取的总RNA进行比较。结果传统Trizol法提取的总RNA的纯度及完整性均较高,优于离心柱法。Trizol法和UNIQ-10离心柱法提取的总RNA分别取3个样品进行测定,其A260/A280的平均值分别为1.598和1.562。结论用Trizol法提取的脂肪组织总RNA效果较好,优于离心柱法。