“智七针”对非痴呆型血管性认知功能障碍的影响及其部分机制研究

目的:观察"智七针"对非痴呆型血管性认知功能障碍的临床疗效及探讨其部分机制。方法:选取2013年1月至2015年1月绵阳市中医院神经内科就诊的VCIND患者60例,随机分为对照组和观察组,每组30例,2组患者均口服多奈哌齐(5 mg/次,1次/d)或石杉碱甲(100μg/次,2次/d),观察组在此基础上加"智七针",1次/d,30 min/次,针刺5次/周。2组患者均连续治疗3个月,分别比较2组患者治疗前、治疗1个月及治疗3个月后蒙特利尔量表(Montreal scale,MoCA)、数字广度(Digit Span,DST)、听觉词语学习测试(Auditory Words Learning Test,AVLT)及语言流畅性测试(language fluency test,VFT)的变化,同时检测2组治疗前后外周血清JNK信号通路上标志性蛋白表达变化。结果:1)治疗1个月后观察组在Mo CA总分、AVLT总分及VFT较治疗前明显增加,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05),而DST评分2组治疗后均较治疗前改善(P0.05),但治疗后2组评分相仿(P0.05)。治疗3个月后观察组Mo CA、AVLT及VFT均明显优于对照组,差异均有统计学意义(P均0.05)。DST评分2组治疗后3个月后组间差异无统计学意义(P0.05)。2)2组治疗后p JNK浓度较治疗前下降,其中观察组下降趋势较明显(P0.05)。结论:智七针可明显改善非痴呆型血管性认知功能障碍患者认知能力,其作用机制可能与降低JNK磷酸化有关。     

PKD2与GOLPH3在胆囊癌组织中的表达及意义

目的:探讨蛋白激酶D2(PKD2)与高尔基磷酸化蛋白3(GOLPH3)在胆囊癌组织中的表达及意义。方法:应用免疫组织化学的方法测定并比较68例胆囊癌、20例正常胆囊组织PKD2、GOLPH3的表达,分析它们与胆囊癌患者临床病理特征及预后的关系。结果:胆囊癌组织PKD2、GOLPH3阳性表达率均明显高于正常胆囊组织（均P＜0.05）;PKD2在胆囊癌组织中的表达与患者肿瘤TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.05),而GOLPH3的表达与肿瘤TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关(P＜0.05)。相关性分析显示胆囊癌中PKD2与GOLPH3表达呈正相关(r=0.500,P＜0.05);生存分析显示PKD2、GOLPH3表达阳性胆囊癌患者生存率明显低于各自阴性者（均P＜0.05）。结论:PKD2与GOLPH3可能在胆囊癌的发生、发展过程中起重要作用,且PKD2、GOLPH3的阳性表达为胆囊癌的不良预后因素。     

高尔基磷酸化蛋白3在胆囊癌组织中表达的临床意义及其与血管生成的关系

背景与目的:胆囊癌是来源于胆道系统的恶性肿瘤,其起病隐匿、恶性程度高、预后极差。高尔基磷酸化蛋白3(GOLPH3)是一种癌基因,其通过启动一系列信号通路参与肿瘤的发生、发展。目前GOLPH3在胆囊癌中的表达及其临床意义尚未见报导。由于血管生成是肿瘤生长的必要条件,故本研究探讨GOLPH3在胆囊癌组织中的表达及其与促血管形成因子VEGF、肿瘤血管生成的关系。方法:收集中国人民解放军联勤保障部队第九〇四医院2010年1月-2018年12月期间手术切除的胆囊癌组织标本80例及慢性胆囊炎组织标本30例,采用免疫组化的方法检测标本中GOLPH3、VEGF的表达及肿瘤微血管密度(MVD)计数(以CD34的表达标记)。分析GOLPH3、VEGF、MVD计数与胆囊癌患者临床病理特征及预后的关系,并分析胆囊癌组织中GOLPH3、VEGF表达与MVD计数三者的相关性。结果:胆囊癌组织GOLPH3、VEGF的阳性表达率及MVD计数均明显高于慢性胆囊炎组织(均P<0.05)。胆囊癌组织GOLPH3与MVD的表达与患者肿瘤分化程度、有无淋巴结转移、TNM分期有关(均P<0.05),而VEGF的表达与患者TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。胆囊癌组织中GOLPH3表达与VEGF表达呈正相关(r=0.437,P<0.05),并且两者的表达均与MVD计数呈正相关(r=0.416、0.433,均P<0.05)。生存分析显示,GOLPH3、VEGF表达阳性胆囊癌患者生存率明显低于各自的阴性表达患者(χ~2=5.300、6.023,均P<0.05),而高MVD计数胆囊癌患者生存率明显低于低MVD计数患者(χ~2=11.986,P<0.05)。结论:GOLPH3的表达与胆囊癌的恶性临床病理特征及胆囊癌患者的不良预后密切相关,基于GOLPH3与VEGF及MVD之间的相关性推测,它可能通过影响VEGF的表达来促进肿瘤的血管生成,进而促进胆囊癌的生长及转移。     

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏时红细胞膜带3蛋白酪氨酸磷酸化的改变

目的：从红细胞膜蛋白磷酸化改变的角度探讨葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症溶血的机制。方法：Western blot法检测G6PD缺乏症的红细胞膜蛋白磷酸化的改变以及二硫苏糖醇（DTT）对蛋白磷酸化的影响；以对硝基苯磷酸（PNPP）为底物，测磷酸酪氨酸磷酸酶（PTPs)活性以探讨磷酸化改变的可能成因。结果：G6PD缺乏的红细胞膜带3（Band 3)蛋白酪氨酸的磷酸化水平较正常对照明显增多，而PTPs活性检测较正常对照组明显减弱；DTT处理的G6PD缺乏红细胞，其膜Band 3蛋白酪氨酸的磷酸化与未处理者无明显差异，PTPs活性检测结果与未处理者亦无显著差异。结论：氧化致使G6PD缺乏红细胞的PTPs活性减弱，膜Band 3蛋白酪氨酸磷酸化增强，成为红细胞溶血的一个重要原因。但PTPs巯基的改变并不是影响PTPs活性的唯一因素。     

STI571诱导K562细胞凋亡机制研究

目的　研究格列卫 (Glivec ,STI5 71)诱导P2 10BCR/ABL(+)K5 6 2细胞凋亡机制。方法　采用Annexin Ⅴ /PI双染实验、DNA的PI染色、碘化二己基恶碳菁 (DiOC6 [3])染色、2 ,7 二氯荧光素二乙酸酯 (DCFH DA)染色及DNALadder等方法测定凋亡细胞。利用Westernblot实验分析K5 6 2细胞蛋白酪氨酸磷酸化水平 ,测定Bcl XL、caspase 3蛋白的表达并分别测定线粒体及胞浆部分的细胞色素C(cytoC)蛋白。结果　STI5 71可诱导K5 6 2细胞凋亡 ,出现DNA亚二倍体凋亡峰及DNALadder,线粒体跨膜电位及活性氧物质降低 ,P2 10BCR/ABL酪氨酸磷酸化水平降低 ,Bcl XL、蛋白减少 ,caspase 3蛋白前体活化降解出相对分子质量为 2 0× 10 3 亚单位 ,胞浆部分出现cytoC ,同时线粒体cytoC减少。结论　STI5 71可迅速使P2 10BCR/ABL酪氨酸磷酸化水平下降 ,线粒体cytoC胞浆转位介导的信号通路是STI5 71诱导K5 6 2细胞凋亡的途径之一 ,STI5 71是有效的基因靶向治疗剂     

CD151基因转移对大鼠心肌梗死缺血心肌eNOS表达影响的实验研究

目的 通过将携带人CD151基因的重组腺病毒相关病毒(rAAV)载体注入缺血心肌,观察CD151对缺血心肌eNOS表达的影响.方法 制作大鼠急性心肌梗死模型,将rAAVCD151注入缺血心肌.4周后取注射部位心肌,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测外源性CD151 mRNA的表达,Western blot检测CD151的表达,检测eNOS的表达情况,了解高表达CD151对eNOS表达的影响.结果 术后4周,CD151组心肌组织检测到外源性CD151 mRNA的表达,假手术组、对照组、GFP组未检测到外源性CD151 mRNA的表达,且CD151组心肌组织CD151蛋白表达水平高于假手术组、对照组、GFP组(P＜0.05);CD151组eNOS与磷酸化eNOS比值明显增加,与对照组、GFP组比较明显增加(P＜0.05).结论 rAAV-CD151可以有效地转染大鼠心肌组织,激活eNOS,促进缺血心肌的血管生成,改善左室功能.     

小鼠短暂前脑缺血海马区半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原表达形式的变化

背景脑缺血再灌注损伤后,细胞凋亡执行因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原表达量及蛋白酶活性明显增加,针对其磷酸化与去磷酸化两种形式进行观察,了解其在脑缺血再灌注损伤时的变化情况.目的观察脑缺血再灌注时小鼠脑海马区中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原表达形式的变化.设计随机对照实验.单位首都医科大学生物化学与分子生物学系.地点和材料实验于2003-06在首都医科大学附属北京朝阳医院高压氧科实验室进行.按随机数字将30只雌性SPF级C57BL/6N小鼠分为假手术组、缺血再灌注6,12,24和48 h 5组,每组6只小鼠.方法缺血再灌注的4组小鼠夹闭双侧颈总动脉20 min后再通血流,建立前脑缺血再灌注动物模型,分别于再灌注6,12,24及48 h取脑海马;假手术组不夹闭颈总动脉,24 h后取脑海马.用蛋白免疫印迹法测定脑海马中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3酶原表达的变化.主要观察指标各组小鼠脑海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原总量,及其磷酸化和去磷酸化水平比较.结果经补充后30只小鼠进入结果分析.①脑海马区总半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原水平缺血再灌注12,24 h组显著高于假手术组(9 133.1±2 216.3,9 355.9±1 901.6,P＜0.05).②去磷酸化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原水平缺血再灌注24 h组显著高于假手术组(7 812.0±1 625.1,3 825.8±155.6,P＜0.05).③磷酸化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原水平各组与假手术组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论结果提示脑缺血再灌注损伤诱发半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原表达增加;其中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原去磷酸化水平升高明显,说明脑缺血再灌注损伤可能诱发半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原去磷酸化,继而促进其转化为活性形式.     

法舒地尔对SH-SY5Y细胞氧糖剥夺后突触损伤的影响

目的:探讨法舒地尔(Fasudil)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)氧糖剥夺(OGD)后突触损伤的影响。方法:培养SH-SY5Y细胞,分为空白对照组、OGD组、OGD+法舒地尔组,各3皿。相差光学显微镜下观察细胞突触损伤及修复的细胞形态;Western-Blot检测ROCKⅡ、磷酸化肌球蛋白磷酸酶(p-MYPT1)、突触后致密物-95(PSD-95)、突触素(Synaptophysin)等蛋白的表达情况。结果:形态学显示法舒地尔可有效修复OGD诱导的神经突触损伤。OGD组ROCKⅡ及p-MYPT1的表达明显高于空白对照组(P0.05),突触素及PSD-95的表达明显低于空白对照组(P0.01)。OGD+法舒地尔组ROCKⅡ及p-MYPT1表达水平低于OGD组(P0.05),而与对照组差异无统计学意义(P0.05);突触素和PSD-95表达水平高于OGD组(P0.01);PSD-95表达水平高于空白对照组(P0.05),突触素的表达与空白对照组差异无统计学意义(P0.05),结论:法舒地尔可有效修复OGD诱导的神经突触损伤,增加PSD-95、突触素的表达,抑制ROCKⅡ及p-MYPT1的表达。