降糖增效方对糖尿病大鼠肝脏胰岛素信号通路IRS1位点磷酸化的影响

目的通过观察降糖增效方对糖尿病大鼠肝脏胰岛素受体底物1(insulin receptor substrates 1,IRS1)磷酸化的影响来探讨该方发挥降糖增效作用的机制。方法将40只6~8周龄雄性ZDF(fa/fa)大鼠随机分为模型组、二甲双胍组(0.134 g/kg)、降糖增效方组(0.64 g/kg)、联合组(降糖增效方0.64 g/kg+二甲双胍0.134 g/kg),另选ZDF(fa/+)大鼠10只为正常组,连续干预6周;实验结束检测体空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、血清胰岛素水平(fasting insulin,FINS)、胰岛素抵抗指数(homeostatic model assessment of insulin resistance,HOMA-IR)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、口服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT);蛋白免疫印迹法(Western bloting)检测IRS1丝氨酸磷酸化位点ser307、ser612、ser1101表达。结果与模型组相比较,各治疗组大鼠FBG、FIns、HOMA-IR、OGTT2 h血糖水平、AUC、SCr、BUN显著降低(P<0.05,P<0.01);肝组织p-IRS1 Ser307、p-IRS1 ser612、p-IRS1 ser1101蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01);与二甲双胍、降糖增效方组比较,联合组大鼠FBG、FIns、HOMA-IR显著降低(P<0.05,P<0.01);OGTT2 h血糖水平以及AUC显著降低(P<0.05,P<0.01);肝组织p-IRS1 Ser307、p-IRS1 ser612、p-IRS1 Ser1101蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论降糖增效方降低糖尿病大鼠肝脏IRS1 ser307/612/1101位点磷酸化水平,这可能是其增加降糖疗效的机制。     

PHH3和Ki67蛋白在胃癌中表达的临床病理意义

目的 研究磷酸化组蛋白H3(phosphorylated histone H3,PHH3)与增殖细胞核蛋白Ki67在胃癌中的表达及其与患者预后的关系,寻找影响胃癌增殖和预后判断的标志物。方法 采用石蜡切片免疫组化EnVision染色法检测随访资料完整的70例胃癌及对应癌旁组织中PHH3和Ki67蛋白的表达,分析PHH3和Ki67表达与患者临床病理特征的关系及两者表达的相关性;采用单因素和多因素回归分析影响胃癌患者术后生存率的相关性因素。结果 胃癌组织的PHH3和Ki67高表达率高于癌旁组织(P<0.001),PHH3和Ki67在低分化、浸润深度T3～T4和有淋巴结转移的患者中表达高于中高分化、浸润深度T1～T2和无淋巴结转移的患者(P<0.05)。结论 PHH3表达上调可能参与了胃癌的发生与发展,并与侵袭、转移等恶性进展有关。     

他克莫司对大鼠肝脏组织蛋白磷酸酶2A和P-AKT表达的影响

目的 通过观察他克莫司对大鼠血糖、胰岛素水平、肝脏组织蛋白磷酸酶2A和磷酸化AKT表达的影响,进一步探究他克莫司导致血糖升高的机制。方法 将60只雄性SD大鼠（89.83?.44g）随机均分为他克莫司组和对照组,他克莫司组（n=40）,每日空腹（禁食水8小时）灌胃给药,剂量为4mg/kg?d;对照组（n=20）,每日空腹灌胃给予等量生理盐水,每月测量大鼠体重、空腹血糖, 5个月后处死大鼠,心脏穿刺取血,;取胰腺组织和肝脏组织,测大鼠血清胰岛素水平,行胰腺组织病理组织学观察,并对肝脏行组织处理和免疫组织化学技术检测肝细胞浆质中蛋白磷酸酶2A和磷酸化AKT的表达。结果 用药2个月后,他克莫司组大鼠的血糖水平明显高于对照组（P＜0.05）,他克莫司组大鼠的胰岛素分泌指数、胰岛素敏感指数和均明显低于对照组（P＜0.05）;胰岛素抵抗指数明显增高（P＜0.05）。他克莫司组大鼠与对照组相比,其肝细胞浆质内PP2A表达明显增加,磷酸化的AKT表达明显减少。结论 他克莫司导致胰岛细胞坏死,胰岛细胞数量减少,胰岛素的分泌降低、胰岛素敏感性下降、胰岛素抵抗增加,从而导致大鼠血糖升高。他克莫司增加大鼠肝脏组织PP2A的表达,减少肝脏组织磷酸化的AKT的表达,可能通过PI3K/AKT信号转导途径参与胰岛细胞凋亡和胰岛素抵抗,引起血糖的升高。     

依鲁替尼对伯基特淋巴瘤细胞生长抑制及诱导凋亡的作用及机制研究*

目的：研究依鲁替尼（ibrutinib）在体外对伯基特淋巴瘤细胞株Namawal的作用,探讨其可能的分子机制。方法：应用CCK8法,细胞周期分析法检测依鲁替尼作用于Namawal细胞株后,对其增殖、细胞周期等细胞生物学的影响;应用免疫荧光电镜观察药物作用该细胞株后48H细胞核变化;应用免疫印迹法检测ibrutinib作用于Namawal后BTK信号通路相关蛋白的变化。结果：经依鲁替尼处理后的Namawal细胞增殖受到明显抑制;依鲁替尼下调BTK信号通路上相关蛋白活性。结论：依鲁替尼通过抑制p-BTK活性抑制细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,是治疗Burkitt淋巴瘤的潜在新药。     

柴术理胃饮对功能性消化不良大鼠p-P38MAPK通路的调控作用

目的 观察柴术理胃饮对功能性消化不良(functional dyspepsia, FD)大鼠胃肠运动、下丘脑组织及p-P38MAPK通路的影响,探讨该方治疗FD的作用机制。方法 SPF级健康雄性SD大鼠60只,应用慢性疲劳、悬尾刺激和饮食失节方法建立FD模型,按随机数字表法将其分为空白组,模型组,柴术理胃饮低、中、高剂量组和多潘立酮组,每组10只,分别给予相应药物治疗,观察大鼠的一般状态,记录进食量和体质量,观察胃肠功能变化、下丘脑组织病理学改变,Western blot法和RT-PCR法检测大鼠胃窦组织中p-P38MAPK蛋白和基因表达。结果 各给药组大鼠治疗后的进食量和体质量、胃排空率和小肠推进率较模型组改善,差异均有统计学意义(P<0.05);不同剂量的柴术理胃饮均能不同程度地降低大鼠胃窦组织中p-P38MAPK蛋白和基因表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 柴术理胃饮通过改善FD大鼠的胃肠运动和降低大鼠胃窦组织中p-P38MAPK蛋白和基因表达来治疗FD。     

磷酸化蛋白质组学富集策略进展及其在疾病研究中的应用

蛋白质磷酸化是生物体内重要的翻译后修饰,几乎参与调节着细胞增殖、信号转导、新陈代谢、肿瘤发生等过程在内的所有生命活动。对磷酸化蛋白质组的全面分析可以帮助人们深入了解磷酸化蛋白在生命过程中的作用,协助发现生物标志物,辅助疾病的诊疗。然而,磷酸化蛋白丰度低、信号被非磷酸化肽段所掩盖等问题限制了磷酸化蛋白质组学的发展。因此,亟需开发高效的富集策略,如设计新型纳米材料,合并多种分析方法等,以提高检测灵敏度、富集特异性,增大富集容量。本文回顾了近年来磷酸化蛋白质组学研究策略中的富集策略进展及其在疾病研究中的应用。     

胰岛素通过PI3K/AKT/GSK3通路促多囊卵巢综合征患者子宫内膜病变机制的研究

目的 研究多囊卵巢综合征(PCOS)胰岛素抵抗(IR)与非抵抗患者子宫内膜的PI3 K/AKT/GSK3信号通路蛋白表达情况;探讨胰岛素在PCOS患者子宫内膜病变的作用机制.方法 以2006年3月至2010年5月北京天坛医院妇产科门诊治疗的34例PCOS患者为实验组,以同期因输卵管因素不孕行诊刮术的非PCOS患者30例为对照组.实验组患者行OGTT、INS实验及性腺6项测定,根据是否存在IR将PCOS患者分为Ⅰ组(IR组)和Ⅱ组(非IR组).对实验组和对照组患者子宫内膜石蜡标本应用免疫组化方法测定PI3K(磷脂酰肌醇-3激酶)、p-AKT(PPKB,磷酸化蛋白激酶B)、GSK3(糖原合成酶激3)的表达.结果 PCOS患者的PDK表达水平要明显高于对照组(P=0.000,0.003),其中PCOS Ⅰ组最高(P=0.022).在p-AKT表达上,PCOS患者要明显高于对照组(P=0.011,0.000),其中以PCOS Ⅰ组最高(P =0.002),而在GSK3表达上,PCOS Ⅰ组,Ⅱ组和对照组三组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论胰岛素信号通路PI3K、p-AKT可能是IR PCOS患者子宫内膜病变的信号转导通路.     

钙蛋白酶参与心力衰竭患者心肌重构的信号传导

目的 探讨钙敏感的信号物质钙蛋白酶(calpain)对心力衰竭(心衰)患心肌重构信号传导的调控。方法选择因二尖瓣狭窄伴关闭不全心脏病接受二尖瓣置换术的心衰患39例,正常对照38例(其中8例来自意外伤亡的器官捐献)。彩色多普勒超声心动图检测心功能参数,放免法检测心衰患血浆及心肌组织血管紧张素Ⅱ含量,免疫印迹法检测心肌组织calpain、钙调神经磷酸酶(CaN)的抑制蛋白(cain/cabin 1),cain／cabin 1降解产物(cain／cabin 1△)蛋白表达、CaN磷酸化。结果心衰患血浆及心肌组织血管紧张素Ⅱ浓度、心肌组织u-calpain、m-calpain、cain／cabin 1降解产物cain／cabin 1△蛋白表达及CaN磷酸化明显高于对照组,且随心功能恶化逐渐增加,cain／cabin 1蛋白表达随心功能恶化逐渐降低。结论心衰患通过calpain降解cain／cabin 1进而激活CaN信号通路,提示其在肾素一血管紧张素系统等介导的心肌重构中起一定作用。     

慢性脑低灌注大鼠海马CA1区VEGF和磷酸化tau蛋白的表达及意义

目的 观察慢性脑低灌注大鼠海马CA1区血管内皮生长因子(VEGF)和磷酸化tau蛋白的表达及意义.方法 将SD大鼠随机分为正常对照组(对照组)、假手术组和模型组.采用永久性结扎双侧颈总动脉建立慢性脑低灌注模型(2VO);实验开始后1、2、3月,应用免疫组织化学染色法检测海马CA1区VEGF和磷酸化tau蛋白的表达.结果 与对照组和假手术组比较,模型组海马CA1区VEGF表达在1、2月时明显增高(P＜0.05),3月时各组间表达差异无显著性(P＞0.05).磷酸化tau蛋白表达在1月时各组间差异无显著性(P＞0.05);2和3月时,模型组表达较对照组和假手术组明显增高(P＜0.05).结论 慢性脑低灌注时VEGF表达增高可能是一种自身保护机制,磷酸化tau蛋白参与了慢性脑低灌注认知功能损伤过程.