HPLC法测定瑞香狼毒中香豆素类三种成分含量

目的:建立BP-HPLC法同时测定中药瑞香狼毒中三种香豆素类成分瑞香素,伞形花内酯,东莨菪内酯的含量测定方法.方法:采用反相高效液相色谱法,选用AgiLent EcLipse XDB-C18(4.6 mm×150mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈(A)-1%冰乙酸(B),进行梯度洗脱;检测波长为:327 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:30℃.结果:瑞香素平均回收率为98.07%,RSD为1.88%;伞形花内酯平均回收率为98.82%,RSD为1.98%;东莨菪内酯平均回收率为97.42%,BSD为2.37%.结论:本法灵敏度高,重现性好,可用于中药瑞香狼毒的质量控制.     

中药甘遂抗生育作用的研究进展

本文综述了1978年～1998年间研究中药甘遂注射液30余篇论文的结果.包括制剂研究、动物实验、毒性试验、临床试用中期妊娠引产、临床推广应用、抗生育作用机理研究,植化研究、安全性研究等.经中国医学科学院情报所检索,在我们报道前,国内外均未见报告.植化研究说明抗生育有效成分为大戟二烯醇(每毫升含0.75mg).羊膜腔内注...     

狼毒考证集萃

现今临床有关狼毒的使用颇为混乱,狼毒同名异物品主要有瑞香科、大戟科、天南星、科毛茛科等植物;《本经》中蘆茹和草蘆茹两药如今却已消失。虽然发现并指出该问题的文献数量已是不少,然而影响却不甚大,今就历代本草专著及先贤已发表的论文为参考,经考证集纂最后得出结论,狼毒正品应为瑞香狼毒,大戟科的狼毒大戟即是蘆茹,大戟科之月腺大戟即是已经消失的草蘆茹,其他科属均可视为伪品。     

醋制法对瑞香狼毒毒效影响的研究

目的:为探讨有毒中药瑞香狼毒炮制解(减)毒理论的科学性,并了解瑞香狼毒醋制前后对药效的影响。方法:PHLC-MS技术比较瑞香狼毒醋制前后成分差异;建立H22皮下移植瘤模型,比较醋制前后对荷瘤小鼠与正常小鼠的致死作用及体重变化;荷瘤小鼠连续灌胃给药后比较醋制前后对肿瘤及免疫器官的影响;荧光报告基因法研究瑞香狼毒提取物对肿瘤细胞作用的靶标基因TGF-β,AP1,NF-κB的影响。结果:瑞香狼毒提取物Zp1102与醋制后的提取物Zp1103的LD50分别为9.89,16.85 g·kg-1,Zp1103半数致死剂量高于Zp1102。药效试验表明,药物为2 g·kg-1时,Zp1102对小鼠皮下移植瘤H22有显著抑制作用,抑瘤率为36.24%(P<0.01),Zp1103的抑瘤率略低,为34.40%(P<0.05);药物为1 g·kg-1时,Zp1102抑瘤率为34.52%(P<0.05),而Zp1103抑瘤率明显降低,为21.55%。Zp1102,Zp1103对报告基因AP1基本无影响;Zp1102对HepG2细胞经刺激内源性NF-κB浓度升高后的报告基因有上调作用,且能下调TGF-β的表达,但Zp1103仅能上调NF-κB的表达,对TGF-β无影响。结论:瑞香狼毒醋制后的提取物较未经炮制而提取工艺相同的提取物毒性降低,同时体内药效学实验结果表明其抗肿瘤活性也略有降低,其机制可能与药物对转化生长因子TGF-β的调节有一定关联。     

狼毒大戟提取液治疗Lewis肺癌机制的探讨

目的:探讨狼毒大戟提取液优化治疗非小细胞肺癌的机制.方法:收集狼毒干预24 h后的细胞,流式细胞技术分析肿瘤细胞周期及凋亡率;real time PCR检测Caspase-9 mRNA的表达.收集对数生长期细胞接种至C57BL/6小鼠右侧腋窝下,随机分组,腹腔给药后计算抑瘤率;流式细胞技术分析肿瘤细胞周期及凋亡率;real time PCR检测Bcl-2mRNA和Bax mRNA的表达,抗氧化能力检测法检测CAT和SOD的表达.结果:体内外实验显示,狼毒大戟能明显促进肿瘤细胞的凋亡,将细胞周期阻滞在S期,并能明显促进Bax mRNA、抑制Bcl-2 mRNA的表达;体内实验也显示狼毒大戟可以明显提高机体抗氧化能力.结论:狼毒大戟在促进肿瘤细胞凋亡的同时可以提高机体抗氧化能力,充分体现了狼毒大戟优化治疗肿瘤的优势,前景广阔,值得进一步研究,为临床应用提供依据.     

狼毒根不同溶剂提取物食源性细菌抑制效果评价

全球每年70%的腹泻病例与各种致病性微生物污染食品有关[1].目前多数企业采用具有抑菌作用的合成食品添加剂添加到食品中,以期待达到防腐效果.但是合成添加剂对人体有一定的毒副作用,近年来,人们倾向于选择安全性高的天然食品防腐剂[2].狼毒是一种具有抗肿瘤抗菌及免疫调节等药理作用的中草药.研究表明,狼毒根丙酮提取物对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌等8种食源性细菌有较强的抑制活性[3].本研究于2009年采用狼毒根不同溶剂提取物对4种不同食源性病原菌的抑制作用进行观察,为食品防腐研究提供科学依据.     

狼毒大戟石油醚提取物对小鼠肝脏细胞凋亡及p-ERK、Bcl-2、Bax、半胱氨酸蛋白酶-3的影响

目的探讨狼毒大戟石油醚提取物对小鼠肝脏细胞凋亡及磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、Bcl-2、Bax、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3表达的影响。方法 80只昆明种小白鼠随机分为低剂量组、中剂量组、高剂量组和植物油对照组,每组20只。采用腹腔注射法给药,1次/d(0.39、0.78、1.55 mg·kg~(~(-1))·d~(~(-1)))。于实验第14天分别进行体重测量,对小鼠肝脏组织进行HE染色,TUNEL法原位标记凋亡细胞,采用免疫组织化学染色检测Bcl-2、Bax蛋白表达,Western印迹法检测p-ERK、Caspase-3蛋白表达。实时定量PCR对Bcl-2、Bax、Caspase-3进行定量分析。结果与植物油对照组比较,高剂量组小鼠体重明显下降,肝脏细胞发生明显凋亡,p-ERK、Bcl-2表达下调,Bax表达上调(P0.05),Caspase-3产生活化形式的Cleaved-Caspase-3。结论狼毒大戟石油醚提取物可使小鼠肝脏细胞发生凋亡,其机制可能与降低p-ERK、Bcl-2,增强Bax蛋白表达,并使Caspase-3产生活化形式的Cleaved-Caspase-3有关。     

黄苞大戟化学成分研究

对黄苞大戟Euphorbia sikkimensis地上部分的化学成分进行研究。应用硅胶,Sephadex LH-20,RP-18等色谱技术进行分离纯化,采用NMR等谱学方法鉴定结构。从黄苞大戟地上部分的90%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物中分离得到16个化合物,分别鉴定为柚皮素（1）、山柰酚（2）、槲皮素（3）、山柰酚-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（4）、槲皮素-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（5）、槲皮素-3-O-（2"-没食子酰基）-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（6）、麦角甾醇过氧化物（7）、豆甾-5-烯-7-羰基-3β-甾醇（8）、3β-羟基-4α,14α-二甲基-5α-麦角甾醇-8,24（28）-二烯-7-酮（9）、β-谷甾醇（10）、10-葫芦二烯醇（11）、莨菪亭（12）、没食子酸乙酯（13）、对羟基苯甲醛（14）、3-羟基苯乙醇（15）、2,4-二羟基-6-甲氧基苯乙酮（16）。所有化合物均为首次从黄苞大戟中分离得到,其中化合物 1 ,4 ~ 8 ,15 为首次从大戟属植物中分离得到。     

岩大戟内酯B刺激MCF-7细胞条件培养基降低人脐静脉血管内皮细胞的增殖和迁移

目的:观察岩大戟内酯B(jolkinolide B,JB)刺激MCF-7条件培养基对人脐静脉血管内皮细胞的影响,并分析岩大戟内酯B的作用机制。方法:分别用25,55,85 mg·L~(-1)岩大戟内酯B刺激MCF-7人乳腺癌细胞为JB刺激组,正常培养的MCF-7细胞为MCF-7组。获得25,55,85 mg·L~(-1)JB刺激的MCF-7细胞上清液为相应浓度的条件培养基。利用各组条件培养基分别培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)为25,55,85 mg·L~(-1)JB组,正常培养的HUVEC为非条件培养基组。分别用噻唑蓝(MTT)比色法,Annexin V-FITC细胞凋亡实验,细胞划痕实验和transwell细胞小室迁移实验观察25,55,85 mg·L~(-1)JB组HUVEC增殖、凋亡、迁移的变化;并利用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测JB对MCF-7细胞的作用机制,酶联免疫吸附试验(ELISA)分析各组条件培养基中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的含量变化。结果:与正常组比较,25,55,85 mg·L~(-1)JB组HUVEC细胞凋亡数目逐渐升高(P0.01),HUVEC增殖显著降低(P0.01);25,55,85 mg·L~(-1)JB组HUVEC细胞划痕面积闭合率和细胞迁移率较非条件培养基组均显著降低(P0.01)。与MCF-7比较,25,55,85 mg·L~(-1)JB均能够明显抑制MSC-7细胞蛋白激酶B/信号传导及转录激活因子3/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/STAT3/m TOR)信号通路表达,下调MCF-7细胞表达的VEGF因子。结论:岩大戟内酯B通过抑制Akt/STAT3/m TOR信号通路下调MCF-7细胞旁分泌VEGF,抑制血管内皮细胞的增殖或迁移活性。     

基于高通量测序的瑞香狼毒转录组数据分析

目的获得瑞香狼毒Stellera chamaejasme转录组数据库代谢途径基因序列、SSR以及转座子等信息。方法以瑞香狼毒根作为受试材料,采用二代测序方法中的Illumina Hi Seq 2000进行转录组测序,并进行系统的生物信息学分析。结果共获得26 785 872个Clean reads片段,拼接得到47 053条Unigenes,平均长度为419 nt。将拼装所得到的Unigene序列利用BLAST工具分别与Nr、Swiss-Prot、KEGG、COG和GO数据库进行比对,分别有11 138和24 744条Unigene在Nr和Swiss-Prot数据库中比对得到了注释信息,可归于36个GO分类,涉及119个KEGG标准代谢通路,进一步分析发现15条萜类生物合成途径的关键酶基因。利用MISA软件发现3 480个SSR,数量最高的SSR类型为单碱基重复,为1 986条,出现频率为57.07%,最少的是六碱基重复SSR,只有5条,出现频率仅为0.14%。利用Repeat Masker在线工具针对瑞香狼毒转录组序列进行转座子预测分析,结果共发现有1 497条转座子,其中E值1×10-5的序列有827条,包含22种类型转座子,数目最多的为LINE/L1类型(405条),占比为48.97%,占比最少的为DNA/Ginger、DNA/h AT、DNA/PIF-ISL2EU和LINE/Jockey以及LTR/Lenti类型分别只有1条。结论对瑞香狼毒进行高通量测序,获得了大量基因序列信息以及SSR和转座子信息,为今后分离克隆瑞香狼毒中佛波酯等有效成分生物合成的关键酶基因以及开展相关分子机制研究提供了数据资源和理论基础。