培养大鼠皮层神经元NMDA受体蛋白单分子原子力显微镜定位研究

为在纳米尺度对 NMDA受体蛋白分子进行神经细胞膜表面原位定位和探讨原子力显微镜在生物单分子操纵和调控中的应用 ,本研究应用原子力显微镜分别对分布在云母表面的膜 NMDA受体蛋白分子标记物抗 NMDAR1Ig G-葡萄球菌蛋白 A-胶体金复合物分子和结合标记物分子后的神经元膜进行扫描 ,三维形貌测定 ,通过颗粒度分析结果 ,明确标记物分子的特征性三维形貌 ,对比确定经过免疫胶体金结合后的 NMDA受体蛋白单分子在神经元膜表面的定位。结果显示 ,空白云母表面标记物分子为分散均匀的平均粒径为 49nm的球形颗粒 ,在神经元膜表面结合 NMDA目的受体蛋白分子后 ,免疫复合物分子呈现出粒径为 5 3 nm的散在分布球形或短棒状颗粒 ,长径约为宽径的 2倍 ,长轴截面可见典型的双峰三维结构。上述结果表明 ,NMDA受体蛋白单分子可以结合 1个或 1个以上的胶体金标记物分子 ;原子力显微镜可以在纳米尺度对神经元膜 NMDA受体蛋白进行标记和其免疫复合物的三维形貌测定。胶体金颗粒标记 ,原子力显微镜测定是免疫细胞化学新方法。     

线粒体凋亡途径参与表皮膜蛋白1诱导的细胞调亡

目的:探讨人表皮膜蛋白1(hEMP1)诱导细胞凋亡的信号途径.方法:构建包含hEMP1基因编码框的真核表达载体pcDNA3.1( )-EMP1,瞬转HEK293细胞后荧光倒置相差显微镜、流式细胞术检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活力以及线粒体膜电位的变化.结果:荧光倒置相差显微镜、流式细胞术结果显示,过表达EMP1后细胞Caspase-3、Caspasc-9活力显著增强.线粒体膜电位改变增多,而Caspase-8的活力变化不明显.结论:线粒体凋亡途径参与hEMP1诱导的细胞凋亡.     

脑梗死患者血浆α—颗粒膜蛋白水平的变化

目的探讨脑梗死患者血浆α-颗粒膜蛋白(GMP-140)水平的变化及其临床意义.方法用ELISA法检测49例脑梗死患者和33例对照组的血浆GMP-140水平,同时测定血小板聚集时间.结果患者组血浆GMP-140水平高于对照组(P＜0.001),且血小板聚集时间短于对照组(P＜0.05).脑梗死患者血浆GMP-140水平与病程长短无相关性.不同程度神经功能缺损的脑梗死患者血浆GMP-140水平差别无显著性意义.结论血浆GMP-140水平可作为诊断或预测脑梗死的有用指标.     

脑梗死中层得血浆血小板α颗粒膜蛋白140的变化及意义

目的 :探讨脑梗死患者血浆血小板α颗粒膜蛋白 140 (GMP 140 )含量的变化及临床意义。方法 :采用放射免疫法测定急性脑梗死患者及正常对照组血浆GMP 140的含量。结果 :脑梗死组血浆GMP 140的含量为 (6 8.33± 6 .46 ) g/L ,显著高于对照组 (4 .6 7± 3.84)g/L(P <0 .0 5 )。结论 :血浆GMP 140含量的测定为血栓性疾病的早期诊断提供了指标 ,为抗血小板药物的筛选及作用机制的研究提供了依据     

老年高血压病并发脑梗死患者内皮细胞损伤和血小板活化的研究

目的 :研究老年高血压病并发脑梗死患者、老年高血压病患者的内皮细胞损伤、血小板活化和炎症因子改变。方法 :选择 2 8例老年高血压病并发脑梗死患者 (发病 72h内 )、31例Ⅰ ,Ⅱ期老年高血压病患者和 2 8例老年正常对照 ,测定其血浆vonWillebrand因子 (vWF)、α颗粒膜蛋白 - 140 (GMP 140 )和血清C反应蛋白 (CRP)含量。结果 :老年高血压病并发脑梗死组血浆vWF含量、GMP 140含量和血清CRP含量均明显高于老年高血压病组及老年正常对照组 ;老年高血压病组血浆vWF含量、GMP 140含量亦明显高于老年正常对照组 ,血清CRP含量较老年正常对照组高 ,但差异无显著性。结论 :老年高血压病并发脑梗死患者存在明显的内皮细胞损伤、血小板活化和炎症改变 ;Ⅰ ,Ⅱ期老年高血压病患者亦有明显的内皮细胞损伤和血小板活化。     

脑血栓形成患者急性期和恢复期血小板α颗粒膜蛋白-140的变化

目的研究血小板α颗粒膜蛋白－１４０（ＧＭＰ－１４０）在脑血栓形成患者急性期和恢复期的变化。方法测定５０例 （其中３０例急性期患者,２０例恢复期患者）脑血栓形成患者血浆ＧＭＰ－１４０的含量,并分别与２６名健康人作比较。结果 脑血栓形成患者急性期ＧＭＰ－１４０浓度明显高于恢复期和正常对照组（Ｐ＜０．０１）,恢复期与正常对照组间比较差异无显 著性（Ｐ＞０．０５）。结论脑血栓形成患者急性期血浆ＧＭＰ－１４０含量处于较高水平。     

82例小儿何杰金淋巴瘤与EB病毒相关的研究

采用免疫组化方法研究了８２例小儿何杰金淋巴瘤标本内ＥＢ病毒编码的潜在膜蛋白（ＬＭＰ），发现６７例ＬＭＰ阳性，其中混合细胞型阳性率为９０．９％，年龄在３－５岁患者阳性率达１００％，６－１０岁患者阳性率为７５％，而１１－１４岁的患者阳性率只有６２％。这提示ＥＢ病毒和何杰金淋巴瘤关系非常密切，年龄越小，阳性率越高。混合细胞型与ＥＢ病毒的关系比其它各型更加密切。     

EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞中通过IκBα的降解活化NF-κB

目的　阐明鼻咽癌细胞中EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(LMP1)活化核转录因子NF κB的机制。方法　利用强力霉素Dox诱导表达LMP1的鼻咽癌细胞株Tet on LMP1 HNE2为实验模型 ,首先应用免疫印迹方法测定Dox诱导后不同时相LMP1的表达动力学以及IκBs蛋白量及功能的改变。进而用间接免疫荧光法检测NF κB的亚细胞定位。最后采用瞬间共转染及报道基因活性分析分析NF κB的活性。结果　在鼻咽癌细胞Tet on LMP1 HNE2中 ,Dox处理 15分钟后LMP1的表达迅速升高并维持与较高水平直至 12 0分钟。LMP1的诱导性表达导致IκBα的磷酸化并降解 ,但IκBα蛋白总量无改变。继IκBα的磷酸化并降解 ,NF κB(P6 5 )自胞浆易位至胞核且活性升高。IκBα的显性负性突变子抑制NF κB(P6 5 )的核易位及报道活性。LMP1的诱导性表达并未引起IκBβ蛋白水平变化。结论　在鼻咽癌细胞Tet on LMP1 HNE2中 ,EB病毒LMP1通过IκBα的磷酸化并降解激活核转录因子NF κB的活性 ,并且 ,LMP1诱导的NF κB活性能被IκBα的显性负性突变子完全抑制。IκBβ在此信号传导途径中无改变。LMP1表达前后IκBα蛋白总量维持恒定可能是由于NF κB的活化迅速启动了IκBα的重头合成这一自身调节环路所致。     

老年高血压病并发脑梗死患者内皮细胞损伤和血小板活化的研究

目的：研究老年高血压病并发脑梗死患者、老年高血压病患者的内皮细胞损伤、血小板活化和炎症因子改变。方法：选择28例老年高血压病并发脑梗死患者（发病72h内）、31例I,Ⅱ期老年高血压病患者和28例老年正常对照,测定其血浆von Willebrand因子（vWF)、α颗粒膜蛋白-140（GMP-140）和血清C反应蛋白（CRP）含量。结果：老年高血压病并发脑梗死组血头vWF含量、GMP-140含量和血清CRP含量均明显高于老年高血压病组及老年正常对照组;老年高血压病组血浆vWF含量、GMP-140含量亦明显高于老年正常对照组,血清CRP含量较老年正常对照组高,但差异无显著性。结论：老年高血压病并发脑梗死患者慧明显的内皮细胞损伤、血小板活化和炎症改变;I,Ⅱ期老年高血压病患者亦有明显的内皮细胞损伤和血小板活化。     

冠心病患者炎症反应与血小板活化功能的关系

目的：探讨白介素－6,C－反应蛋白及α－颗粒膜蛋白与心绞痛的关系。方法：不稳定型心绞痛组25例（Ⅰ组）,分为急性（ⅠA组）和病情稳定（ⅠB两个阶段,稳定型心绞痛组（Ⅱ组）35例,正常对照组（Ⅲ组）30例。检测各组血清白介素－6浓度,C－反应蛋白水平,α－颗粒膜蛋白浓度。结果白介素－6,C－反应蛋白,α－颗粒膜蛋白水平ⅠA组均高于ⅠB组、Ⅱ组、Ⅲ组（P值均＜0．05）。ⅠB组、Ⅱ组3个指标比Ⅲ组高（P值均＜0．05）。ⅠB组、Ⅱ组比较差异无显著性（P＞0．05）,白介素－6,C－反应蛋白,α－颗粒膜蛋白浓度间彼此呈直线相关（P值均＜0．01）。结论①炎性细胞因子白介素－6及其诱生的急性相蛋白C－反应蛋白在心绞痛发病中起重要作用。②炎症反应影响心绞发生发展可能机制之一是通过激活血小板实现的。