黄芪熊竹素通过NOX4/ROS/NF-κB通路抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖

摘要：目的:本研究旨在评价熊竹素（JAR）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及机制。方法:体外培养人主动脉平滑肌细胞株（HA-SMCs）,10-6?mol·L-1的AngⅡ诱导HA-SMCs增殖并使用梯度稀释的JAR进行干预,检测HA-SMCs活性、培养基中过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力。使用2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）探针和流式细胞仪检测HA-SMCs中ROS水平。利用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测HA-SMCs中尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶（NOX） 4、NOX2及核因子κB（NF-κB）的表达水平。结果:JAR对AngⅡ诱导的HA-SMCs活性增加具有显著抑制作用（P＜0.01）。AngⅡ诱导组HA-SMCs中荧光强度较对照组细胞显著增加（P＜0.05或P＜0.01）,说明细胞中ROS水平较对照组显著增加,而JAR干预能够显著地降低AngⅡ诱导的ROS生成（P＜0.05）。AngⅡ诱导组HA-SMCs培养基中CAT、SOD及GSH-Px活力较对照组显著降低（P＜0.01）,而JAR干预组上述酶活力显著增加（P＜0.05或P＜0.01）。RT-PCR检测结果显示,AngⅡ组NOX4和NOX2在HA-SMCs中的表达较对照组显著升高（P＜0.05或P＜0.01）,而JAR干预能够显著抑制AngⅡ诱导的NOX4和NOX2在HA-SMCs中的表达（P＜0.05）。Western blot检测结果显示,AngⅡ诱导HA-SMCs 48 h后,NOX4、NOX2及p-NF-κB在HA-SMCs中的表达水平显著增加（P＜0.01）,而JAR干预能够显著抑制上述蛋白的表达（P＜0.05）。结论:黄芪熊竹素通过NOX4/ROS/NF-κB通路抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖。     

肠道淤血再灌注对肝移植手术中患者全身血流动力学影响的研究进展

肝移植手术是治疗终末期肝病的有效方法。肝移植过程中为减少术中出血需阻断门静脉,肠黏膜发生淤血再灌注损伤,不可避免地引起肠黏膜通透性增加,细菌和内毒素移位,同时可诱发机体发生炎性递质级联放大反应;当新肝期开放门静脉,产生的内毒素以及炎性递质等进入体循环,导致血流动力学的剧烈波动,严重者可导致多器官功能障碍。故研究肠道淤血再灌注损伤中各种递质成分对血流动力学的影响,可以更好地调控术中循环系统的变化,并降低麻醉的管理难度。     

焦化厂焦炉工血清中活性氧的检测

目的了解焦炉工血清中活性氧ROS水平。方法用Fenton法对20名炉顶工,20名炉侧工,20名炉底工及20名健康对照进行血清活性氧水平的检测,并进行环境中大气采样,检测空气中苯溶物浓度。结果炉顶工、炉侧工和炉底工血清活性氧水平显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);炉顶工血清活性氧水平高于炉侧工和炉底工,差异具有统计学意义(P<0.05);炉侧工与炉底工血清活性氧水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论焦炉工长期暴露于焦炉逸散物作业环境中可导致血清活性氧水平升高。     

TXNDC5-Prx2途径对前列腺癌细胞耐药性的调控

目的:研究硫氧还原蛋白5(TXNDC5)-过氧化物还原酶2(Prx2)对前列腺癌细胞耐药性的影响。方法:体外培养前列腺癌PC3细胞,采用化疗药物环磷酰胺(5、10、15 μmol/L)干预24 h,另设空白对照组,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹法检测PC3细胞中TXNDC5的表达水平。在PC3细胞...     

腺苷A1受体拮抗剂DPCPX对脑神经元低氧复氧损伤的影响

目的观察腺苷A1受体拮抗剂DPCPX对脑神经元低氧复氧(H/R)损伤的影响及其机制。方法通过建立体外培养大鼠大脑皮质神经元H/R损伤模型,观察终浓度分别为0(对照组)、25、50、100nmol/L的DPCPX对常氧(低氧0h)和低氧暴露8、12、24h后复氧24h的H/R神经元乳酸脱氢酶(LDH)释放量的影响,并检测了100nmol/LDPCPX对低氧暴露12h的H/R神经元丙二醛(MDA)含量及黄嘌呤氧化酶(XO)、Ca2 -ATP酶活性的影响。结果与对照组比较,100nmol/LDPCPX显著增加低氧暴露12h的H/R神经元LDH释放量(P<0·05),明显升高其MDA含量(P<0·01)和XO活性(P<0·05),明显降低其Ca2 -ATP酶活性(P<0·05)。结论DPCPX可加重培养神经元H/R损伤,其机制可能包括降低神经元抗氧化能力及Ca2 -ATP酶活性。     

具有线粒体靶向性的雷公藤甲素TPP-PEG-PCL脂质体的制备及其促肝肿瘤细胞凋亡研究

目的成功制备雷公藤甲素(3-丙羧基)三苯基溴化膦(TPP)-聚乙二醇-b-聚己内脂(PEG-PCL)脂质体(Tr@TPP/Lip),评价其靶向性及促肝肿瘤细胞凋亡效果。方法采用正交试验优选Tr@TPP/Lip的制备工艺,再研究该载药系统的粒径、Zeta电位、载药量、包封率和多分散系数及透射电镜微观形态,评价Tr@TPP/Lip的稳定性、溶血性、释放情况;采用荧光试验,研究脂质体与肝肿瘤细胞的融合情况、线粒体靶向性和肝脏靶向性;在等剂量给药条件下,评价Tr@TPP/Lip促肝癌细胞凋亡效果。结果正交试验优选的Tr@TPP/Lip粒径为(113.5±17.6)nm,Zeta电位(12.6±0.7)m V,包封率为(71.3±3.2)%,载药量为(3.9±1.1)%,多分散系数为0.12±0.04;透射电子显微镜图片显示Tr@TPP/Lip呈规则圆球形,该脂质体稳定性良好,具有较小的溶血率和良好的缓释药物性能;荧光试验结果显示,TPP阳离子能促进脂质体与肿瘤细胞的融合,并靶向线粒体,还能提高药物在肝肿瘤部位的靶向和滞留效果;细胞药效结果显示,Tr@TPP/Lip具有良好的促肝肿瘤细胞凋亡效果...     

氧化应激反应在边缘供肝肝移植缺血-再灌注损伤中的作用研究进展

常见的边缘供肝主要包括脂肪变性供肝、高龄供肝、小体积供肝、心脏死亡器官捐献（DCD）供肝等。边缘供肝的应用可在一定程度上解决供肝数量严重短缺的问题,但边缘供肝面临着缺血-再灌注损伤（IRI）的难题,且IRI程度相比正常供肝更加严重,是导致移植失败的重要原因,其中氧化应激反应又是引起边缘供肝IRI的重要因素。因此如何减少氧化应激反应及解决边缘供肝IRI的难题成为临床研究的热点问题。活性氧簇（ROS）介导的氧化应激反应贯穿IRI整个过程,本文就氧化应激反应在边缘供肝肝移植IRI中的作用及以ROS为靶点的防治进行综述,以期为临床提供参考。     

PM2.5对BEAS-2B细胞脂质过氧化损伤作用

目的 用大气细颗粒物(PM_2.5)刺激人支气管上皮细胞(BEAS-2B细胞),探讨其脂质过氧化作用。方法 PM_2.5采自河南省郑州市;实验细胞为人支气管上皮细胞。用0、12.5、25 μg/mL的PM_2.5刺激BEAS-2B细胞4 h后,使用流式细胞仪检测其活性氧(ROS)水平;刺激BEAS-2B细胞8 h,用丙二醛试剂盒和超氧化物歧化酶活性测定试剂盒分别检测细胞裂解液中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果 PM_2.5作用于BEAS-2B细胞4 h,12.5、25 μg/mL染毒组ROS水平分别为(6 074.69±41.65)、(7 338.58±168.34),均明显高于对照组的(5 816.66±114.69)(P<0.01);刺激BEAS-2B细胞8 h,12.5、25 μg/mL染毒组MDA含量分别为(195.44±35.58)、(334.11±26.75) μmol/mg,均明显高于对照组的(71.14±4.21) μmol/mg(P<0.01),同时染毒组SOD活力分别为(100.08±7.54)、(80.03±7.61) U/mg,均低于对照组的(159.91±10.59) U/mg(P<0.01)。结论 PM_2.5可以引起BEAS-2B细胞脂质过氧化损伤。     

蔓荆子提取物对小鼠造血系统辐射损伤的防护作用

目的 探讨蔓荆子提取物对小鼠造血系统辐射损伤的防护作用。 方法 （1）体外细胞实验：提取小鼠骨髓细胞,将骨髓细胞分为对照组、蔓荆子组、照射组和蔓荆子+照射组,蔓荆子组的给药浓度为0.01 mg/ml和0.001 mg/ml,蔓荆子+照射组的给药浓度为0.001 mg/mL,照射组和蔓荆子+照射组细胞经1 Gy照射。使用酶标仪检测细胞活力,异硫氰酸荧光素（FITC）通道检测细胞的活性氧（ROS）水平,FITC和藻红蛋白（PE）通道检测细胞的凋亡水平。（2）体内实验：采用简单随机抽样法将15只C57BL/6小鼠分为对照组（n=5）、照射组（n=5）和蔓荆子+照射组（n=5）。对照组小鼠进行假照射（0 Gy）,照射组和蔓荆子+照射组小鼠进行一次性2 Gy全身照射。将蔓荆子提取物用二甲基亚砜（DMSO）配制为 500 mg/ml 的蔓荆子溶液,灌胃前用生理盐水稀释,蔓荆子+照射组小鼠于照射前给予蔓荆子提取物（400 mg/kg）0.2 ml,连续给药7 d,照射后10 d处死小鼠。使用全自动血液分析仪分别对外周血血细胞和骨髓有核细胞（BMNC）计数,使用流式细胞仪分析造血干/祖细胞的数量和百分比,检测骨髓造血细胞内ROS水平、人磷酸化组蛋白H2A变异体（γH2AX）和磷酸化的p38（pp38）的表达。符合正态分布的计量资料的2组间比较采用独立样本t检验（方差齐）。 结果 （1）体外细胞实验：与照射组比较,0.001 mg/mL蔓荆子+照射组的骨髓细胞活力明显提高（585 485.00±37 335.80对460 384.55±53 786.37）,ROS水平降低（12 260.67±232.34对17 969.67±467.24）,凋亡细胞百分比显著降低[（28.97±0.32）% 对 （35.33±0.35）%],且差异均有统计学意义（t=4.245、18.950、23.161,均P<0.01）。（2）体内实验：与照射组相比,蔓荆子+照射组小鼠的BMNC数量[（23.34±3.01）×106个/只对（16.73±2.57）×106个/只]、白细胞数量[（2.80±0.35）×109个/L对（2.21±0.24）×109个/L]、红细胞数量[（10.54±0.51）×1012个/L对（9.68±0.26）×1012个/L]、血小板数量[（339.80±49.42）×109个/L对（289.40±54.08）×109个/L]和血红蛋白含量[（139.20±3.66） g/L对（129.20±3.87） g/L]均升高,且差异均有统计学意义（t=2.582、2.824、2.999、1.376、9.739,均P<0.01）。与照射组比校,蔓荆子+照射组小鼠造血祖细胞的数量[（34916.03±697.36）个/只对（26388.04±241.78）个/只]和百分比[（29.83±4.32）%对（22.76±2.20）%]升高,造血干细胞的数量[（2 074.00±23.12）个/只对（929.40±166.52）个/只]升高,且差异均有统计学意义（t=5.423、9.171、3.175,均P<0.01）;造血干/祖细胞中的ROS水平下降[（7 750.20±589.05）对（8 515.20±1 036.46）,（9 360.20±831.97）对（10 291.40±767.57）],差异均无统计学意义（t=1.435、1.839,P=0.189、0.103）;造血干/祖细胞中γH2AX的表达降低（693.20±4.82对751.60±32.72）, 且差异有统计学意义（t=3.064,P<0.01）;造血干/祖细胞中pp38表达降低（1 181.20±11.28对1 183.60±49.70,1 411.20±50.25对1 424.40±80.95）,差异均无统计学意义（t=0.105、0.765, P=0.014、0.310）。 结论 蔓荆子提取物通过降低造血细胞的氧化应激和抑制造血干细胞内的DNA损伤来达到辐射防护效果。     

姜黄素对LPS活化小鼠巨噬细胞活性氧影响

目的 研究低浓度姜黄素(curcumin)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)活化巨噬细胞产生活性氧(reactive oxygen species, ROS)和发生凋亡的影响。方法 体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7, 用LPS(0、0.5、2和8 μg/mL)诱导细胞, 或采用低浓度姜黄素(7.5 μmol/L)与LPS同时作用于巨噬细胞;流式细胞术分析活性氧(ROS)、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential, MMP)和细胞凋亡。结果 随LPS浓度增加, 小鼠巨噬细胞内ROS增加;高浓度的LPS 导致细胞线粒体功能损伤和凋亡;与对照组比较, 姜黄素处理后, 细胞内活性氧由(8.1±0.8)下降到(6.6±1.3), 差异有统计学意义(P<0.05);与LPS单独作用比较, 姜黄素处理后细胞内活性氧由(61.9±5.3)下降到(47.9±3.8), 差异有统计学意义(P<0.05);低浓度的姜黄素对RAW264.7细胞MMP无明显影响, 但与LPS单独作用比较, 姜黄素处理后细胞内MMP由(37.9±4.7)下降到(33.1±3.4), 差异有统计学意义(P<0.05);低浓度姜黄素单独作用未导致发生明显凋亡或坏死, 与LPS作用比较, 姜黄素明显减少LPS活化后凋亡和坏死细胞的百分率, 差异有统计学意义(P<0.05)。结论 低浓度姜黄素降低了ROS而减轻LPS活化小鼠巨噬细胞的凋亡。