石墨炉原子吸收分析肺癌患者与元素硒的关系

微量元素硒(Se)与肿瘤发生关系的研究日益受到重视,国内外已有多篇文献报道[1].硒是人体必需的微量元素之一,它是谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性中心元素,硒在机体中多以硒蛋白形式存在.国内有关血清硒与肺癌关系的研究报告不多,为了探讨肺癌与血清硒含量的关系,我们对31例肺癌患者血清进行了硒含量测定,现报道如下.     

羧肽酶A1及其活性中心基因的表达及活性分析

目的:克隆羧肽酶A1(carboxypeptidase A1,CPA1)全酶及其活性中心基因,构建重组表达载体进行诱导表达,分析表达产物活性.方法:RT-PCR扩增CPA1全酶及活性中心基因,测序分析后将目的基因克隆于表达载体pGEX-4T-1,测序证实插入方向正确后转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达目的基因后SDS-PAGE电泳分析.目的蛋白经变性、复性、纯化后MTT法和集落形成试验鉴定其活性.结果:获得了人CPA1全酶及活性中心基因,目的基因诱导表达后约66 kD及46 kD处可见新生蛋白带;活性分析显示CPA1全酶和活性中心蛋白都具有一定的催化水解活性,但后者对肿瘤细胞的杀伤效果较弱.结论:能成功克隆了人CPA1全酶及其活性中心基因,获得了二者的原核表达产物,体外具有一定活性.可望以人羧肽酶A1全酶及其活性中心基因为新起点,继续完善优化羧肽酶A1系统,为抗体靶向治疗前列腺癌的临床应用奠定基础.     

金属β-内酰胺酶表型检测进展

1前言金属β-内酰胺酶(MBLs)是一组以金属离子为活性中心的β-内酰胺酶,其活性可被金属螯合剂所抑制。按功能分类Bush将其定为第3组,按分子生物学分类Ambler将其定为B类酶。自1980年Ambler首次将β-内酰胺酶分为金属β-内酰胺酶与丝氨酸β-内酰胺酶以来,已陆续发现了5类金属β-内酰胺酶:I MP,VI M,SPM-1,GI M-1,SI M-1。其中I MP型有23种,VI M型14种(最新更新2007年1月3日)(http://www.lahey.org/stud-ies/other.st m)。MBLs由于能够水解碳青霉烯类药物而备受关注。目前,碳青霉烯类药物是治疗耐头孢类、青霉素类药物引起的严重…     

人羧肽酶A1活性中心的毕赤酵母可溶表达

目的:应用毕赤酵母表达系统表达人羧肽酶A1(carboxypeptidase A1,CPA1)活性中心蛋白.方法:从pGEX-CPA1重组质粒中扩增出CPA1活性中心基因,亚克隆入酵母表达载体pPIC9K,酵母重组表达载体pPIC9K-CPA1active center电转化入毕赤酵母SMD1168,并进行营养缺陷筛选和G418抗性筛选,对高拷贝整合的重组酵母表达菌株诱导表达.结果:构建得到酵母融合重组表达载体pPIC9K-CPA1active center,经G418浓度梯度筛选得到串联整合16个重组表达载体的重组酵母表达菌株,诱导表达后得到CPA1活性中心蛋白.结论:在毕赤酵母中成功表达了CPA1活性中心,为进一步研究CPA1活性中心在抗体导向酶-前体药物疗法中的应用打下了基础.     

胰蛋白酶活性中心Asp-102、His-57和Ser-195残基的构象

目的：分析胰蛋白酶活性中心Asp-102、His-57和Sex-195残基的构象与催化之关系．方法：用半经验的构象分析法计算胰蛋白酶的约含800个原子的活性中心场中Asp-102、His-57和Sex-195催化三联体侧链的最低能量状态．结果：在胰蛋白酶的结构中，孤立残基构成优势构象，侧链的柔性与酶的催化功能相符．结论：半经验的构象分析法计算结果与用X-线结构分析胰蛋白酶复合物所得资料相一致．     

树状大分子用于药物载体的研究进展

树状大分子(Dendri mers)是指具有树状结构,高度支化,由活性中心、表面功能基团及连接二者的支化链段构成的超大分子。支化链段是按几何学规则进行的重复,重复单元导致产生一系列同心层,称为代数(Generations)[1]。Dendri mers具有水溶性好、生物相容性好、单分散性、生物降解性、表面有较多易被修饰的活性基团等特点,这使其在药物载体的应用领域具有较好前景。现对其用于抗肿瘤药阿霉素、甲氨蝶呤(MTX)、米托蒽醌的药物载体的研究较多。而有关Dendri mers载药机制的研究及作为产品开发也已成为药剂学领域发展的热点之一。为此,笔者就De…