镍铬钴混合物对肾毒作用机理的研究

目的 探讨镍铬钴混合物致肾毒作用机理,为早期防治镍、铬、钴联合毒性所致的肾脏损伤提供理论依据。方法 模拟金川矿区矿石中镍、铬、钴平均含量百分比(Ni:Cr:Co=0.26:0.30:0.02),连续10日小鼠腹腔注射硫酸镍2.5mg/kg、重铬酸钾0.14mg/kg、氯化钴0.41mg/kg及其混合物0.09mg/kg、0.17mg/kg染毒。制备肾小管细胞膜,采用定磷比色法检测肾小管细胞膜Na⁺.K⁺-ATPase、Ca²⁺-ATPase活性。结果 各单体和混合物明显抑制肾小管细胞膜Na⁺.K⁺-ATPase、Ca²⁺-ATPase活性,尤以混合物组显着,并且混合物毒性大于各单体毒作用。结论 混合物在体内可能产生联合毒性,抑制肾小管细胞膜ATPase活性而致肾脏损伤。     

氯化钴在硫酸镍致胚胎细胞形态学转化中作用的实验观察

为研究氯化钴对硫酸镍致细胞形态学转化的影响，用叙利亚地鼠胚胎（ＳＨＥ）细胞转化试验观察了氯化钴与硫酸镍分别、同时及先后染毒时ＳＨＥ细胞形态转化的结果。在本实验条件下，关于氯化钴的细胞转化作用未获得充分证据。但氯化钴与硫酸镍同时染毒和先后染毒的结果提示，两受试物间具有协同作用，氯化钴对硫酸镍致ＳＨＥ细胞形态学转化有轻度促进作用。为进一步揭示镍精炼工肺癌的病因学问题提供了实验依据。     

氯化钴作用人脐带间充质干细胞的差异蛋白质组学分析

目的 用蛋白质二维凝胶电泳图谱,结合质谱技术鉴定、分析化学低氧模拟剂氯化钴( CoCl2)作用人脐带间充质干细胞(MSC)前后蛋白质组的差异表达.方法 CoCl2作用人脐带MSC,应用双向凝胶电泳技术(2-DE)分离细胞总蛋白.ImageMaster 2D Platinum软件分析差异蛋白质点,用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱对差异表达蛋白做质谱鉴定,对差异蛋白进行功能分类.结果建立了CoCl2作用人脐带MSC的蛋白质组图谱,鉴定出26个差异表达蛋白,其中11个表达上调,15个表达下调.其生物学功能涉及糖代谢、蛋白质代谢和修饰、脂类代谢、辅酶与辅基、细胞周期、免疫和防御、细胞结构和运动、信号转导、蛋白靶向和定位、神经细胞的活动、肌肉收缩等.其中过氧化物还原酶-1(Prdx1)表达下调,α-烯醇化酶(ENO1)、单胺囊泡转运蛋白1(VAT1)表达上调.结论 低氧对人脐带MSC的影响涉及多蛋白及多个功能通路.     

CoCl2化学模拟肝癌体外缺氧模型的建立及对HIF-1α、VEGF基因的影响

目的观察不同浓度的氯化钴(CoCl_2)对人肝癌细胞生长及及其诱导化学性缺氧的最佳浓度和时间。方法通过不同浓度(0～800μmol/L)CoCl_2处理不同肝癌细胞系(HepG2、Hep3B、SMMC-7721和Bel-7402)24 h,利用CCK-8法检测四种人肝癌细胞株细胞存活率;选取100、200、300、400μmol/L CoCl_2作用不同肝癌细胞系0、12、24、48、72 h,利用CCK-8法检测四种人肝癌细胞株细胞存活率;确定最佳诱导浓度200μmol/L后,分别于0、6、8、12、24 h应用Real-time PCR检测VEGF mRNA的转录;确定好最佳诱导时间,采用Western-blot方法检测评估100、200、300、400μmol/L CoCl_2作用不同肝癌细胞系24 h后表达HIF-1α蛋白情况。结果 CoCl_2浓度在200μmol/L以内对人肝癌细胞株的生长无明显的抑制作用,当浓度大于200μmol/L、诱导时间大于24 h后明显抑制细胞生长,且抑制作用随着浓度的增加而增强(P0.05)。200μmol/L CoCl_2刺激四种肝癌细胞0、6、8、12、24 h时VEGF mRNA转录递增。200μmol/L CoCl_2刺激细胞24 h时,能诱导并稳定维持四种肝癌细胞HIF-1α蛋白表达。结论 CoCl_2诱导肝癌细胞化学性缺氧的最佳浓度为200μmol/L,此时最佳时间为24 h。     

HIF-1α对胶质瘤U251细胞增殖及侵袭的影响

目的 探讨氯化钴(CoCl2)模拟化学缺氧复氧中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白的表达及其对人胶质瘤U251细胞增殖及侵袭的影响.方法 在培养基中加入和去除CoCl2模拟化学缺氧和缺氧复氧,采用免疫印迹法(Western blot)检测CoCl2与HIF-1α蛋白表达关系;通过MTT、过河实验、黏附试验分别检测细胞侵袭、迁移运动能力和黏附能力.结果 人胶质瘤U251细胞中存在HIF-1α蛋白表达;在CoCl2模拟缺氧的时-效关系实验中,100μmol/L CoCl2刺激细胞6h、12h、24h时HIF- 1α蛋白呈递增(分别 为1.024±0.03、2.35±0.04、2.82±0.12)(P<0.05),24h达高峰,48h明显下降(1.82±0.05).同时,在量-效关系实验中,CoCl2 50μmol/L、100μmol/L和150μmol/L刺激细胞24h时HIF-1α蛋白呈递增(分别为1.78±0.03、1.81±0.03、2.12±0.12)(P<0.05);MTT发现CoCl2诱导的缺氧对细胞增殖起抑制作用;过河实验发现缺氧24h复氧24h后细胞的迁移运动能力增加;细胞黏附实验发现缺氧24h复氧24h后细胞的黏附力增加.结论 CoCl2能诱导人胶质瘤U251细胞HIF-1α蛋白过度表达,而且存在一定的时-效关系;经CoCl2诱导的缺氧后复氧,肿瘤细胞增殖能力下降,细胞的迁移运动能力和黏附能力增加.     

镍铬钴混合物对小鼠免疫毒性的研究

目的：研究镍、铬、钴混合物对免疫功能的影响，对治疗混合物联合毒性提供理论依据。方法：模拟金川矿区矿石中Ni,Cr,Co平均含量百分比（0．26：0．30：0．02），连续10d小鼠腹腔注射染毒。采用特异性免疫指标：血清凝集素、溶血素、抗体分泌细胞、α-ANAE^ 率、体内淋巴细胞转化率和非特异性免疫指标：巨噬细胞吞噬率、吞噬指数、观察混合物毒性。结果：混合物可导致各项免疫指标降低，抑制机体免疫功能，尤以混合物大剂量组显著。结论：混合物在体内可能产生联合毒作用，导致机体免疫功能低下，其联合毒作用特征可能是相加作用。     

氯化钴诱导上皮间充质转化并增加胶质瘤T98G细胞侵袭能力的研究

目的研究氯化钴对胶质瘤T98G细胞上皮间充质转化(EMT)和侵袭能力的影响。方法用氯化钴处理胶质瘤T98G细胞,未处理组作为对照,Western blot检测各组细胞上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)和间充质细胞波形蛋白(Vimentin)的表达,采用Transwell及Boyden方法检测各组迁移细胞数。结果氯化钴处理胶质瘤T98G细胞后发生了典型的EMT:E-cadherin表达明显降低(P<0.05或P<0.01),Vimentin表达明显升高(P<0.01);Transwell迁移实验显示迁移能力明显增强:穿过Transwell小室滤膜的细胞数由(29±5)个增加至(53±4)个(P=0.0397);Boyden结果显示:穿过小室细胞数由(26±3)个增加至(36±2)个(P=0.0402)。结论氯化钴能促进胶质瘤T98G细胞发生EMT,增强胶质瘤T98G细胞迁移能力。     

促血小板生成素对化学性缺氧诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的:研究促血小板生成素(TPO)对化学性缺氧诱导的大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞凋亡的影响及保护作用。方法:将PC12细胞进行相应实验处理,分为对照组、氯化钴(Co Cl2)处理组、Co Cl2+TPO组及TPO对照组。检测各组PC12细胞的存活率并用Annexin V/PI双染流式细胞术分别检测细胞凋亡率,线粒体膜电位的变化及细胞内活性氧簇的变化。结果:化学性缺氧模拟剂Co Cl2可以明显抑制PC12细胞的生长(P0.01);与对照组比较,Co Cl2组的细胞凋亡率明显升高(P0.05),而Co Cl2+TPO组的细胞凋亡率显著低于Co Cl2组(P0.05);TPO能减少细胞内活性氧簇生成以及抑制细胞线粒体膜电位的降低(P0.01)。结论:TPO能对抗Co Cl2缺氧所致的细胞凋亡,稳定线粒体膜电位,发挥细胞保护作用。     

iPSC-MSCs对CoCl_2诱导的PC12细胞损伤时线粒体功能的影响

目的:观察诱导性多能干细胞来源的间充质干细胞(i PSC-MSCs)对氯化钴(Co Cl2)诱导的PC12细胞损伤的影响,并探讨其可能机制。方法:用Co Cl2处理PC12细胞建立化学损伤模型,加入i PSC-MSCs共培养。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)比色法检测细胞存活率,Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡比率,JC-1染色流式细胞术检测细胞线粒体膜电位,免疫荧光观察i PSC-MSCs向PC12细胞转移线粒体的情况。结果:用Co Cl2(400μmol/L)处理PC12细胞24 h可使其凋亡明显增多,线粒体膜电位明显下降。与i PSC-MSCs共培养能减轻PC12细胞的凋亡,使其膜电位恢复。i PSC-MSCs可以与PC12细胞间形成隧道纳米管并向PC12细胞转移线粒体。结论:i PSC-MSCs可以减轻Co Cl2诱导的PC12细胞损伤,机制可能与其向PC12细胞转移线粒体有关。