缺氧诱导因子-1对人脑胶质瘤细胞株T98G放射线敏感性的影响

目的:观察缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factory-l,HIF-1)以及其拮抗剂对人脑胶质瘤细胞株T98G放射线敏感性的影响,初步探讨缺氧影响放疗疗效的机制.方法:以化学性缺氧模型观察缺氧诱导因子-1对细胞放射敏感性的影响,以及缺氧诱导因子-1拮抗剂毛壳菌素的放射增敏作用.结果:氯化钴显著降低放射线对T98G细胞的增殖抑制作用,使用毛壳菌素拮抗缺氧诱导因子-1的转录活性可逆转放射线脱敏现象.结论:氯化钴抑制胶质瘤细胞的放射线敏感性,该作用与缺氧诱导因子-1的转录活性相关.     

低氧对牙周膜成纤维细胞增殖和成骨分化的影响

目的:观察低氧对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament cells, PDLCs)增殖与成骨分化的影响。方法:体外培养鉴定人牙周膜成纤维细胞,分别用浓度为0、100、200、400 μmol/L的CoCl2作用于细胞,采用MTT法观察CoCl2对PDLCs增殖的影响,运用实时定量PCR和Western免疫印迹技术检测CoCl2模拟低氧对PDLCs成骨分化的影响。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:免疫组化染色结果证实,培养细胞为牙周膜成纤维细胞。200 μmol/L及400 μmol/L的CoCl2均能抑制PDLCs的增殖及碱性磷酸酶、RUNX2、Ⅰ型胶原的表达,并呈剂量依赖性。结论:氯化钴模拟的低氧环境对PDLCs增殖及成骨分化具有抑制作用。     

钴对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响

[目的]研究钴的生殖毒性.[方法]采用卵母细胞体外培养和体外受精的方法.[结果]氯化钴降低体内(0 h)第一极体释放率和卵母细胞存活率(P＜0.01),降低卵母细胞(24 h)的体外受精率(P＜0.01),且有剂量依赖性增加,随着体外培养时间的延长,2个剂量组的第一极体释放率与各自0 h相比有显著提高,除了6.0 mg·kg-1组外,48 h后3.0 mg·kg-1剂量组的IVF率与24 h时相比显著提高,3.0 mg·kg-1和6.0 mg·kg-1两组的IVF率在48 h和72 h时与对照组比差异均有显著性(P＜0.05,P＜0.01).[结论]实验结果提示,氯化钴能够抑制卵母细胞的体内成熟,降低卵母细胞的体外受精能力,具有明显的生殖毒性.     

17-DMAG对缺氧肿瘤细胞的辐射敏感性影响

目的研究17-DMAG对缺氧模拟剂氯化钴（CoCl2）诱导的人宫颈癌HeLa细胞的辐射敏感性影响。方法首先应用不同浓度的CoCl2处理HeLa细胞24h,采用Western blot技术检测HIF-1α蛋白表达量,然后选取浓度为200μmol/L的CoGl2对Hela细胞进行模拟缺氧处理24 h,应用不同浓度的17-DMAG预处理细胞16h后,接受2、4、6、8Gy不同剂量的射线照射,采用克隆形成实验观察细胞的存活率,应用Western blot技术检测HIF-1α蛋白表达。结果在CoCl_2浓度为200μmol/L时HIF-1a蛋白表达量最强;不同浓度17-DMAG处理组的HeLa细胞在不同照射剂量组间的存活率差异均有高度统计学论（均P〈0.01）;17-DMAG预处理缺氧HeLa细胞后,HIF-1a蛋白表达随药物浓度增加受到显著抑制。结论 17-DMAG预处理可增加缺氧细胞辐射敏感性,其机制可能是通过抑制HIF-1a蛋白表达而发挥作用。     

神经生长因子对CoCl2诱导原代培养神经元缺氧损伤的保护作用

目的：研究神经生长因子（nerve growth factor,NGF）对氯化钴（CoCl2）诱导原代培养神经元缺氧损伤的保护作用.方法：利用CoCl2（125 μmol/L）诱导的原代培养小鼠大脑皮层神经元,观察系列实验指标：光镜观察NGF（终浓度为100 ng/ml）对细胞形态的影响,MTT比色法观察NGF对细胞活力的影响,检测细胞外液LDH释放量观察NGF对细胞膜稳定性的影响.结果：NGF能明显提高CoCl2诱导的神经细胞的活力,降低其LDH释放量,稳定细胞膜.结论：NGF对CoCl2诱导神经元缺氧损伤有明显的保护作用.     

二氯化钴对腺病毒基因表达的影响

目的:研究二氯化钴(CoCl2)对缺氧反应元件调控E1AE1B表达的条件复制型腺病毒载体(Ad-5HRE-E1AE1B-RFP)和缺乏缺氧反应元件的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-EGFP)在肿瘤细胞内表达和复制的影响. 方法:肿瘤细胞经不同浓度的CoCl2 处理后,Western 印迹法检测缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达;倒置荧光显微镜、FCM法及空斑形成实验等观察经CoCl2处理后,感染条件复制型腺病毒和(或)复制缺陷型腺病毒的肿瘤细胞中外源基因的表达水平和病毒复制情况;小动物成像仪观察缺氧调控的条件复制型腺病毒在肿瘤内提高复制缺陷型腺病毒表达的效率. 结果:适当浓度的CoCl2 (0.4和0.08 μg/mL) 能使胃癌细胞株(SGC7901)中HIF-1α蛋白稳定表达并积聚,可较好地模拟缺氧状态;在0.4 μg/mL CoCl2作用下,Ad-5HRE-E1AE1B-RFP对肿瘤细胞的感染效率明显提高,表现为外源基因RFP阳性表达的百分率和荧光强度均明显提高,但空斑形成实验显示Ad-5HRE-E1AE1B-RFP并没有复制.0.4 μg/mL CoCl2也能提高其他非缺氧调控的复制缺陷型腺病毒如Ad-EGFP、Ad-Luc的感染效率和表达水平; Ad-5HRE-E1AE1B-RFP与复制缺陷型腺病毒Ad-Luc联合注射裸鼠肿瘤能显著提高Ad-Luc的表达.结论:CoCl2 能明显提高腺病毒的基因表达水平,其作用机制不仅与CoCl2诱导缺氧有关,也可能与影响基因转录有关.     

氯化钴化学模拟低氧对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察氯化钴(CoCl2)对体外培养的肿瘤细胞增殖和凋亡的影响,探讨合理的体外化学模拟低氧模式.方法 (1)MTY方法和流式细胞术检测不同浓度CoO:,在相应时间内对A549和HeLa细胞活力以及增殖和凋亡的影响.(2)免疫印迹测定HIE--la和凋亡蛋白的表达.结果 (1)CoCl:(≤200 p,mol/L)在24 h内对肿瘤细胞活力影响较轻,增加浓度或延长处理时间明显降低细胞活力.(2)CoCl2(200 l～mot/L)引起细胞早期凋亡.增加浓度(800 p,mol/L)导致晚期凋亡和坏死.(3)CoCl2(200 panol/L)诱导两种肿瘤细胞HIF.4a上调,24 h达高峰(P相似文献   

硫酸镍、重铬酸钾和氯化钴混合物对小鼠心肌钠钾泵、钙泵活性的影响

模拟金川矿区矿石镍、铬、钴平均含量百分比(0.26:0.30:0.02),连续10日小鼠腹腔注射硫酸镍、重铬酸钾、氯化钴及其混合物染毒.制备心肌细胞膜,定磷比色法检测各单体和混合物对钠钾泵、钙泵活性的影响.结果发现:各单体和混合物明显抑制心肌细胞膜钠钾泵、钙泵活性.提示:混合物在体内可能产生联合毒性,引起心肌细胞膜电位变化、离子运动异常,从而导致心肌损伤.     

氯化钴诱导化学性低氧对经HIF-1α基因转染后的大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

目的:探讨氯化钴（CoCl2）诱导的化学性低氧对经低氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α） 基因转染后的大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）生物学特性的影响。方法:第3代BMSCs以及转染有HIF-1α全长基因的第 3 代BMSCs,根据低氧诱导方式不同分为4组。BMSCs组、BMSCs-HIF-1α组:BMSCs或经HIF-1α基因转染后的BMSCs在H-35低氧工作站诱导的物理性低氧环境下培养;BMSCs-CoCl2组、BMSCs-HIF-1α-CoCl2组:BMSCs或经HIF-1α基因转染后的BMSCs在CoCl2诱导的化学性低氧环境下培养。低氧培养8天后,Western blot 测定各组内HIF-1α蛋白表达;流式细胞仪检测细胞周期内G1/G2/S期细胞比例,统计增殖指数（PI）和凋亡率。MTT法绘制细胞生长曲线,比较细胞数目。结果:与BMSCs-HIF-1α组和BMSCs-CoCl2组比较,BMSCs-HIF-1α-CoCl2组内HIF-1α蛋白表达上调（P<0.05）,细胞周期内处于G2期和S期的细胞数目增多（P<0.05）,PI升高（P<0.05）,细胞凋亡率下降（P<0.05）。BMSCs-HIF-1α-CoCl2组细胞在培养的3~8天内,细胞数目均多于其他三组细胞（P<0.05）。结论:CoCl2诱导的化学性低氧上调了经基因转染后BMSCs内HIF-1α的蛋白表达,提高了细胞增殖能力,降低了细胞凋亡率。     

补充更正

发表于本刊2012年第3期第317-321页的文章(韩建群等,氯化钴致低氧诱导肺癌细胞系A549 DLL4表达上调并分泌促HUVEC迁移物),在其纸质版中遗漏了图4,补充的图4和正确全文请见《基础医学与临床》网站中该文章的网络版(http://jcyxylc.pumc.edu.cn)。