CoCl2所致化学缺氧促进脂肪组织缺血缺氧耐受相关基因表达的研究

目的探讨脂肪组织中是否存在缺氧预适应现象,构建CoCl2致缺氧的缺氧模型。方法不同浓度的CoCl2大鼠腹股沟区皮下层浸润注射,分别用免疫组织化学法和RT-PCR法检测该区脂肪HIF-1α蛋白和HIF-1αmRNA的表达情况。结果用不同浓度的CoCl2行化学缺氧后在不同时间点观察有不同程度的HIF-1α蛋白和HIF-1αmRNA表达,其中,在浓度为20～40mg/kg,时间为3h时脂肪组织中HIF-1α表达达高峰。结论脂肪组织存在缺氧预适应现象;CoCl2的浓度选择20～40mg/kg,时间选择3h时缺氧预适应效果较佳。     

二氯化钴化学缺氧对人脐静脉内皮细胞增殖和血红素氧合酶表达的影响及其临床意义

目的:研究二氯化钴(CoC l2)诱发化学缺氧对培养的人脐静脉内皮细胞血红素氧合酶表达及增殖的影响。方法:采用MTT和流式细胞术检测人脐静脉内皮细胞的增殖,酶联免疫吸收法测定培养上清液中的碳氧血红蛋白(COHb),并通过RT-PCR观测CoC l2与血红素氧合酶表达间的量-效和时-效关系。结果:CoC l2可诱导人脐静脉内皮细胞中血红素氧合酶-1的表达,促进内源性一氧化碳(CO)的产生,与血红素氧合酶表达间有一定的剂量和时间依赖性。结论:CoC l2诱导慢性缺氧促进人脐静脉内皮细胞增殖并上调血红素氧合酶-1和内源性CO,HO/CO系统是保护内皮损伤的分子学基础,可能在妊娠期高血压疾病发病中起重要作用。     

钴、锡、锶单独或钴锌协同作用对大鼠肝脏脂质过氧化的影响

目的：探讨钴、锡、锶对大鼠肝脏脂质过氧化作用的影响.方法：模拟人体内钴、锡、锶的浓度,配制一系列浓度,运用体外TBA比色法检测MDA的含量.结果：锡、锶在浓度为（0.1667～1.0）umol/L和（0.0133～0.1333）mmol/L的范围内能抑制大鼠肝脏脂质过氧化作用.钴在浓度为（1.5～5.5）nmol/L的范围内能诱导大鼠肝脏脂质过氧化作用.以锌作为拮抗剂对钴作用,钴对LPO的诱导作用有所下降.结论：钴、锡、锶对大鼠肝脏脂质过氧化作用有不同程度的影响.     

4种卵巢癌细胞缺氧模型的比较

目的通过比较两种物理和两种化学缺氧方法诱导卵巢癌细胞上皮-间质转化的效果,建立最佳缺氧诱导EMT方法。方法 SKOV3细胞经各种缺氧方法处理24小时后,倒置显微镜观察细胞形态改变,Western blot检测相关蛋白标志物及缺氧诱导因子-1α表达水平的变化。结果厌氧培养袋及三气培养箱缺氧均能诱导SKOV3细胞形态由铺路石样的上皮细胞形态改变为明显的梭形间质细胞形态,并增高缺氧诱导因子-1α及间质细胞标志物波形蛋白（ Vimentin）的表达,降低上皮细胞标志物上皮型-钙粘蛋白（ E-cadherin）的表达,提示发生EMT现象。氯化钴（ CoCl2）及亚硫酸钠（ Na2 SO3）处理24小时后未能诱导SKOV3细胞发生EMT相关细胞形态及标志物表达变化。结论厌氧培养袋和三气培养箱可成功诱导卵巢癌细胞发生EMT。     

右美托咪定抑制化学性低氧引起的PC12细胞炎症反应

目的探讨右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)能否抑制化学性缺氧引起的PC12细胞炎症反应。方法用氯化钴(CoCl2)处理PC12细胞,建立化学性低氧诱导的细胞损伤实验模型;ELISA法检测细胞培养液中白介素6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-ɑ)的水平;以CCK-8法检测细胞存活率。结果 CoCl2处理PC12细胞能产生明显的炎症反应,导致IL-6、IL-1β和TNF-ɑ释放增多;IL-6、IL-1β和TNF-ɑ的中和抗体能抑制CoCl2导致的细胞存活率下降。DEX和活性氧(ROS)抑制剂N-乙酰半胱胺酸(NAC)不但能抑制CoCl2引起的上述炎症因子的释放,而且使PC12细胞存活率升高。结论 DEX可通过抑制炎症反应和抗氧化作用对抗化学性缺氧引起的PC12细胞毒性。     

低氧诱导神经干细胞凋亡和miR-26a低表达

目的:初步探讨氯化钴(cobalt chloride,Co Cl2)是否诱导神经干细胞(neural stem cells,NSCs)凋亡及其机制,探讨NSCs凋亡是否引起microRNA-26a(miR-26a)表达变化。方法:用不同剂量的Co Cl2处理NSCs,CCK-8检测细胞活力;TUNEL检测细胞凋亡;建立Co Cl2诱导NSCs凋亡的模型,将NSCs分为对照组和凋亡组,real-time PCR检测miR-26a-3p、miR-26a-5p、GSK-3β、Bcl-2、Bax和caspase-3的表达;Western blotting检测Bcl-2和Bax的蛋白水平。结果:CCK-8结果显示不同浓度(200、400和600μmol/L)Co Cl2作用24 h,NSCs活力呈剂量依赖性下降(P0.05)。TUNEL检测显示Co Cl2(200、400和600μmol/L)作用24 h后NSCs凋亡率呈剂量依赖性增加(P0.05)。Real-time PCR和Western blotting结果表明凋亡组miR-26a、GSK-3β、Bax和caspase-3表达增加,Bcl-2、Bcl-2/Bax蛋白水平下降(P0.05)。结论:Co Cl2(400μmol/L)作用24 h可建立NSCs凋亡模型,其机制可能与线粒体凋亡通路有关;NSCs凋亡时miR-26a表达减少。     

右美托咪定对抗化学性低氧引起的PC12细胞损伤

目的探讨α2肾上腺素受体激动剂右美托咪定能否保护PC12细胞对抗化学性低氧引起的损伤。方法应用化学性低氧模拟剂氯化钴(CoCl2)处理PC12细胞以建立化学性缺氧损伤模型。应用CCK-8比色法检测细胞存活率;Ho-chest 33258核染色法观察细胞凋亡的形态学和数量的改变;双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜检测细胞内的活性氧(ROS)水平;罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜检测线粒体膜电位(MMP)。结果在浓度为100～600μmol.L-1的范围内,右美托咪定浓度依赖性地对抗CoCl2引起的细胞毒性,使细胞存活率明显增加。400μmol.L-1右美托咪定能抑制CoCl2的致凋亡作用,使凋亡细胞数量减少。右美托咪定也能抑制CoCl2引起的ROS过度生成及MMP降低的作用。结论右美托咪定能保护PC12细胞对抗CoCl2诱导的损伤,此作用可能与其抑制ROS过度生成及保护MMP有关。     

氯化钴对人eNOS基因启动子SP3替换改构体转录活性的影响

目的:构建改造的人血管内皮细胞一氧化氮合酶基因启动子,利用氯化钴诱导的人脐静脉血管内皮细胞-12缺氧模型研究其基因启动子活性变化。方法:含SP1替换SP3突变序列的引物通过PCR构建突变启动子pGL2-eNOS-repSP3载体,将已经构建好的pGL2-eNOS-repSP3载体和pGL2-eNOS分别转染HUVEC-12细胞,并以之前构建的SP1插入eNOS启动子改构体pGL2-eNOS-insSP1为阳性对照,通过双荧光素酶报告基因技术检测并比较不同浓度氯化钴刺激下eNOS启动子转录活性的变化。结果:成功构建了含SP1替换SP3突变序列的eNOS启动子改构体。氯化钴刺激后转染细胞,改构体eNOS启动子活性在一定范围内呈现随氯化钴剂量增加而升高的趋势;SP1替换SP3的eNOS启动子转录活性与SP1插入的eNOS启动子之间无显著差异。结论:pGL2-eNOS-repSP3和pGL2-eNOS-insSP1两种改造方法在转录活性上没有显著差别。     

硫化氢对抗化学性缺氧引起的心肌细胞损伤及其机制

目的观察H2S对氯化钴(CoCl2)诱导的H9C2心肌细胞缺氧性损伤的影响,探讨其作用机制。方法用CoCl2处理H9C2心肌细胞,建立化学性缺氧诱导心肌细胞损伤的实验模型。NaHS(H2S的供体)在CoCl2处理H9C2心肌细胞前30 min加入培养基中,作为预处理。应用CCK-8比色法检测细胞存活率;PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测Cleaved Caspase-3的表达;GSSG试剂盒检测GSSG/(GSSG+GSH)的比值;双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相检测细胞内的活性氧(ROS);罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜照相检测线粒体膜电位(MMP)。结果在400~800μmol.L-1浓度范围内,CoCl2处理H9C2心肌细胞36 h,呈剂量依赖性地降低细胞存活率。在600μmol.L-1CoCl2处理H9C2心肌细胞前30 min,应用400μmol.L-1NaHS可明显地抑制CoCl2对细胞的损伤作用,使细胞存活率明显升高,细胞凋亡率及CleavedCaspase-3表达降低;并使H9C2心肌细胞内GSSG/(GSH+GSSG)比值及ROS水平明显降低,同时明显地改善MMP。结论H2S能明显地对抗化学性缺氧诱导的心肌细胞损伤,此保护作用与其降低GSSG/(GSH+GSSG)比值和ROS水平,改善MMP,抑制Caspase-3活化等机制有关。