结直肠癌中DNA错配修复功能缺陷与血管密度的相关性

目的:探讨DNA错配修复功能缺陷(deficient mismatch repair,dMMR)在结直肠癌中的临床病理特征及与血管密度的关系.方法:选取2016年1月至2018年12月因结直肠癌于广州市红十字会医院住院行根治手术的患者样本.采用免疫组织化学法检测101例患者样本中MMR蛋白(MLH1、MSH2、MSH6...     

启动子DNA超甲基化与先天性巨结肠患儿结肠组织中GFRα1低表达的关系研究

目的探讨DNA甲基化在调控先天性巨结肠(Hirschsprung’s disease,HSCR)患儿肠道组织中GFRα1基因表达及HSCR发病过程中的可能作用。方法对2016年3月至2018年6月收治的24例HSCR患儿(HSCR组)及同期18例新生儿坏死性小肠结肠炎患儿(对照组)的手术样本进行对比分析。采用实时定量PCR及免疫印迹实验检测两组患儿结肠组织内GFRα1、DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的表达水平。采用亚硫酸氢盐处理后测序检测两组患儿结肠组织内GFRα1启动子区DNA甲基化水平。结果 HSCR组GFRα1 mRNA及蛋白的相对表达量分别为0.38±0.17和0.55±0.13,均较对照组(0.97±0.36和0.99±0.16)显著降低,组间比较,差异有统计学意义(P<0.01)。HSCR组GFRα1启动子区DNA甲基化水平较对照组显著升高(0.67±0.23比0.34±0.18),组间比较,差异有统计学意义(P<0.01)。相关性分析显示,DNA甲基化水平与其mRNA表达水平呈明显负相关(r=-0.477,P<0.05)。HSCR组DNA甲基转移...     

微量接触类生物检材的游离 DNA 问题分析

目的探究接触类生物检材的游离DNA问题,游离DNA和细胞内DNA含量的比例问题,以及游离DNA在法医检验中的影响。方法对手部、面部和足部的皮肤及口腔粘膜进行模拟微量接触类检材的制备,对模拟检材进行浸泡,对游离DNA进行定量和STR扩增,对剩余检材使用常规程序进行DNA提取、定量和STR扩增,并对结果进行分析和讨论。结果实验观察到,78.55%的样品检测到了游离DNA,其中,手部模拟检材的游离DNA检测率为82.1%,脸部模拟检材的游离DNA检测率为82.1%,口腔模拟检材的游离DNA检测率为96.4%,足部模拟检材的游离DNA检测率为53.6%,微量接触类检材中游离DNA量占DNA总量的12.9%。结论接触类生物检材中提取到的DNA,除了包括细胞内DNA,还存在一定比例的细胞外游离DNA,这为微量接触类检材的DNA有效提取和检验提供了新的理论依据。     

DNA防龋疫苗联合蛋白质疫苗诱导小鼠免疫应答的研究

目的:研究以一种新型免疫策略即追加相应蛋白质抗原来加强免疫DNA疫苗的免疫效果。方法:重组质粒pCIA-P经鼻腔滴注途径免疫小鼠,并以其相应抗原rPAc蛋白或rPAc蛋白及黏膜佐剂rCTB经鼻腔滴注加强免疫,ELISA法检测血清和唾液中特异性抗体水平。结果:以rPAc蛋白或rPAc蛋白及黏膜佐剂rCTB加强免疫可显著提高唾液中IgA型特异性抗体和血清IgG型特异性抗体水平。并且以rPAc蛋白和黏膜佐剂rCTB加强免疫组产生了最高水平的唾液IgA型特异性抗体和血清IgG型特异性抗体。结论:DNA防龋疫苗联合蛋白质疫苗可有效增强DNA防龋疫苗免疫效果。     

心脏移植的发展现状和新挑战

心脏移植是终末期心力衰竭患者的首选治疗。供者不足一直以来都是限制心脏移植数量增长的主要问题,随着新技术的不断更新和引入,供者池被不断扩大,比如使用年龄较大的供者、丙型肝炎病毒感染的供者、毒品过量致死的供者或心脏死亡器官捐献（DCD）供者的心脏等。与此同时,高龄、多器官功能不全、机械循环支持及人类白细胞抗原抗体致敏受者的比例近几年明显增加。供者数量的不足、受者状况的复杂化、免疫抑制治疗的个体化管理和远期移植物血管病的防治等都是心脏移植领域面临的挑战。本文通过概述现今全球在扩大供者库、提高受者质量、加强排斥反应的诊治和心脏移植物血管病变的预防等方面的新进展,以期有助于改善在等待或已经接受心脏移植的终末期心力衰竭患者的生存时间和生活质量。     

食管癌细胞Eca9706 DNA聚合酶β基因敲除载体的构建

目的构建食管癌细胞Eca9706 DNA聚合酶β（DNA polβ）基因敲除载体,为DNA polβ基因敲除奠定基础。方法应用体细胞基因敲除技术的方法和原理,根据DNA polβ基因序列,设计并合成2对特异性引物（UP1/UP2和DOWN1/DOWN2）,通过PCR扩增获得上游同源序列（UP）和下游同源序列（DOWN）,其中上游同源序列长1 268 bp,下游同源序列长2 150 bp,将其插入骨架载体pcDNA3.1,从而构建了DNA polβ基因敲除载体pOUT-polβ,最后用PCR、酶切和测序进行鉴定。结果经过PCR筛选,限制性酶切及DNA测序鉴定,证实上游同源序列（UP）和下游同源序列（DOWN）2个片段插入正确。结论通过本研究所述方法,成功构建了用于食管癌细胞Eca9706 DNA polβ基因敲除载体pOUT-polβ。     

荧光定量聚合酶链反应技术在胃幽门螺杆菌检测中的应用

目的:评估荧光定量PCR在检测胃粘膜上幽门螺杆菌的DNA中的应用价值。方法:用荧光定量PCR与普通PCR检测胃粘膜上的幽门螺杆菌的DNA,并对二者进行方法学比较。结果:荧光定量PCR阳性率为95.3%(143/150),普通PCR阳性率仅为86.0%(129/150),二者之间有明显的差异(P<0.01)。结论:荧光定量PCR在临床上检测幽门螺杆菌DNA方面具有简单、快速、敏感、特异的特点,在临床上具有较高的应用价值。     

胃癌细胞BrdUrd标记指数及DNA含量与生物学行为关系的研究

用[3H]标记法检测肿瘤细胞增殖活性已被遗弃,我们将BrdUrd掺入胃癌细胞DNA中,应用双参数流式细胞术(Flow cytometry,FCM)同时检测一组胃癌细胞BrdUrd掺入量和DNA含量,研究胃癌细胞增殖活性与其生物学行为的关系,以指导临床治疗.     

酸性核质DNA结合蛋白1的研究进展

酸性核质DNA结合蛋白1(And-1/WDHD1)是一种天然嵌合蛋白,其包含WD40重复序列(WD-repeat)和高迁移率组蛋白框结构域(HMG-box motif)两大蛋白家族特性.And-1在多种肿瘤细胞中过表达,在整个细胞周期过程中参与了预复制复合体(Pre-RC)的组装、DNA复制、检查点激活、DNA修复以及...     

从贮存20年的微量细胞中提取DNA并做PCR分析的实验研究

目的:探讨从二十年前贮存的食管拉网微量细胞涂片中提取DNA并进行食管癌基因检测的方法和可行性,比较P53基因的突变在食管癌前期病变和正常食管上皮中的差异.方法:利用螯合型的离子交换树脂Chelex100作为介质,一步法从食管拉网脱落细胞提取DNA,应用PCR-SSCP方法和PCR-RFLP方法进行p53基因第5外显子及第7外显子的突变检测.结果:48例标本P53基因检测均获成功.食管上皮重度不典型增生细胞中发现有5例突变发生,均为p53基因第7外显子,而第5外显子未发现突变;正常食管鳞状上皮拉网脱落细胞中均未发现突变.检测到的5例突变中,其中有3例分别在10年、12年和14年后转变为食管癌.结论:Chelex100法能从微量细胞涂片中提取DNA,使对20年前食管拉网细胞涂片标本进行分子水平的检测成为可能.为食管癌前期病变的研究提供一种新的方法.p53基因的突变使食管上皮癌前期病变细胞具有了癌变趋势.