头颈部恶性肿瘤转移检测的研究现状

头颈部恶性肿瘤的转移是患者预后不良的重要原因.如何发现和判断转移是人们研究的热点,早期转移的诊断也越来越受到重视.近年来免疫组化和分子生物技术在微转移的研究中逐渐显示出优势,尤其是在DNA和RNA水平上的研究可能提供更多的信息.本文就近年来头颈部恶性肿瘤微转移检测研究的进展进行综述.     

壳聚糖-防龋DNA疫苗微粒的制备和体外表达研究

壳聚糖 (chitosan ,CS)是新开发的黏膜载体系统 ,具有良好的生物相容性和体内可降解性 ,并且安全无毒。我们将壳聚糖和防龋DNA疫苗制备成微粒 ,对微粒的大小、形态特征和体外转染进行了研究 ,探讨其作为防龋DNA疫苗黏膜递呈系统的可能。1.材料和方法 :①壳聚糖 DNA微粒的制备 :采用凝聚法制备 ,于恒温 5 5℃磁力搅拌器 (搅拌速度 5 0 0r/min)上将含质粒DNA( 10 0mg/L)、终浓度为 5 0mmol/L的硫酸钠溶液缓慢滴入 ( 1滴 /秒 )到等体积的 0 0 2 %壳聚糖溶液 ( 1%醋酸溶解 ,用NaOH调 pH值为 5 7)中 ,制备完后 ,于室温下静置 2h ,分装…     

X连锁无汗性外胚叶发育不全家系ED1基因的突变检测

目的探讨国内X连锁无汗性外胚叶发育不全家系中ED1基因的突变情况，为该病的遗传咨询、产前诊断、确诊携带者提供依据。方法收集2个X连锁无汗性外胚叶发育不全家系及1个散发患者的外周血样本，盐析法提取基因组DNA，采用聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）和直接测序对ED1基因进行突变检测。结果家系一患者ED1基因第9外显子发生错义突变（1045G〉A），家系二和散发患者ED1基因第3外显子发生错义突变，分别为467G〉A和466C〉T。结论ED1基因的错义突变可导致X连锁无汗性外胚叶发育不全。这3个突变与国外学者的报道一致。     

HSV-TK自杀基因对涎腺多形性腺瘤细胞治疗的实验研究

目的研究单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(Herpes simplex virus thymidine kinase，HSV-TK)／丙氧鸟苷(ganciclovir，GCV)系统对人涎腺多形性腺瘤体外基因治疗的作用。方法采用腺病毒包装重组脂质体介导的含有HSV-TK全长的cDNA真核表达质粒PDC312-HSVTK转染人涎腺多形性腺瘤细胞，通过RT-PCR检测TK基因在转染细胞中的表达；用MTT法检测HSV-TK／GCV系统对多形性腺瘤细胞的杀伤作用和旁观者效应：采用倒置显微镜、组织学染色等观察HSV-TK／GCV系统作用细胞后的形态学改变。结果HSV-TK基因转染24小时后，肿瘤细胞开始出现空泡性变；转染48小时后，RT-PCR从转染的细胞中成功扩增出1150bp的特异性TK基因片段。转染36小时后加入不同浓度的GCV治疗，细胞出现核固缩，胞浆裂解，随之细胞死亡、脱壁的现象。细胞存活率随HSV-TK／GCV作用时间延长而逐渐下降，当加入10^-4mol／LGCV治疗7天时，HSV-TK／GCV系统的杀伤作用最强，细胞存活率为10．3％。当TK阳性的细胞占细胞总数50％时，其旁观者效应最明显，细胞存活率为31．7％。结论HSV-TK／GCV系统对涎腺多形性腺瘤细胞具有明显的杀伤作用和旁观者效应。     

c血清型变形链球菌致龋相关基因/DNA片段的批量克隆与高通量筛选

目的筛选含致龋相关基因／DNA片段的阳性克隆，为探究变形链球茵致龋的分子机制奠定基础。方法将抑制消减杂交方法获得的高毒力株特异的消减PCR产物与T／A栽体pCR2．1连接，将连接产物转化E．coli TOP0F’感受态细胞，进行蓝白筛选。对96个转化子进行Colony PCR，将PCR产物点样于同一尼龙膜上，分别与地高辛标记的变形链球茵高、低毒力株基因组DNA／AluI酶切产物杂交，高通量筛选阳性克隆。结果随机挑取了96个白色或白色中央有蓝色的茵落，经过Colony PCR，其中有1个转化子的扩增产物为双带，其余均为0．2～2kb之间的单一条带。经过杂交，以与高毒力株基因组有杂交信号，而与低毒力株基因组无杂交信号或信号明显弱的转化子为阳性克隆。筛选的阳性率为50％左右，阳性克隆中含有c血清型变形链球茵致龋相关的基因／片段。结论对抑制消减杂交方法获得的变形链球茵高毒力株特异的消减PCR产物进行批量克隆和高通量筛选，获得了致龋相关的基因／DNA片段。     

质粒介导变形链球菌转化的研究

本研究建立了变形链球菌ＭＴ８１４８转化系统。在本组转化培养条件下，变形链球菌ＭＴ８１４８在对数生长早期出现感受态但维持时间很短，供体ＤＮＡ最适浓度为２５μｇ／ｍｌ，超螺旋闭环质粒与线性质粒均可转化变链ＭＴ８１４８。与变链ＧＳ５相比，变链ＭＴ８１４８的转化率约低１００倍     

中国人Leber遗传性视神经病变（LHON）线粒体DNA 3个原发致病基因突变遗传及临床特征

目的对我国国人Leber遗传性视神经病变（LHON）线粒体DNA的3个原发致病基因突变遗传进行分析,并探讨其临床特征。方法对100例LHON患者采用异源双链-单链构像多态性（HA-SSCP）、限制性片段长度多态性（RFLP）、突变特异性引物聚合酶链反应以及DNA测序的方法,对mtDNA11778、14484、3460位点的基因突变情况进行分析。并同时对所有发病患者的性别、年龄、视力等情况进行观察,对其临床特进行探讨。结果经过检测,100例患者中,不同突变位点的LHON患者发病时的视力不同。发病年龄集中在10～20岁。结论我国LHON以mtDNA11778位点突变为主,可作为国人常规筛选,属于母系遗传,对我国国人的视力造成严重威胁。