对乙酰氨基酚对斑马鱼胚胎甲状腺激素相关基因表达的影响

目的研究对乙酰氨基酚(APAP)对斑马鱼色素及甲状腺激素相关基因表达的影响。方法将发育良好的斑马鱼胚胎随机分为正常对照组、APAP 2,4和8 mmol·L-1染毒组。从受精后4 h(4 hpf)开始持续染毒,分别在24,48,72和96 hpf观察斑马鱼发育情况。用Image J分析斑马鱼心囊面积,ELISA法测定四碘甲状腺原氨酸(T4)和三碘甲状腺原氨酸(T3)的含量,荧光定量PCR检测甲状腺激素相关基因TPO,Trh,Dio2,Dio3,Thrα和Thrβ的表达。结果与正常对照组相比,在72 hpf时,APAP 8 mmol·L-1组胚胎孵化率下降(P<0.01),心囊面积增加(P<0.01),眼部视网膜色素沉积降低,T4和T3含量降低(P<0.05),TPO,Trh和Thrβ基因表达降低(P<0.05),其他基因表达变化无统计学差异。结论 APAP可引起斑马鱼色素及孵化率降低,可能与甲状腺激素相关基因的表达降低有关。     

斑马鱼白血病模型的研究进展

斑马鱼是一种脊椎动物有机体,因具有保守的造血过程和独特的实验优势,尤其适合用于研究人类白血病。目前,研究斑马鱼的最新技术包括转基因技术、基因组编辑技术和移植技术,通过这些技术现已构建了许多白血病模型。斑马鱼的通体透明与先进的谱系追踪和成像技术相结合,揭示了白血病发生、发展的许多细节。凭借这些优势,斑马鱼成为白血病研究中具有独特优势的模式生物之一,此外,基于斑马鱼的高通量药物筛选的进步有望加速新型白血病疗法的开发。     

BAMBI基因过表达人结肠癌细胞移植斑马鱼致肝转移模型的构建

目的构建BAMBI基因过表达人结肠癌细胞移植斑马鱼肝转移模型,分析斑马鱼肝内转移性结肠癌细胞BAMBI基因表达水平与肝转移发生率的关联性。方法分别构建BAMBI过表达稳转结肠癌细胞株SW620(BAMBI+组)、空载体红色荧光蛋白基因转染结肠癌细胞株SW620(EV组),分别显微注射到受精后第2天转基因斑马鱼Tg(Apo14∶GFP)胚胎卵黄囊(每组各680条),激光共聚焦荧光显微镜观察、拍摄,采用Image J软件测量转移至斑马鱼肝脏内结肠癌细胞红色荧光表达强度,计算肝转移发生率;采用t检验比较BAMBI+组及EV组斑马鱼肝脏内结肠癌细胞红色荧光表达强度及肝转移发生率的差异。结果与EV组相比,激光共聚焦荧光显微观察显示BAMBI+组斑马鱼肝内结肠癌细胞红色荧光表达量显著增加(t=6.247,P=0.003 3);BAMBI+组斑马鱼肝转移发生率与EV组相比显著增加(t=4.276,P=0.012 9)。结论构建了基因修饰人结肠癌细胞移植斑马鱼致肝转移模型,可较好地模拟活体状态的结肠癌肝转移;BAMBI基因可促进异种移植入斑马鱼的结肠癌细胞发生肝转移。     

表柔红霉素工程菌的构建及其原生质体紫外诱变

本研究将质粒pYG836转化到柔红霉素产生菌SIPI-DM中,采用同源重组双交换法,用aveBIV基因置换基因组上的dnmV基因,得到稳定遗传的表柔红霉素工程菌DM3.为进一步提高工程菌的发酵单位,对其原生质体进行连续4次的紫外诱变育种,最终得到一株发酵单位较出发菌株提高T93.7%的突变菌株.     

斑马鱼视网膜再生研究进展

哺乳动物视网膜损伤后仅有非常有限的自我修复能力。与哺乳动物不同,硬骨鱼类如斑马鱼的视网膜则具有旺盛的再生能力。斑马鱼视网膜损伤后,能够再生其丢失的所有类型的神经元和胶质细胞,并恢复大部分视力。研究表明,斑马鱼视网膜再生的细胞来源是Müller细胞。近年来,关于斑马鱼视网膜Müller细胞去分化及其增殖的分子机制和信号通路的研究取得了许多新的进展。我们就斑马鱼视网膜再生的研究历史、损伤模型和再生细胞来源以及调控的分子机制等做一综述。     

基于斑马鱼模型的鳗弧菌减毒活疫苗的生物安全性评价

利用疫苗对养殖鱼类进行疾病预防正得到逐步应用,而减毒活疫苗通过浸泡方式也能使鱼体获得较高的免疫保护力。利用模式动物斑马鱼对鳗弧菌减毒活疫苗MVAV6203的生物安全性进行了评价。首先进行了疫苗对斑马鱼毒性实验,每条鱼注射免疫的半致死量为9.26×104 CFU;其次分析了鳗弧菌在水体中的存活情况,菌体浓度在1.0×106 CFU/mL条件下,10 d后水体基本检测不到鳗弧菌;最后考察了其在鱼体内的存活情况,注射或浸泡免疫3 d后,鱼体组织匀浆物未检测到该菌,表明鳗弧菌减毒活疫苗具有较好的生物安全性。     

TIE2-R849W突变斑马鱼模型的建立及其在静脉畸形发病中的作用探讨

目的: 建立TIE2-R849W突变斑马鱼模型并初步探讨其在静脉畸形中可能的致病机制。方法: 通过合成TIE2-R849W突变基因表达体系,利用成熟的mRNA显微注射技术,基于fli1a: EGFP转基因斑马鱼构建TIE2-R849W过表达斑马鱼模型,荧光显微镜下记录斑马鱼尾静脉丛（caudal vein plexus,CVP）的早期发育改变并定量比较。提取斑马鱼RNA,针对目标基因行实时定量PCR（qRT-PCR）,利用已有基因芯片进一步验证结论。采用GraphPad Prism 5.0进行统计学分析。结果: 基于对TIE2-R849W过表达斑马鱼模型的观察,TIE2-R849W显著影响斑马鱼早期尾静脉丛的发育,表现为尾静脉丛窦腔数量和面积显著减少。qRT-PCR显示,TIE2-R894W可引发pik3r2、foxo1b的表达上调,而与尾静脉丛发育相关的基因,除显著高表达的egfl7外,nr2f2、nr2f1a和s1pr1均无显著异常表达。比较体外芯片结果,部分突变组内的tie2、pik3r2、foxo1b及egfl7同样存在一致的高表达。结论: TIE2-R849W引发斑马鱼尾静脉丛发育异常与egfl7的高表达关系密切。     

血管紧张素转换酶基因插入缺失多态性与原发性高血压患者合并心房颤动的相关性研究

目的探讨中国河南豫北地区汉族原发性高血压人群血管紧张素转换酶(ACE)基因插入(I)/缺失(D)多态性与心房颤动(房颤)的关系。方法采用病例对照法,选择原发性高血压患者803例,分为房颤组405例和窦性心律组398例,采用PCR-RFLP方法进行ACE基因I/D多态性分析。结果房颤组DD基因型频率明显高于窦性心律组(25.9%vs 13.1%),ID基因型频率明显低于窦性心律组(38.8%vs 50.3%,P<0.05)。与携带II+ID基因型者比较,携带DD基因型高血压患者房颤的风险增加(OR=2.13,95%CI:1.60³.29,P<0.05),携带DD基因型的高血压合并房颤患者左心房内径明显扩大,LVEF明显降低(P<0.05)。结论 ACE基因I/D多态性与原发性高血压患者房颤的发生存在相关性,DD基因型可能使高血压患者发生房颤的危险增加。     

5'非编码区嘧啶富集区变异对B组柯萨奇病毒1型毒力的影响

目的 观察5'非编码区(5'UTR)嘧啶富集区变异对B组柯萨奇病毒1型(CVB1)毒力和致病性的影响.方法 定点诱变将CVB1基因组5'UTR第563～573碱基嘧啶富集区5个嘧啶置换为嘌呤,获得突变株CVB1/m563-573.空斑纯化病毒后,利用细胞病变效应(CPE)试验、空斑形成试验、一步生长曲线和半数致死量(LD50)等方法比较CVB1/m563-573与其原型株CVB1/wt的毒力.结果 测序结果显示,CVB1/m563-573的5'UTR嘧啶富集区发生C565A、U567C、U568A、U570A、U572G突变,与预期一致.CPE试验表明,CVB1/m563-573的感染性较CVB1/wt稍弱(A 490分别为0.710±0.074、0.812±0.092),但差异无统计学意义(t=-2.204,P>0.05).空斑形成试验显示,46、58 h时间点CVB1/m563-573形成空斑的数量为(6.40±1.52)×103、(11.60±2.19)×103 pfu(空斑形成单位)/L,直径为(2.00±0.35)、(2.47±0.41)mm,CVB1/wt的空斑数量为(8.40±2.51)×103、(11.80±1.92)×103 pfu/L,直径为(1.80±0.27)、(2.85±0.44)mm,二者比较差异无统计学意义(t值分别为8.000、0.985、10.000、9.000,P均>0.05).一步生长曲线法显示,经过3、5、7 h的扩增,CVB1/m563-573所得的活病毒颗粒数(×103 pfu/L)的常用对数(lg)分别为2.10±0.09、4.28±0.03、7.44±0;CVB1/wt的活病毒颗粒数(×103 pfu/L)的lg值分别为2.80±0.02、4.77±0.02、8.55±0.01.CVB1/m563-573株在3个时间点均较CVB1/wt复制显著慢(t值分别为-13.151、-24.319、-47.714,P均<0.01).CVB1/m563-573和CVB1/wt的LD50分别为3.10×109、1.26×107 pfu/L,CVB1/m563-573致病力较CVB1/wt明显减弱.结论 减少5'UTR嘧啶富集区的嘧啶碱基数量可致CVB1的感染和毒力减弱,该位点突变可能是研发CVB减毒活疫苗的策略之一.     

非小细胞肺癌表皮生长因子受体20外显子插入突变四例报道并文献复习

肺癌占恶性肿瘤发病率第一位,在亚裔非吸烟肺腺癌女性中,表皮生长因子受体(EGFR)是最常见的突变基因,其中约90％的EGFR突变是19外显子典型框内突变或21外显子L858R点突变,其次为20外显子插入突变.不同突变患者的治疗方法及其从酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗中的获益不同.本文报道4例非小细胞肺癌EGFR 20外...