STAT6基因敲除小鼠视网膜神经损伤的研究

目的研究信号转导与转录因子6（STAT6）基因敲除小鼠在视网膜急性缺血-再灌注损伤后视网膜神经节细胞（RGCs）的损伤情况及视网膜胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达变化。方法野生型C57BL/6小鼠和STAT6基因敲除小鼠各8只,右眼制作急性缺血-再灌注损伤模型,左眼不做任何处理为对照组。急性缺血-再灌注损伤模型采用前房穿刺后生理盐水灌注法,液面高度保持约1.6m相当于眼压120mmHg,维持1h后拔出,再灌注48h后取眼球制作视网膜石蜡切片。TUNEL染色观察2种小鼠RGCs的凋亡,免疫荧光染色法观察视网膜GFAP的表达。结果急性缺血-再灌注损伤48h后,STAT6基因敲除小鼠RGCs的凋亡明显少于野生型C57BL/6小鼠。野生型小鼠损伤后视网膜内GFAP的表达较对照组明显增强,呈纤维样,排列呈栅栏状,由RGCs层贯穿至外核层,而STAT6基因敲除小鼠的GFAP表达增强不明显。结论 STAT6基因敲除对损伤后的RGCs有一定的保护作用,其保护作用有可能是通过降低胶质细胞的反应实现的。     

利多卡因对小鼠短暂全脑缺血后学习记忆障碍和胆碱能系统损害的影响

目的:观察利多卡因对不同ApoE基因型小鼠短暂全脑缺血后学习记忆障碍和中枢胆碱能系统损害的影响.方法:健康雄性C57BL/6J野生型小鼠(C57小鼠)和ApoE基因敲除型小鼠(ApoE小鼠)各随机分为3组:C57对照组(假手术操作,不夹闭双侧颈总动脉)C57缺血组(夹闭双侧颈总动脉17 min,经腹腔给予生理盐水)C57利多卡因组(夹闭双侧颈总动脉17 min,经腹腔给予利多卡因)ApoE对照组(处理同C57对照组)ApoE缺血组(处理同C57缺血组)ApoE利多卡因组(处理同C57利多卡因组).术后恢复7 d,从第8天起进行Morris水迷宫测试,连续5 d.术后第12天水迷宫测试后断头处死大鼠,分离双侧大脑皮层和海马测定乙酰胆碱酯酶、胆碱乙酰基转移酶活性和M受体结合活性.结果:(1)潜伏期:各缺血组均明显长于同品系相应的对照组,C57利多卡因组还明显长于C57缺血组[测试第3天(74.1±32.7)s比(49.2±19.5)s],但ApoE利多卡因组明显短于ApoE缺血组[测试第3～5天分别为(40.7±27.7)s比(84.7±26.8)s,(31.2±19.2)s比(72.1±33.0)s,和(28.0±22.1)s比(60.8±26.9)s](P＜0.05或0.01).两品系间比较,ApoE缺血组明显长于C57缺血组,但ApoE利多卡因组明显短于C57利多卡因组(P＜0.05或0.01).(2)有效搜索策略百分比:各缺血组均明显低于同品系相应的对照组,C57利多卡因组还明显低于C57缺血组[测试第3～5天分别为(18.2±11.7)%比(41.7±17.7)%,(22.7±20.8)%比(55.6±20.8)%,和(29.6±27.0)%比(66.7±21.7)%],但ApoE利多卡因组明显高于ApoE缺血组[测试第3～5天分别为(41.7±25.8)%比(15.6±12.9)%,(58.3±20.4)%比(18.8±11.6)%,和(66.7±30.3)%比(28.1±20.9)%](P＜0.01).两品系间比较,ApoE缺血组明显低于C57缺血组,但ApoE利多卡因组明显高于C57利多卡因组(P＜0.01).(3)胆碱能系统指标:各缺血组明显低于同品系相应的对照组,C57利多卡因组还明显低于C57缺血组,但ApoE利多卡因组明显高于ApoE缺血组(P＜0.05或0.01).两品系间比较,ApoE利多卡因组明显高于C57利多卡因组(P＜0.05或0.01).结论:短暂全脑缺血导致小鼠明显的脑损害,表现为学习记忆功能障碍和中枢胆碱能系统功能损害;ApoE小鼠学习记忆功能障碍的程度较C57小鼠更重.利多卡因加重了短暂全脑缺血所导致的C57小鼠脑损害,但可减轻ApoE小鼠的脑损害程度.     

碱性裂解液提取DNA法在环氧化酶亚型基因敲除小鼠基因型鉴定中的应用

目的:应用碱性裂解液法提取的DNA鉴定环氧化酶(COX)亚型基因敲除小鼠,为鉴定纯合子小鼠提供一种方便快捷、低成本、可靠的实验方法。方法:取子代小鼠耳缘组织于EP管中,用碱性裂解液提取基因组DNA,PCR扩增COX-1和COX-2基因片段,通过琼脂糖凝胶电泳对小鼠基因型作出鉴定。结果:碱性裂解液法提取的DNA能应用于子代小鼠的不同基因型的鉴定,即野生型(COX-1+/+;COX-2+/+)、杂合子(COX-1+/-;COX-2+/-)和纯合子(COX-1-/-;COX-2-/-)。结论:建立了碱性裂解液提取DNA法,并将该法成功应用于环氧化酶亚型基因敲除小鼠基因型鉴定中。     

水通道蛋白1基因敲除对胸腔液体转运的影响

目的:探讨水通道蛋白1在小鼠胸腔液体转运的作用。方法:实验小鼠分为野生型组和基因敲除型组,每组基因型各分为高渗组和低渗组。小鼠吸入麻醉后,胸膜腔内分别注入高渗或等渗液体,处理组液体中含特布他林100μmol·L-1或阿米吡嗪200μmol·L-1。在不同时间收集胸腔液体,测量渗透压或体积。结果:胸膜腔内注入500mOsm液体后,在1,2和5min时收集胸腔液体测渗透压,野生型组中渗透压均明显高于基因敲除组(P<0.01)。胸腔内注入等渗液体后,在30,60和90min时收集胸腔液体测量体积,野生型组和基因敲除型组间无明显差异(P>0.05)。特布他林增加高渗和等渗液体胸腔转运(P<0.05),不受水通道蛋白1敲除的影响。阿米吡嗪抑制高渗和等渗液体胸腔转运(P<0.05),也不受水通道蛋白1敲除的影响。结论:水通道蛋白1促进渗透压引起的小鼠胸腔液体转运,对胸腔等渗液体清除无影响。钠通道影响胸腔高渗和等渗液体转运,水通道蛋白1基因敲除不影响钠通道的这种作用。     

基因打靶技术及其在寄生虫学研究的应用

基因打靶是近年来发展起来的现代分子生物学重要的实验技术之一。其原理是通过外源性DNA与细胞内基因组DNA同源序列可发生重组这一性质,人为地定点修饰改造基因组中某些基因的结构和组成,以研究该特定基因在活性中的功能或相关疾病的致病柚是,本仅就该技术的原理和基本操作以及该技术在寄生虫学研究右的应用和进展作一介绍。     

液-质联用测定Nrf2野生型和基因敲除型小鼠肝脏中16种胆汁酸

目的:建立测定小鼠肝脏中16种胆汁酸浓度的LC-MS/MS法,并将测定结果应用于比较Nrf2野生型和基因敲除型小鼠胆汁酸代谢谱。方法:小鼠肝脏样品加入70%乙腈匀浆,用甲醇沉淀匀浆液中的蛋白并高速离心,取上清液置进样瓶, 用Xtimate^TM C₁₈柱分离,以甲醇-醋酸铵及甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.25 ml·min^-1,进样5 μl分析。结果:16种胆汁酸在0.013~8.000 μmol·L^-1范围内,线性关系良好,定量下限浓度为0.013 μmol·L^-1,肝脏匀浆液加样回收率在94.9%~112.8%之间,日内、日间RSD均小于10.8%。结论:该方法准确可靠,灵敏度高,处理简便,适用于肝脏中胆汁酸浓度的测定,为生物样品中胆汁酸含量测定提供参考。     

MiR-150特异调控胸腺iNKT细胞的发育和成熟

目的:探讨miR-150在胸腺传统T细胞和恒定型自然杀伤性T细胞(iNKT)发育和成熟中的作用。方法:采用Real-time PCR检测miR-150在胸腺传统T细胞和iNKT细胞中的表达,流式细胞术检测miR-150基因敲除小鼠胸腺传统T细胞和iNKT细胞的发育和成熟。结果:miR-150在胸腺传统T细胞和iNKT细胞中均有表达,且在iNKT细胞发育成熟过程中表达逐渐增加,缺失miR-150不影响传统T细胞发育,但导致iNKT细胞发育和成熟障碍。结论:miR-150特异调控小鼠胸腺iNKT细胞的发育和成熟。     

酪酪肽对全肠内营养支持小鼠残留小肠代偿的影响

目的:通过建立广泛小肠切除(mSBR)的酪酪肽(PYY)基因敲除(Pyy-/-)小鼠模型,研究早期在TEN支持下PYY对残留小肠的代偿作用.方法:将30只Pyy-/-小鼠分为三组,每组10只.假手术(Sham)组仅横断小肠但不切除小肠;广泛小肠切除(mSBR)组切除50%小肠,保留近段空肠约1cm,远段回肠9ca;广泛小肠切除加PYY(mSBR-PYY)组切除50%小肠,皮内注射PYY1～36.所有小鼠术后2～7d均接受TEN.观察各组小鼠术后回肠黏膜的DNA和蛋白质含量、绒毛高度和隐窝深度、回肠隐窝细胞的增殖指数和绒毛上皮细胞的凋亡指数.结果:mSBR组小鼠同肠黏膜的DNA和蛋白质含量、绒毛高度、隐窝深度、回肠隐窝细胞的增殖指数和绒毛上皮细胞的凋亡指数,显著高于Sham组.mSBR-PYY组小鼠回肠黏膜的DNA和蛋白质含量、绒毛高度和隐窝深度,显著高于mSBR组;回肠隐窝细胞的增殖指数显著高于mSBR组;回肠绒毛上皮细胞的凋亡指数显著低于mSBR组.结论:在早期TEN支持下,PYY不仅能促进mSBR小鼠肠黏膜细胞的增殖,而且还能抑制其凋亡,在残留小肠的代偿中起重要作用.     

利用基因敲除鼠模型研究胰岛素受体在2型糖尿病发病中的作用

2型糖尿病的发病机制包括两方面：一是外周胰岛素抵抗，二是胰腺β细胞分泌受损。这些异常既由遗传因素决定，也由环境因素所致。胰岛素在维持葡萄糖稳态中起重要作用。肌肉、肝脏、脂肪组织是胰岛素作用的主要靶器官。从分子水平看，胰岛素通过与胰岛素受体(IR)结合刺激受体磷酸化并同时激活     

ERβ基因敲除小鼠的繁殖、鉴定及检测

目的繁殖和鉴定出足够数量的ERβ基因敲除雌性小鼠,建立ERβ基因敲除雌性小鼠骨质疏松性骨折实验动物模型基础。方法将引进的3对ERβ基因敲除小鼠饲养于屏障环境中,按遗传学规则进行繁殖3月后,引进2月龄遗传背景为野生型C57BL/6J种系雌鼠14只与纯合子雄性小鼠按2:1配对合笼扩增雌性杂合子小鼠再行分组繁殖,1月后获得较多数量的小鼠后,提取小鼠尾部组织DNA进行聚合酶链式反应(PCR)检测种系基因型,选取10只4月龄ERβ基因敲除纯合子雌性小鼠(βERKO)和10只野生型雌性小鼠(Sham)用MicroCT检测并比较胫骨近端骨小梁结构参数值,进行统计学分析。结果至分组开始繁殖第2个月,计有340只小鼠育出,经鉴定,ERβ+/+小鼠占23.5%、ERβ+/-小鼠占48.2%,ERβ-/-小鼠占28.3%、其中雌性54只,符合研究需要的动物数量较前5月增加近4倍,经过microCT检测4月龄的子代ERβ基因敲除雌性小鼠(βERKO)比较野生型雌性小鼠(Sham)骨小梁矿物质含量的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论本研究引进遗传背景为野生型C57BL/6J种系雌鼠与纯合子雄性小鼠配对,是在短期内成功地大量繁育足...