小鼠胸腺和脾脏细胞的体外转化培养

建立了小鼠脾脏、胸腺细胞体外转化微量培养系统,确定了最佳实验条件.点蜡法充CO_2,简便易行,效果好.RPMI-1640培养基内补充胎牛血清,其浓度确定为在脾细胞培养为10%,在胸腺细胞培养为20%.脾细胞培养最适细胞密度为2～5×10~6/ml,Con A最适量为2～4μg/培养;胸腺细胞培养细胞最适密度为1×10~7/ml,Con A最适量为2～4μg/培养.两种已知免疫活性的药物在脾细胞培养体系有明确肯定的反应.     

聚合酶链反应产物特异性的阳性证实

以聚合酶链反应(PCR)法在mRNA水平检测T淋巴细胞受体α链可变区基因表达为例,介绍用~(32)P标记的人工合成寡核苷酸探针对PCR产物特异性作阳性证实的方法。该法以干琼脂糖凝胶作为支持物、相对较为简便和省财。用Ca探针以干凝胶作支持物的杂交结果,证实29个Vα基因的PCR扩增中物均为特异性的,放射自显影的带型与位置和溴乙锭染色所示完全吻合。     

何杰金氏病增殖细胞核抗原的表达

不同时期的典型何杰金氏病１８例，用抗ＰＣ＿（１０）、Ｌ＿（２６）、ＵＣＨＬ－１抗体作ＳＰ免疫组化染色。结果显示：无一例阴性病例。ＰＣ＿（１０）阳性的ＨＲＳ细胞百分率与传统分类比较有相关性。Ｌ＿（２６）和ＵＣＨＬ＿１阳性细胞的百分率分别为１１．３％～２１．５％和３８．２％～４９．５％。表明不存在单一的Ｂ或Ｔ细胞免疫表达。提示ＨＲＳ细胞与背景中淋巴细胞之间其细胞来源有内在联系。     

正常人外周血T淋巴细胞核仁嗜银蛋白检测与分析

目的对正常人外周血T淋巴细胞核仁嗜银蛋白(Ag2NORs)含量进行检测与分析.方法将300例健康体检者按年龄分为三组青年组、中年组、老年组,用KL型T-淋巴细胞免疫活性分析系统检测外周血T淋巴细胞核仁嗜银蛋白含量,以银染核仁灰度面积与细胞核灰度面积比值(I.S%)表示.结果T淋巴细胞核仁嗜银蛋白含量在各年龄组内男、女比较,均无显著性差异(P＞0.05).中、老年组I.S%值比青年组低(P分别小于0.05、0.01),老年组又比中年组稍低(P＞0.05).I.S＜6%者所占比例在中、老年组中也远高于青年组.结论外周血T淋巴细胞核仁嗜银蛋白含量存在随年龄递减的趋势,提示人体在逐步走向衰老的同时,T淋巴细胞的免疫活性也渐渐下降.临床可将T淋巴细胞核仁嗜银蛋白(Ag2NORs)作为一个免疫指标,通过检测达到预防和早期发现疾病的目的.     

Effects of chimeric molecule of recombinant Dsg3EC1-2 with toxin PE40 on T and B lymphocytes in Pemphigus Vulgaris

Objective:To observe the effects of the recombinant chimeric toxin Dsg3EC1-2PE40 on T and B lymphocytes isolated from Pemphigus Vulgaris (PV) patients to further study its biological therapeutic function for PV. Methods :Recombinant chimeric toxin Dsg3EC1-2PE40 was first identified, expressed and purified, and then its effects on T and B lymphocytes of PV patients in vitro were detected and quantified by ELISPOT assay and MTT assay. Results :The purity of the expressed protein Dsg3EC1-2PE40 was up to 80%. In ELISPOT assay, with Dsg3EC1-2PE40, the overall number of B cells that produce anti-Dsg3 antibodies among PV patients was only about 60% of the comparable number with Dsg3EC1-2. The proliferation of T cells of PV patients was inhibited markedly by Dsg3EC1-2PE40. There was significant difference between the different groups with Dsg3EC1-2PE40 and Dsg3EC1-2. Conclusion:The recombinant chimeric toxin Dsg3EC1-2PE40 decrease the number of B cells that produce anti-Dsg3 antibodies in PV patients and can inhibit or kill T cells of PV patients in vitro.     

淋巴细胞NORs区的酸性非组蛋白在肿瘤患者中的表达分析

细胞核仁形成区(NORs)由核糖体RNA基因组成，位于此区调控rRNA转录的酸性非组蛋白可被硝酸银染色(Ag-NOR)，肿瘤细胞中Ag-NOR数目、分布和强度可作为肿瘤诊断、细胞分型和分化分级的重要指标；由于肿瘤细胞相关分子等的毒性作用，病人淋巴细胞NORs区的酸性非组蛋白表达。有别于非恶性疾病，可以此进行肿瘤诊断和病情监测。方法北京健尔康医疗设备有限公司提供的KL型肿瘤免疫图像分析系统，5％硝酸银及相应的银染试剂，RPM1640培养液，普通细胞银染技术对病人外周血淋巴细胞染色。结果对70例正常人和各种肿瘤患者的淋巴细胞酸性非组蛋白表达活性进行了对比研究，发现恶性疾病与正常人之间有明显差异。35例肿瘤病人中有28例阳性结果，有统计学意义，说明I．S％阳性结果与肿瘤有较密切联系，但并无特异性，这与有关文献报道相符。结论外周血T淋巴细胞Ag-NORs检测，可作为恶性肿瘤诊断及病情监测的重要参考指标。     

再生障碍性贫血造血细胞Fas抗原表达与T淋巴细胞功能的研究

目的 研究造血细胞凋亡与T淋巴细胞免疫在再生障碍性贫血(再障，Aplastic anemia，AA)发病机制中的作用及两者相关性。方法 采用流式细胞仪测定40例AA患者和15例非血液、免疫系统疾病对照者骨髓单个核细胞(BMMNC)的总CD34^ 、CD34^ Fas^ 、CD34^ Fas^-、CD3^ 、CD8^ 、CD3^ 、CD3^ CD25^ 标记值。结果 (1)与对照组比较，AA组总CD34^ 细胞％明显减少而其Fas表达率(以占总CD34^ 细胞％为计)明显增高。(2)AA组CD34^ 细胞％数与其Fas抗原表达率无明显负相关。(3)AA组T细胞％明显增多，且以CD8^ 细胞和CD3^ CD25^ 细胞增多为主。(4)AA组CD34^ 细胞％数与其T细胞活化状态无显著负相关。(5)AA组CD34^ 细胞Fas表达率与其T细胞活化状态无显著正相关。结论 AA骨髓存在着造血细胞数量减少和T淋巴细胞亚群数量、功能的异常，造血细胞数量减少还可能与Fas以外途径诱导的凋亡过度有关。骨髓造血细胞凋亡过度可能有活化T淋巴细胞免疫以外的途径诱导Fas途径或活化T淋巴细胞可以通过Fas之外的途径诱导造血细胞凋亡。     

淋巴细胞主动免疫治疗复发性自然流产

复发性自然流产(reetwrent spontaneous abortion，RSA)，指连续自然流产3次或以上，发病率为0．4％～1．0％，现在越来越多的学者将其定义为连续自然流产2次或以上。发病率约为5％。本研究对我中心治疗的23例HLA抗体阴性的RSA患者，采用淋巴细胞主动免疫治疗，取得比较理想的结局，报道如下。