MIF和Cyclin D1在肝细胞癌中的表达

目的 探讨巨噬细胞游走抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)在原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及两者在肝癌发病机制及细胞周期调控中的关系.方法 应用定量PCR及Westem blot技术检测MIF和Cyclin D1在肝癌组织和癌旁组织的表达.化学合成MIF siRNA,将PLC细胞和HepG2细胞分成对照组、MIF siRNA 50 nmol/L干预组、MIF siRNA 1130 nmol/L干预组,脂质体法转染肝癌细胞PLC和HepG2,定量PCR技术和Western blot检测MIF siRNA干扰后MIF和Cyclin D1 mRNA和蛋白的表达变化.结果 MIF和Cyclin D1蛋白在肝癌组织中的相对表达量为0.825±0.13和0.843±0.104;MIF和Cyclin D1 mRNA在肝癌组织中的相对表达量为癌旁组织的(7.31±1.85)倍和(4.27±1.05)倍,与癌旁组织相比,差异均具有统计学意义(FMIF=15.5,P<0.01;fCyclin D1=87.5,P<0.01).应用小RNA干扰技术转染PLC和HepG2肝癌细胞后MIF mRNA分别下调71.2%±7.2%、87.4%±2.9%、74.3%±8.9%、88.4%±4.6%(FPLC=315.5,P<0.01;FHHepG2=201.2,P<0.01);MIF蛋白分别下调为0.33±0.03、0.11±0.02、0.81±0.08、0.36±0.02,并呈剂量依赖关系(FPLC=43.9,P<0.01;FHepG2:133.4,P<0.01).伴随MIF mRNA和蛋白的表达F调Cyclin D1 mRNA分别下调68.2%±3%、78.1%±1.4%、65.8%±4.7%、77.3%±2.6%(FPLC=1569,P<0.01;FHepG2=480.4,P<0.01);Cyclin D1蛋白下调0.28±0.06、0.15±0.03、0.44±0.04、0.13±0.02,亦呈剂量依赖关系,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),两干预组相比差异有统计学意义(FPLC=35.5,P<0.01;FHepG2=114.7,P<0.01).结论 MIF和Cyclin D1在肝细胞癌中过表达,MIF可能在转录水平调控Cyclin D1的表达,并促使肿瘤细胞通过细胞周期检测点,继续增值和分化,导致肿瘤的形成.     

巨噬细胞移动抑制因子在大鼠急性坏死性胰腺炎模型中的作用研究

目的初步探讨巨噬细胞移动抑制因子（MIF）在大鼠急性坏死性胰腺炎（ANP）发病中的作用。方法健康雄性SD大鼠60只,随机分成三组,分别为对照组（腹腔注射生理盐水）、ANP组（腹腔注射左旋精氨酸）和干预组（腹腔注射左旋精氨酸＋单克隆抗MIF抗体）,每组20只。采用左旋精氨酸改良方法建立ANP模型,分别于3、6、12、24h四个不同时点处死5只大鼠,剖腹后从肠系膜上静脉取血,ELISA法测定血清MIF、TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8水平 碘比法测定血淀粉酶 切取胰腺组织依据Kusske标准行胰腺病理学评分 Western blot法测定胰腺组织NF-κBp65蛋白的表达。结果ANP组血淀粉酶及胰腺组织病理学评分各时点㈦对照组相比均显著升高,干预组㈦ANP组相比均显著降低（P〈0.01） 胰腺组织NF-κBp65蛋白的表达于造模后3h开始呈持续性上调,与对照组相比其表达显著增多,在干预组其表达水平㈦ANP组相比明显下调（P〈0.01） 血清MIF、TNF-α、IL-1、IL-6各时点在ANP组与正常对照组相比其水平均有明显升高,在干预组其水平㈦ANP组相比显著降低（P〈0.05） 血清IL-8在6、12、24h不同时点水平变化同上述因子,但在3h时点其水平无明显升高 MIF、胰腺组织病理学评分及胰腺组织NF-κBp65蛋白的表达,两两之间均成正相关（P〈0.05）。结论腹腔注射左旋精氨酸建立ANP的模型是稳定的 MIF可能通过调控核因子NF-κB的途径影响血清TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8水平而在大鼠急性胰腺炎发病过程中起一定的作用。     

环状RNA 0001846对骨关节炎生物学功能的影响及其机制

目的探讨环状RNA 0001846(circ₀001846)调控滑膜巨噬细胞极化在骨关节炎中的生物学功能及其机制。方法收集常州市第二人民医院2021年12月至2022年9月行全膝关节置换术骨关节炎患者及遭受膝关节创伤且无骨关节炎患者的滑膜组织各10例, 将10例骨关节炎滑膜组织作为研究组, 10例非关节炎滑膜组织作为对照组。使用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)测定环状RNA(circRNA)及巨噬细胞标志物在滑膜组织的mRNA表达水平;使用THP-1细胞上清液孵育软骨细胞, 通过细胞计数试剂盒(CCK-8)与流式细胞术测定软骨细胞活力、软骨细胞凋亡率;蛋白质印迹法(Western blot)检测软骨细胞凋亡相关蛋白表达水平。组间比较采用t检验。结果实验组患者滑膜组织中M1巨噬细胞标志物表达高于对照组[诱导型一氧化氮合酶(iNOS):2.67±0.34比0.98±0.10, t=15.140, P<0.01;肿瘤坏死因子-α(TNF-α):2.51±0.31比1.02±0.22, t=12.422, P<0.01和白细胞介素(IL)-1β:4.27...     

脊柱布氏杆菌病炎性因子变化的研究现状

布鲁氏菌病主要造成骨与关节损害,最常见的就是布鲁氏菌性脊柱炎（简称布病脊柱炎）。一旦发生布鲁氏菌感染,布鲁氏菌主要被人体内巨噬细胞吞噬,并寄生在宿主的巨噬细胞内,引起巨噬细胞极化释放相关炎症因子：如肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白介素因子家族（interleukins, IL）趋化因子家族（chemokines）。研究表明这些炎症因子在布病脊柱炎的炎症和骨质破坏中起到了重要作用。同时,不同极化类型的巨噬细胞转化可调控炎症和骨破坏的发生及发展方向。本文将对巨噬细胞极化相关炎症因子在布病脊柱炎发病机制中可能的作用机制作一综述。     

人脾脏巨噬细胞总RNA的提取和产率研究

目的　探讨提取人脾脏巨噬细胞总RNA的方法并测算其产率。方法　收集 5例门静脉高压症脾亢患者的手术切除脾脏 ,经贴壁培养法分离纯化出巨噬细胞 (Mφ)后 ,采用TRIzol试剂一步法提取 5例脾脏Mφ样本的总RNA。分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的产量和质量。最后计算出每 10 8个Mφ总RNA的产率。 结果　 5例样本Mφ总RNA的A2 60nm与A2 80nm比值平均为 1.83± 0 .13 ,提示总RNA纯度较高 ,电泳结果提示总RNA无降解。每 10 8个Mφ平均可抽提 (4 1.5 8± 2 3 .13 ) μg总RNA。 结论　采用TRIzol试剂一步法提取脾脏Mφ总RNA是可行的 ,收获的人脾脏Mφ总RNA纯度高、完整性好、量较多 ,可满足后续实验要求。     

大鼠胰腺癌模型及其化学趋化因子mRNA表达与肿瘤相关巨噬细胞计数的关系

目的研究SD鼠胰腺导管癌和非癌胰腺组织白细胞介素(IL)8、单核细胞趋化蛋白(MCP)1和巨噬细胞炎性蛋白(MIP)1αmRNA表达及其与肿瘤相关巨噬细胞(TAM)计数的关系。方法将二甲基苯并蒽(DMBA)置入大鼠胰腺实质内及设立曲古霉素(TSA)干预组(B组),3～5个月内处死观察胰腺癌发生情况;行3种mRNA原位杂交及TAM免疫组织化学染色。结果A组肿块直径明显大于B组(P<0.05),A组和B组纤维肉瘤均发生胰腺外转移。(2)A组和B组胰腺导管癌3种mRNA表达阳性率及其评分均明显高于非癌组织(B组中MCP1mRNA除外)(P<0.01),C组均呈阴性表达;且A组明显高于B组(P<0.05)。(3)A组和B组胰腺导管癌TAM计数明显高于非癌组织和C组(P<0.01);3～4个月A组和B组TAM计数低于5个月组(P<0.01)。(4)IL8mRNA阳性胰腺癌TAM数明显高于阴性者(P<0.01),其评分值与TAM计数之间呈正相关(r=0.32,P<0.05)。结论DMBA置入胰实质内可在短期获得较高的SD鼠胰腺癌发生率,TSA能抑制胰腺癌发生和生长,其作用可能与抑制化学趋化因子表达和TAM浸润有关;3种化学趋化因子和TAM可能与胰腺癌发生发展有较密切关系。     

血脾屏障形态学的实验研究

目的 探讨血脾屏障的形态学特征,研究其组成和变化规律,确立血脾屏障的概念。方法选用Wistar大鼠30只,其中10只经尾静脉注射碳粒。取脾脏组织制作病理切片进行HE染色、Foot染色、Masson染色、免疫组织化学染色(CD68、CD34)及透射电镜病理,观察血脾屏障的形态结构特征。结果碳粒在脾脏中围绕血脾屏障形成环状分布。巨噬细胞,血管内皮细胞,胶原纤维及网状组织在血脾屏障中均有特征性分布。结论血脾屏障是位于边缘区,环绕白髓存在的,窦周血管内皮细胞及其基膜、巨噬细胞、网状细胞和网状纤维(网状组织)及胶原纤维组成的生物屏障,它通过细胞间较致密结合的机械屏障作用和巨噬细胞的生物吞噬作用发挥抗原滤过作用,维持白髓的内环境稳态。它随生发中心的形成而逐渐成熟,通透性发生变化。     

血管生成相关因子治疗肝细胞肝癌研究进展

肝细胞肝癌（HCC）是一种富血管性肿瘤，其生长很大程度上依赖于血供的程度。现已证实许多血管生成相关因子与HCC的形成、生长、侵袭、转移、复发及预后关系密切。这些因子包括血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、Tie-血管生成素、生长抑素、血管他丁、内皮他丁、基质金属蛋白酶、血管生成因子、巨噬细胞游走抑制因子（macrophage migration inhibitory factor，MIF）、Ephrin等，     

补脾益气升阳方对糖尿病大鼠肾组织CD68标记巨噬细胞表达的影响

目的：本研究旨在通过动物实验,从糖尿病肾病（DN）存在炎症反应的角度,观察补脾益气升阳方对糖尿病大鼠肾组织CD68标记巨噬细胞表达的影响,探讨其减轻DN的肾脏损伤,降低蛋白尿的作用机制。方法：链脲佐菌素（STZ）大鼠6组,分别为空白对照组、模型对照组、补脾益气升阳方高剂量组、低剂量组、霉酚酸酯组、雷公藤多苷组,观察8周,检测大鼠体重、肾重、尿量、血糖、血肌酐、尿微量白蛋白,ELISA法检测尿C-反应蛋白（CRP）含量,免疫组化法检测大鼠肾脏CD6R标记巨噬细胞的表达。结果：补脾益气升阳方治疗后,与模型组比较,各治疗组大鼠体重、尿量、血糖、血清肌酐无明显变化,肾重减轻,肾重指数下降,6、8周高剂量组尿微量白蛋白明显降低（P〈0．01）;8周末尿CRP降低（P〈0．05）;高剂量组肾组织CD6s标记巨噬细胞的表达与模型组比较有明显降低（P〈0．05）。结论：健脾益气升阳方能够一定程度改善降低STZ大鼠尿蛋白与尿CRP的含量;下调CD6S标记巨噬细胞在STZ大鼠肾组织的表达,此可能是其降低DN尿蛋白的作用机制之一。     

NF-κB活化在氯化钆诱导ANP肺泡巨噬细胞凋亡中的作用

目的：观察氯化钆（GdCl3）诱导急性坏死性胰腺炎(ANP)肺泡巨噬细胞(AM)凋亡时核因子-κB（NF-κB）表达情况,探讨NF-κB在其中的作用及机制。
方法：36只SD大鼠随机分为正常对照组,ANP组,GdCl3治疗组。逆行性胰胆管注射5%牛磺胆酸钠建立ANP大鼠模型,正常对照组大鼠以同法注入生理盐水,GdCl3治疗组制模后即刻自阴茎背静脉注射GdCl3。各组大鼠于成模后6 h经支气管肺泡灌洗获取AM,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α和IL-1β含量及肺组织髓过氧化物酶(MPO)水平。用琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪检测AM的凋亡情况;Western-blot检测AM中NF-κB活性。同时对肺组织行病理学检查。
结果：ANP组TNF-α和IL-1β含量高于对照组（P<0.05）,而治疗组显著低于ANP组（P<0.05）。仅治疗组DNA电泳见典型的细胞凋亡的梯状条带。对照组,ANP组,治疗组AM凋亡率分别为（10.81±0.86）%,（6.47±1.52）%,（17.41±3.36）%,3组间差异均有统计学意义（P<0.05）;Western-blot检测3组AM中NF-κB表达的相对灰度值分别为（0.80±0.05）,（1.96±0.15）,（1.42±0.10）,3组间差异亦有统计学意义（P<0.05）。AM的凋亡率与NF-κB活性呈负相关（r＝-0.554,P<0.01）。
结论：GdCl3可能通过抑制NF-κB的活化诱导大鼠ANP肺泡巨噬细胞凋亡,从而减轻肺损伤。