骨形成蛋白-2、4在人脑胶质瘤组织中的表达及意义

目的:研究骨形成蛋白(BMP)-2、4在人脑胶质瘤发生发展中所起的作用及其与临床病理分级的关系.方法:应用RT-PCR技术和免疫组织化学SABC法检测BMP-2、4mRNA和蛋白质在20例正常脑组织和40例不同级别人脑胶质瘤组织中的表达变化,并分析其与患者的年龄、性别、病理分级的相关性.结果:BMP-2和BMP-4在正常脑组织和人脑胶质瘤组织中均有表达,且在胶质瘤中的表达显著高于正常脑组织,即BMP-2、4 mRNA和蛋白质Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤组织中的表达显著高于Ⅰ、Ⅱ级,且其与患者的年龄及性别无关.结论:BMP-2、4在人脑胶质瘤的发生发展过程中起一定作用.     

Rho相关激酶抑制剂Y27632对小鼠腔前卵泡体外发育的作用

目的 探讨Rho相关激酶（ROCK）抑制剂Y27632在小鼠腔前卵泡体外发育中的作用。 方法 取出生12.5 d的小鼠卵巢,机械法收集单枚腔前卵泡,采用超低吸附96孔板模拟3D环境对其进行培养。设置对照组和含有Y27632的实验组,通过形态学观察、卵泡直径的变化、成熟卵泡的数量、成熟卵母细胞纺锤体的变化等来评估卵泡的整体发育情况。采用Real-time PCR技术检测颗粒细胞中卵泡刺激素受体（FSHR）、卵母细胞中骨形态发生蛋白15（BMP15）、生长分化因子9（GDF9）等以及凋亡相关基因（Bad、Bax和Caspase-3）的表达情况,同时,用细胞存活染料检测卵泡发育过程中颗粒细胞的凋亡情况。 结果 ROCK抑制剂Y27632对卵泡直径增长和基本发育指标（存活数、成腔率和成熟率）无明显影响（P>0.05）,但对照组卵母细胞成熟后纺锤体组装出现异常。培养8 d后,与对照组相比,实验组颗粒细胞特异性基因FSHR上调;卵母细胞特异性基因BMP15和GDF9上调,而叉头框O3（FoxO3)下调;凋亡基因Bax、Bad和Caspase3表达下调,实验组卵泡内的颗粒细胞凋亡明显少于对照组。 结论 小鼠卵泡体外发育过程中,ROCK抑制剂Y27632能够抑制颗粒细胞的凋亡,防止卵母细胞纺锤体组装异常,进而提高卵泡体外发育质量。     

南京95例肝病患者中3种人细小病毒感染的检测与分析

目的 建立人细小病毒B19、人博卡病毒(HBoV)及人细小病毒4(PARV4)分子检测方法,并应用于南京95例肝病患者血浆中三种人细小病毒的感染情况分析.方法 分别建立人细小病毒B19、HBoV及PARV4感染的巢式PCR方法,确定其灵敏度与特异性;并对南京市某医院95例住院肝病患者血浆中三种人细小病毒的感染情况进行检测,并对检测结果进行统计学分析.结果 建立的三种巢式PCR方法特异性好,检测灵敏度均可达10个拷贝.95例肝病患者血浆中检出B19感染2例(2.1％),HBoV感染9例(9.5％),且发现在5例药物性肝炎患者中检出HBoV阳性3例,但未检出PARV4.结论 人细小病毒B19、人博卡病毒(HBoV)及人细小病毒4(PARV4)巢式PCR检测方法灵敏特异.从肝病患者血浆中检出了B19及HBoV.     

急性心肌梗死病人血浆中微小 RNA?21定量检测及其临床意义

目的探讨微小 RNA(miRNA)?21表达在急性心肌梗死( AMI)病人血浆中的表达及其临床意义。方法选取 2016年 8月至 2017年 8月亳州市人民医院住院 AMI病人 40例为心肌梗死组,同期该院体检健康者作为健康对照 40例为健康对照组,采用特异的茎环引物逆转录及荧光定量 PCR法检测 miR?21达到设定荧光阈值时的 Ct值,采用 2-△△Ct相对定量法分析 AMI组血浆中 miR?21相对于健康对照组血浆中的表达量;采用受试者工作特征曲线( ROC)评价 miRNA?21、肌钙蛋白在 AMI病人中的诊断效率;采用 Pearson相关性分析 AMI病人血浆中 miR?21表达和肌钙蛋白的相关性。结果 AMI病人血浆中 miR?21相对表达量( 2-△△Ct)为 2.51(0.68～5.00),心肌梗死组血浆中 miR?21表达明显高于健康对照组,与健康对照组血浆 miR?21的表达水平差异有统计学意义( P＜0.05);在 AMI病人 miR?21的 AUC为 0.88,肌钙蛋白的 AUC为 0.98;在 AMI病人血浆中 miR?21水平和肌钙蛋白浓度成正相关,相关系数为 0.48(P＜0.05)。结论 AMI病人血浆中 miR?21高表达,可能与心肌梗死发生有关,有望成为心肌梗死诊断的新靶点,为临床诊疗提供新的思路。     

联合检测尿液微小核糖核酸 375和微小核糖核酸 145?5p水平在膀胱癌诊断和预后的临床价值

目的观察联合检测尿液微小核糖核酸 375(miRNA?375)和微小核糖核酸 145?5p(miR?145?5p)水平在膀胱癌诊断和预后的临床价值。方法选择 2012年 1月至 2016年 1月在复旦大学附属中山医院青浦分院就诊确诊为膀胱癌的病人 112例,为膀胱癌组,选择同期在复旦大学附属中山医院青浦分院行健康体检者 45例,为健康对照组。选取两组的尿液标本采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT?PCR)的方法检测 miRNA?375和 miR?145?5p的表达水平。观察两组尿液 miRNA?375和 miR?145? 5p水平的差异,膀胱癌病人尿液 miRNA?375和 miR?145?5p表达水平术前术后变化,与临床指标和预后的关系,及其在诊断膀胱癌和判断其预后的灵敏度和特异度。结果膀胱癌组尿液 miRNA?375表达明显高于健康对照组［(3.95±1.26)比(2.30±0.54)P＜0.01］术后较术前明显降低［(2.43±1.08)比(3.95±1.26)P＜0.01］而 miR?145?5p的表达明显低于健康对照组［(1.48±0.75)比(2.68±01),P＜0.01］,术后较术前明显升高［(1.48±05)P＜0.01］。尿液 miRNA?375和 miR?145?5p表达在诊断膀胱癌具有较高的灵敏度和特异度,联合检测的灵敏度 87.5%,特异93.3%,其曲线下面积明显高于 miRNA?375(z＝2.316,P＝0.021)和 miR?145?5p(z＝2.727,P＝0.006)单独检测,而 miRNA?375和 miR?145?5p之间无明显差别(z＝0.921, P＞0.05)尿液 miRNA?375和 miR?145?5p表达水平与性别、年龄、肿瘤部位和肿瘤分级无明显相关性(P＞0.05),而与肿瘤分期、淋巴结转移和肿瘤数目具有明显相关性(P＜0.01)。膀胱癌病人随访 3年,出现 23例死亡, 89例存活,死亡组的 miRNA?375表达水平明显高于存活组(P＜0.01)而 miR?145?5p表达水平明显低于存活组(P＜0.01)。尿液 miRNA?375表达水平在预测膀胱癌 3年内出现死亡的灵敏度为 78.3异度 95.5%,其曲线下面积为 0.891;而尿液 miR?145?5p表达水平在预测膀胱癌 3年内出现死亡的灵敏度为 95.7%,特异度为 70.8%,曲线下面积为 0.856。两者联合检测并不能提高预测 3年内出现死亡的诊断效能。结论 miRNA?375和 miR?145?5p参与了膀胱癌的发生发展,尿液中的 miRNA?375和 miR?145?5p检测对于膀胱癌的诊断和预后判断具有重要临床价值。     

G6PD缺乏症单细胞SNaPshot基因诊断方法的建立

目的建立有效可行的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症单细胞基因诊断技术。方法获取正常人及G6PD基因突变杂合子的单个淋巴细胞,采用多重巢式PCR结合多重SNaPshot技术对G6PD基因突变高发的四个外显子上的12个突变位点进行基因诊断。结果共检测了58个正常和108个杂合子单淋巴细胞,扩增效率为90.97%,等位基因脱扣率为8.08%。结论所建立的多重巢式PCR结合SNaPshot技术可在单细胞水平上快速、准确地检测12个G6PD基因突变位点,可望在临床上实现G6PD缺乏症的植入前遗传学诊断。     

胃癌患者外周血CK20mRNA的表达及临床意义

采集55例胃癌、46例良性胃病及正常献血员50例，应用逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）技术研究外周血CK20mRNA的表达。结果：46例良性胃病及正常献血员50例外周血CK20mRNA均呈阴性，55例胃癌中有35例外周血CK20mRNA表达阳性，I、Ⅱ期20例中有7例外周血CK20mRNA表达阳性，表达率低于Ⅲ、Ⅳ期（28／35）；低、未分化腺癌38例中，30例外周血CK20mRNA表达阳性，高于高、中分化腺癌（5／17）。认为PT－PCR检测外周血CK20mRNA敏感性和特异性较高，可作为胃癌患者术前评估的指标之一。     

小分子乙型肝炎病毒基因组缺失突变体结构分析

目的 了解小分子HBV基因组缺失突变体的基因结构及特点.方法 采用一步法PCR从慢性乙型肝炎患者血清中扩增全基因组HBV DNA,回收并克隆＜1 kh的小分子HBV DNA,测序并以BioEdit及VectorNTI 6.0软件分析基因结构特点.结果 获得基因长度介于174～986 bp之间的64种、共124个小分子HBV缺失突变体DNA,按基因结构特点分为3类,即3种GT-AG剪接变异体、29种"常规"缺失突变体及32种基因组内部含polyA的缺失突变体.所有小分子基因组缺失突变体在HBV各编码区及基因调控区均存在不同程度缺失,其中66%(42/64种)保留与HBV复制(包装)相关的所有顺式调控序列,48%(31/64种)保留X编码区.结论 乙型肝炎患者血清中普遍存在小分子HBV基因组缺失突变体,深入了解这些变异体的结构和功能,有助于进一步探索HBV的致病机制.     

定量检测神经生长抑制因子及受体在脑梗死大鼠脑组织中的表达

目的观察神经生长抑制因子(Nogo-A)及其受体(NgR)在脑梗死大鼠不同时间点表达的变化规律。方法将80只SD大鼠制成易脑卒中型肾血管性高血压大鼠模型后,随机分为脑梗死组和对照组(各40只),脑梗死组大鼠施行右侧大脑中动脉闭塞术,用免疫组织化学法和荧光定量RT-PCR法检测术后第1、2、4和8周脑梗死灶周围Nogo-A及NgR mRNA表达的变化规律。结果免疫组织化学显示脑梗死组Nogo-A和NgR含量在病灶周围先呈逐渐上升趋势,第4周达到高峰,较对照组显著升高(P<0.05),Nogo-A在第8周降低,与对照组无显著性差异(P>0.05);而NgR略微下降,但仍高于对照组(P<0.01)。荧光定量RT-PCR显示脑梗死组Nogo-A与NgRmRNA表达均先上升,在第4周达到高峰,与对照组差异有显著性意义(P<0.01),第8周Nogo-A mRNA表达下降仍高于对照组(P<0.01);NgR mRNA表达在第8周时与对照组无显著性差异(P>0.05)。结论脑梗死损伤可使梗死灶周围组织中Nogo-A及NgR表达增加,可能与脑梗死后神经再生障碍有关。