一种适用于聚合酶链反应的常见念珠菌基因组DNA提取方法的研究

目的介绍一种简单、快速的真菌DNA提取方法,提高真菌DNA提取效率,减少毒性和污染性,以适应临床研究需要。方法同时用溶细胞酶结合Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法,提取白色念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌和净平滑念珠菌基因组DNA,用A260/A280的比值检测DNA的纯度并计算质量浓度,同时行聚合酶链反应(PCR)以评价其可靠性。结果溶细胞酶结合Biospin真菌基因组DNA提取试剂成功提取所用真菌基因组DNA,其纯度及质量浓度能满足PCR反应的要求。结论用溶细胞酶结合Biospin真菌基因组DNA提取试剂提取DNA,简单、快速、高效,可用于PCR反应。     

乳腺癌前哨淋巴结活检对腋窝淋巴结状态的预测价值研究

为探讨乳腺癌前哨淋巴结（SLN）组织学特征对腋窝淋巴结状态的预测价值，笔者应用专利蓝或锝99m标记的大分子右旋糖苷（99mTc-DX）为示踪剂成功显示20例乳腺癌患者的SLN。术中先进行前哨淋巴结活检（SLNB），再行乳腺癌改良根治术。并应用常规病理（HE）、免疫组化（IHC）和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测腋窝淋巴结转移。结果示，20例患者共找到腋窝淋巴结254个，其中SLN48个，NSLN206个。常规病理证实3例患者7个前哨淋巴结有癌转移，NSLN206个均无癌转移。免疫组化染色检测到7例患者11个SLN CK-19表达阳性，2个NSLN表达阳性。RT-PCR检测CK-19mRNA14例患者30个SLN和22个NSLN表达阳性。提示乳腺癌前哨淋巴结活检能准确预测患者腋窝淋巴结的状态。     

Pin1和周期素D1在胰腺癌中的表达及其意义

目的:检测胰腺癌及癌旁组织中Pin1和周期素D1基因的表达,探讨Pin1在胰腺癌发病中所起的作用。方法:收集27例胰腺肿瘤组织及其相应的肿瘤旁组织标本,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法（RQ RT-PCR）检测胰腺良恶性肿瘤及肿瘤旁组织中Pin1和周期素D1 mRNA 的表达,运用Fisher精确概率分析两者之间的相关性及其与肿瘤临床分期和病理特征的关系。结果:7例胰腺囊腺瘤中周期素D1和Pin1的表达与肿瘤旁组织之间无显著性差异;而20例胰腺癌中周期素D1和Pin1的表达明显高于肿瘤旁组织［（2.78±1.02）vs.（4.36±1.27）和(5.48±1.69) vs. (9.97±1.86),P<0.05）］。Pin1和周期素D1与肿瘤的临床分期和病理分化程度无明显的相关（组间差异均为P>0.05）,但Pin1与周期素D1的表达有关（P<0.01）。 结论:胰腺癌中Pin1的过表达可促进周期素D1表达,由此诱导了肿瘤的发生;Pin1可能在胰腺癌中起着重要作用。     

内蒙古地区食管癌组织中人乳头瘤病毒的检测

目的:了解内蒙古地区HPV感染与食管癌的关系,探讨HPV在食管癌病因学中的作用.方法:应用通用引物PCR法检测食管癌标本中HPV DNA.结果:在来自内蒙古地区41例食管癌标本中,HPV DNA检出率为零.结论:内蒙古地区食管癌发生可能与HPV感染无关.     

结核分枝杆菌稳定L型变异的聚合酶链反应研究

目的：探讨结核分枝杆菌稳定L型变异的分子机制。方法：采用结核分枝杆菌聚合酶链反应(PCR)诊断试剂扩增结核分枝杆菌稳定L型纯培养物的染色体DNA，琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyscrylamid gel electrophoresis，PAGE)薄层凝胶扫描分析。结果：结核分枝杆菌稳定L型比细菌型多一DNA条带。结论：结核分枝杆菌稳定L型的形成可能与基因突变有关，在特异性PCR反应中可形成与其亲代细菌型有差异的产物。     

通用引物PCR-SSCP技术分析16Sr RNA基因特征快速鉴定细菌

目的探讨通用引物聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术在细菌检测中的应用.方法选取9种常见的细菌,采用通用引物对细菌的16SrRNA基因进行PCR扩增,产物进行单链构象多态性分析,并以标准菌株为对照.结果一对引物扩增产物SSCP图谱各细菌之间难以区别;两对引物扩增产物SSCP图谱条带数目、相对迁移率及条带之间的间距存在明显,可相互区别;3种细菌的标准菌株和临床菌株的SSCP图谱完全一致.结论采用针对16SrRNA的通用引物PCR-SSCP技术以标准菌株为对照可方便快捷地检测细菌.     

载脂蛋白E基因多态性与颈动脉粥样硬化的相关性研究

目的:研究载脂蛋白E(ApoE)基因多态性与颈动脉粥样硬化的相关性。方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,对25例B超检测颈动脉内中膜厚度(IMT)增厚患者(增厚组)和25例同期健康体检者(对照组)的ApoE基因多态性进行分析。结果:IMT增厚组ε3等位基因频率较对照组降低(P<0.05),ε4等位基因频率较对照组升高(P<0.01)。IMT增厚组的ε3/ε4基因型频率显著要高于对照组。对以上两组再按ApoE基因型分别分为3组:ApoE2(ε2/2 ε2/3),ApoE3(ε3/3)和ApoE4(ε3/4 ε4/4)。结果显示颈动脉IMT在不同基因型间差异显著,ApoE4组显著增加,颈动脉多发斑块率在此组也显著增加。结论:ApoE基因多态性与颈动脉粥样硬化形成有相关性,ε4基因是颈动脉粥样硬化形成的危险因子。     

用RT-PCR方法检测登革病毒E基因核酸

目的：应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术建立检测登革2型病毒E基因的方法。方法：分别抽提登革2型病毒NGC株和从登革出血热病人血清中分离得到的2型登革热病毒(DV)核酸(RNA)，合成CD-NA第一链，经过RT-PCR得到cDNA产物，用HinfI限制性内切酶酶切鉴定。结果：通过RT-PCR检测登革2型病毒核酸。结论：登革2型病毒E基因核酸的RT-PCR检测方法的建立为快速诊断登革病毒感染提供了可靠的方法。     

聚合酶链反应检测铜绿假单胞菌感染性角膜溃疡的实验研究及临床应用

目的：探索聚合酶链反应（PCR）技术对铜绿假单胞菌感染性角膜溃疡快速诊断的可行性。优越性及其在临床应用中的价值。方法：建立PCR检测标准铜绿假单胞菌方法，对兔铜绿假单胞菌感染性角膜溃疡模型研究并应用于临床，并与细菌培养做比较。结果：铜绿假单胞菌扩增出一条长504bp的阳性条带，其他常见细菌，人和兔正常角膜组织均为阴性，动物模型PCR敏感性为93.8%。特异性为100.0%；细菌培养敏感性为68.7%。特异性为93.7%。临床标本PCR阳性率为66.7%；细菌培养阳性率为38.1%。结论：PCR技术对快速检测实验室和临床标本中的铜绿假单胞菌具有重要的应用价值。     

PCR-RSSO基础上HLA-Ⅰ、Ⅱ基因分型的研究

目的通过对PCR-DNA技术的分析,探讨人类白细胞抗原(HLA)基因分型方法。方法采用PCR反向序列特异性寡核苷酸(polymerase chain reaction-reverse sequence specific oligonucleotide,PCR-RSSO)杂交技术,建立改良半量扩增体系全自动HLA-I、Ⅱ等位基因分型方法,进行了635份血液标本HLA-A、B、C、DR、DQ等位基因分型,其中166份DNA同时采用序列特异性引物技术(PCR-SSP)和手工全量扩增体系PCR-RSSO技术。对全自动半量PCR-RSSO、PCR-SSP、手工PCR-RSSO 3种方法做两两比较。结果全自动半量PCR-RSSO的分型成功率为98.4%(3 124/3 175),PCR-SSP为98.8%(656/664),手工PCR-RSSO为88.3%(733/830)。经χ2检验,全自动半量PCR-RSSO与PCR-SSP的分型成功率无统计学差异,与手工PCR-RSSO有显著差异(P<0.05)。结论PCR-RSSO可识别HLA-Ⅰ,Ⅱ共706个等位基因,覆盖WHO命名委员会2000年公布的936个等位基因的75.43%;对706个HLA等位基因的分型均为中~高分辨率,有分辨纯合子等位基因的能力;易长期保存书面的实验原始资料,即杂交条;具有成本低、劳动强度低、省时和DNA消耗量少等优点。PCR-RSSO适合于造血干细胞移植和建立造血干细胞及脐带血干细胞库的组织配型。