小鼠胚胎干细胞体外向血管平滑肌细胞的定向分化*★

目的：血管重建手术在多数情况下以自体血管作为替代品，但来源有限。胚胎干细胞具有发育全能性，目前其定向诱导机制尚不明确。通过选择适当的诱导剂，探讨胚胎干细胞体外向血管平滑肌细胞分化的趋势。 方法：实验于2006-08/2007-02在南昌大学第二附属医院血液病研究所完成。①动物及细胞系：清洁级孕12.5 d昆明小白鼠1只，由南昌大学医学院动物中心提供，实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。小鼠胚胎干细胞系129X/SvJ编号为SCRC-1018，由American Type Culture Collection提供。②实验方法：取孕12.5 d鼠胚胎，去除头部、内脏及四肢，将组织块剪碎，胰酶消化，分离培养胚胎成纤维细胞，传至3~5代时更换为含体积分数为0.15胎牛血清的DMEM高糖培养基，24 h后收集培养液，加入2.0 mmol/L L-谷氨酰胺，1×非必需氨基酸，0.1 mmol/L β-巯基乙醇，1 000 Ｕ/mL白血病抑制因子，此即为条件培养基。常规复苏小鼠胚胎干细胞系129X/SvJ，以1×106密度接种，传代时用差速贴壁法分离去除已分化的胚胎干细胞，加入条件培养基5 mL，经过悬滴-悬浮培养，构建拟胚体分化模型。设立3组，各组均置于明胶包被的T25培养瓶中，每瓶加入50个拟胚体，使其均匀分布于培养瓶底。诱导组7~10 d加入10-9 mol/L全反式维甲酸和3μg/L转化生长因子β1，10~21ｄ加入 20μg/L血小板源性生长因子。血清对照组仅加入去生长因子胎牛血清，全反式维甲酸组仅加入全反式维甲酸。诱导21ｄ的拟胚体，用胰蛋白酶和胶原酶Ⅱ联合消化为单个细胞，再加入20μg/L血小板源性生长因子继续诱导7ｄ。③实验评估：应用RT-PCR法检测诱导细胞血管平滑肌肌动蛋白、血管平滑肌肌球蛋白重链基因的表达。通过免疫细胞化学技术检测血管平滑肌肌动蛋白的表达来鉴定细胞性质。 结果：①胚胎干细胞生长及拟胚体诱导分化：胚胎干细胞在体外能自发形成拟胚体，经过不同生长因子的分阶段联合诱导，拟胚体贴壁后球体略摊开，周围出现大量的梭形细胞。②RT-PCR检测：拟胚体血管平滑肌肌动蛋白和血管平滑肌肌球蛋白重链基因均呈强阳性表达。③免疫细胞化学检测：荧光显微镜下，罗丹明染色细胞浆呈红色荧光，并可见肌丝结构；DAPI染色细胞核呈蓝色荧光。诱导组血管平滑肌肌动蛋白阳性率明显高于血清对照组、全反式维甲酸组（P < 0.05）。 结论：胚胎干细胞经维甲酸、转化生长因子β1以及血小板源性生长因子分阶段联合诱导后，可分化为血管平滑肌细胞且纯度较高。随着细胞纯度和活性等问题的进一步解决，胚胎干细胞将有可能成为血管组织工程的种子细胞。     

受精第3天胚胎的融合程度与植入潜能

背景：虽然辅助生殖技术发展迅速,但是胚胎植入率仍不理想,关于胚胎融合程度与植入潜能的关系尚无定论。 目的：探讨受精第3天胚胎早期融合与植入率的相关性。 方法：回顾性分析420例(共移植胚胎1 016个)患者在超促排卵、体外受精及胚胎移植后,植入成功胚胎早期融合情况与未植入成功胚胎早期融合情况的差别。 结果及结论：受精第3天移植早期融合胚胎共200个,其中植入成功48个;受精第3天移植未早期融合胚胎共816个,其中植入成功133个,两组比较差异显著(P < 0.05)。植入胚胎中有3个早期融合胚胎妊娠率达71.43%,有2个为31.91%,有1个为51.06%,0个为39.81%。可见,在目前的胚胎选择标准下,胚胎早期融合可以显著提高胚胎的植入率,但是其具体机制,还有待进一步研究。     

加压氧对人喉咽癌裸鼠皮下移植瘤的作用

目的观察加压氧对人喉咽癌裸鼠皮下移植瘤的作用。方法将40只雄性裸鼠随机分为空白对照组A1（成瘤5d后处死）、空白对照组A2（成瘤10d后处死）、加压氧组B1（成瘤后加压氧暴露5d后处死）、加压氧组B2（成瘤后加压氧暴露10d后处死）,每组10只,接种喉咽鳞癌Fadu细胞建立裸鼠喉咽癌移植瘤模型,分别暴露于空气中和加压氧中,实验结束后处死各组裸鼠,观察和记录肿瘤质量、体积,计算肿瘤质量抑制率和体积抑制率,并进行组织病理学观察。结果各组肿瘤组织病理学检查均示肿瘤为低分化鳞状细胞癌。加压氧组B1肿瘤质量抑制率为20.1%,体积抑制率为20.5%;加压氧组B2肿瘤质量抑制率为13.7%,体积抑制率为10.3%。结论加压氧对裸鼠喉咽癌移植瘤生长有一定的抑制作用。     

本期专题：用于胚胎干细胞培养的饲养层细胞

1人胚胎干细胞饲养层的制备及生物学活性,见2011年15卷23期4233页。2制作胚胎干细胞饲养层细胞条件的优化,见2010年14卷36期6768页。     

大枣多糖对气血双虚模型小鼠造血功能的影响

目的探讨大枣多糖对气血双虚模型小鼠的补气出血作用。方法以放血与环磷酰胺并用致小鼠气血双虚模型为研究对象,分别为大、中、小剂量的大枣多糖水溶液组,当归补血口服液组及同体积生理盐水组,另设完全空白对照组,造模同时给药,连给10d;实验结束后分别测定血液中红细胞计数、白细胞计数、血小板计数、血红蛋白及血清中粒-巨噬细胞集落刺激因子水平。结果大枣多糖可显著提高气血双虚模型动物的血象及血清粒-巨噬细胞集落刺激因子水平,差异有显著性意义(P<0.05～0.01),以中剂量大枣多糖组的改善作用最强。结论大枣多糖有好的补血作用。     

粗茎秦艽组织培养及再生植株

用粉茎秦艽Gentianacrassicaulis子叶和下胚轴为材料。在MS＋2mg／L2，4－D＋0．5mg／LBA的培养基上进行培养，子叶及下胚轴的出愈率为100％。愈伤组织继代培养于MS＋0．5mg／L2，4-D＋0．5mg／LBA＋0．5mg／LNAA＋500mg／LLH＋3倍MS有机物和维生素的培养基上生长旺盛。愈伤组织转入分化培养基MS＋1mg／LNAA＋2mg／LBA＋3mg／LZT＋3mg／LGA＋500mg／LLH＋6％蔗糖＋3倍MS有机物和维生素＋3倍FeSO4（Na2－EDTA）上培养，其中40％形成体细胞胚。体细胞胚在无激素MS培养基上发育成苗。     

外燥对小鼠肺组织水通道蛋白1表达的影响

目的 观察外燥对小鼠肺组织水通道蛋白1(AQP1)表达的影响.方法 60只SPF级昆明种小鼠随机分为常温常湿组、常温燥组、温燥组、凉燥组,每组15只.图像分析免疫组化法之各组第6天、第12天,第18天小鼠肺组织AQP1阳性表达率.结果 各组AQP1阳性表达部位多在肺泡上皮处;温燥组第12天、第18天AQP1蛋白表达阳性率持续下降,凉燥组也呈同样趋势,尤以第12天为甚(P＜0.01),伴肺部炎性病变并随时间延长而加重.结论 外燥致肺部炎性病变之时,伴肺泡液细胞内外转运相关的AQP1蛋白表达下降,提示与外燥伤肺、耗津病机相关.     

甜菜碱促进小鼠脾淋巴细胞增殖作用的钙通道机制研究

目的:研究甜菜碱促进小鼠脾淋巴细胞的增殖作用与钙通道的关系.方法:采用清洁级BALB/c小鼠分离小鼠脾淋巴细胞后体外培养的方式获得小鼠脾淋巴细胞,分为阴性对照组、Con A组、甜菜碱0.04,0.4,4,20 mmol·L~(-1)组.分别采用MTT法观察甜菜碱对小鼠脾淋巴细胞增殖的作用,流式细胞术测定甜菜碱对小鼠脾淋巴细胞周期的变化,激光共聚焦扫描显微镜观察甜菜碱对小鼠脾淋巴细胞内钙浓度的变化及加入不同钙通道阻滞剂后细胞内钙浓度的变化.结果:4,20 mmol·L~(-1)甜菜碱体外作用于小鼠脾淋巴细胞12 h促进小鼠脾淋巴细胞增殖,0.04,0.4,4,20 mmol·L~(-1)甜菜碱分别体外作用于小鼠脾淋巴细胞24,48 h均促进小鼠脾淋巴细胞增殖,以4 mmol·L~(-1)甜菜碱作用24 h效果最好;4 mmol·L~(-1)甜菜碱作用小鼠脾淋巴细胞4,6,18,24 h能促使小鼠脾淋巴细胞由G_0/G_1期进入S期,并以18 h效果最为明显;4 mmol·L~(-1)甜菜碱作用于淋巴细胞6,12,18 h,脾淋巴细胞内Ca~(2+)浓度明显升高(P＜0.01),以6 h效果最明显;钙通道阻滞剂硝苯地平、地尔硫卓、咪贝地尔、金雀异黄素对甜菜碱升高小鼠脾淋巴细胞内钙离子浓度没有影响,而维拉帕米、新霉素、肝素、普鲁卡因能阻断甜菜碱升高小鼠脾淋巴细胞内钙离子浓度.结论:甜菜碱通过升高小鼠脾淋巴细胞内钙离子浓度而促进小鼠脾淋巴细胞由G_0/G_1期进入S期,促小鼠脾淋巴细胞增殖的作用.细胞内钙离子浓度升高主要通过2个途径:影响G蛋白介导的L-型电压门控钙通道的α_1亚单位而引起外钙内流;影响胞内钙库的IP_3R钙通道和RyR钙通道而引起内钙释放.     

桑叶多糖对长期大负荷运动训练小鼠免疫功能的影响

目的:探讨桑叶多糖对大负荷长期运动训练小鼠免疫功能的影响。方法:120只昆明种小白鼠随机分为安静对照组(C)、运动组(T)、盐水+运动组(S+T)、高剂量桑叶多糖+运动组(HM+T)、中剂量桑叶多糖+运动组(MM+T)、低剂量桑叶多糖+运动组(LM+T),每组20只。除安静对照组外,其余各组小鼠进行4周负重5%游泳训练,6次/周,50 min/次,HM+T组、MM+T组、LM+T组分别以150,200,250 mg.kg-1.d-1剂量ig,S+T组小鼠ig等体积生理盐水,连续4周。测定各组小鼠血象、体质量、巨噬细胞吞噬功能、脾脏/胸腺指数、血清凝集效价、体外抗体形成细胞的数量。结果:与S+T组比较,桑叶多糖可以明显增加小鼠白细胞(WBC)数、淋巴细胞绝对值、中性粒细胞绝对值(P<0.05～P<0.01);桑叶多糖均可不同程度增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数,MM+T,HM+T组吞噬率(35.7±5.17)%,(36.7±4.83)%显著高于S+T组(29.2±4.27)%,吞噬指数(3.19±1.23,2.49±1.29)显著高于S+T组(3.91±1.29)(P<0.05);桑叶多糖能增加小鼠胸腺和脾脏质量(P<0.05),提高脾脏/胸腺指数,MM+T,HM+T组脾脏指数(1.53±0.61),(1.73±0.69)mg.g-1显著高于S+T组(1.09±0.68)mg.g-1,胸腺指数(1.98±0.59),(2.21±0.63)mg.g-1显著高于S+T组(1.49±0.51)mg.g-1(P<0.05～P<0.01);桑叶多糖可以明显提高血清凝集效价以及体外抗体形成细胞的数量(P<0.05～P<0.01)。结论:桑叶多糖能增强长期大负荷运动小鼠机体免疫功能,调节免疫细胞以及免疫分子。其中桑叶多糖中、高剂量的效果明显。     

香砂平胃颗粒对小鼠胃肠运动及胃肠激素的影响

[目的]研究香砂平胃颗粒对正常小鼠及胃肠动力障碍模型小鼠胃排空、肠推进和血清中胃动素（MOT）、胃泌素（GAS）、生长抑素（SS）、P物质（SP）和生长激素释放肽（Ghrelin）含量的影响。[方法]灌胃给予正常小鼠及阿托品所致胃肠动力障碍模型小鼠香砂平胃颗粒高、中、低剂量（2.6 g/kg、1.3 g/kg、0.65 g/kg）,采用称重法计算小鼠胃残留率和小肠炭末推进法计算小鼠肠推进率,进一步应用ELISA方法检测小鼠血清中MOT、GAS、SS、SP及Ghrelin的含量,并利用RT-PCR技术检测下丘脑中Ghrelin mRNA与生长激素促分泌素受体（GHSR）mRNA转录水平。[结果]在胃肠运动方面,香砂平胃颗粒高剂量组能显著促进正常小鼠的胃排空（P<0.05）,并能拮抗阿托品所致小鼠的胃排空抑制作用（P<0.05）,香砂平胃颗粒高、中、低剂量组均能显著拮抗胃肠动力障碍模型小鼠的小肠推进抑制作用（P<0.05或P<0.01）;在胃肠激素方面,香砂平胃颗粒高剂量组能提高正常小鼠及胃肠动力障碍模型小鼠血清中MOT和GAS水平（P<0.05或P<0...