蝎毒重组蛋白对人肺腺癌A549细胞的抑制作用及其机制

目的 探讨蝎毒重组蛋白对人肺腺癌A549细胞的抑制作用及其抗肿瘤机制.方法 四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测蝎毒重组蛋白对人肺癌A549细胞增殖的抑制作用;荧光显微镜及流式细胞仪(FCM)技术观测蝎毒重组蛋白对肿瘤细胞内钙离子浓度([Ca2+]I)的影响,探讨[Ca2+]I变化时Ca2+的可能来源.结果 蝎毒重组蛋白对人肺癌A549细胞生长有明显抑制作用;荧光显微镜显示,蝎毒重组蛋白作用细胞48 h后细胞内钙离子荧光强度增强,提示[Ca2+]I升高;流式细胞仪显示蝎毒重组蛋白在不同情况下可显著增加肿瘤[Ca2+]I(P<0.05).结论 蝎毒重组蛋白对人肺腺癌A549细胞增殖具有显著抑制作用,可能与升高肿瘤[Ca2+]I继而诱导肿瘤细胞凋亡有关;其升高肿瘤[Ca2+]I是通过开放肿瘤细胞膜钙通道和肿瘤细胞内钙库释放两条途径实现.     

胰岛淀粉样多肽与5—羟色胺,多巴胺在大鼠和家兔背根神经节…

用免疫组织化学ＡＢＣ法，在大鼠和家兔背根神经节内观察到胰岛淀粉样多肽免疫阳性细胞，用相邻镜像邻片双得免疫反应技术，证实它分别与５－羟色胺和多巴胺在大鼠和家兔背根神经节细胞内共存，为胰岛淀粉样多肽的胰腺外研究提供新的资料，为进一步研究背根神经节细胞内生物活性物质间的关系提供形态学证据。     

人胎阑尾IAPP-、SS-及5-HT免疫反应性细胞的免疫组织化学研究

为了探讨胰岛淀粉样多肽，在胎阑尾中的个体发及其与其他生物活性物质的关系，用免疫组织ＰＡＰ法，对３６例１２－３８周人胎阑尾中ＩＡＰＰ免疫反应性细胞，生称抑素ＩＲ细胞５－羟色胺－ＩＲ细胞进行定位研究。结果表明，肥１２周，阑尾上皮中已可见到ＳＳ－ＩＲ细胞，而ＩＡＰＰ－及５－ＨＴ－ＩＲ细胞于１４周才见到。在整个胎期，阑尾中的ＩＡＰＰ－及ＳＳ－ＩＲ细胞始络分散存在，数量较少，而５－ＨＴ－ＩＲ细胞数量随胎龄增     

大鼠生后发育期间胃肠道IAPP免疫反应细胞的分布

用免疫组织化学ＰＡＰ法显示正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠生后发育期间胃肠道ＩＡＰＰ免疫反应细胞，观察其形态和分布。结果表明，ＩＡＰＰ－ＩＲ细胞随生后发育而发生变化。生后１ｄ，ＩＡＰＰ－ＩＲ细胞即可见于胃肠道各段。１８ｄ时在胃体部较多，４５ｄ及成年时小肠各段较多，ＩＡＰＰ－ＩＲ细胞位于上皮细胞间及固有膜结缔组织中。本实验结果提示，大鼠胃肠道各段ＩＡＰＰ－ＩＲ细胞在个体生后继续发生变化。本文对上述结果可能的生物     

人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白V3区对细胞结合能力的研究

目的：研究人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）不同亲嗜株包膜糖蛋白Ｖ３区结合于靶细胞的能力。方法：合成来源于不同嗜性ＨＩＶ－１Ｖ３区的生物素标记和非标记的多肽。采用流式细胞计数分析生物素化的 Ｖ３多肽对细胞的结合能力以及细胞表面的结合配体。结果：ＨＩＶ－１Ｘ４　亲嗜株ＩＩＩＢＶ３区能结合于多种细胞的表面，包括辅助受体ＣＸＣＲ４；竞争实验结果显示蛋白酶抑制剂能抑制该结合。Ｒ５亲嗜株 ＡＤＡ Ｖ３区只极微弱地结合于外周血单核细胞和表达ＣＣＲ５ 的人星形胶质细胞表面。结论：不同嗜性ＨＩＶ－１Ｖ３区结合于细胞表面的能力不同从亲嗜株Ｖ３区直接结合于细胞表面并被其自身所增强，其靶分子至少包括辅助受体 ＣＸＣＲ４和蛋白酶分子；而Ｒ５亲嗜株 ＡＤＡ Ｖ３区则不结合于 ＣＣＲ５和蛋白酶。     

IL-18基因修饰增强肿瘤抗原多肽致敏的树突状细胞体内诱导的抗肿瘤免疫反应

目的 :研究肿瘤抗原多肽致敏的白细胞介素 18(IL 18)基因修饰的树突状细胞体内诱导的抗肿瘤免疫反应。方法 :①以Lewis 3LL肺癌细胞特异性抗原肽mut1冲击致敏IL 18基因修饰的骨髓来源的树突状细胞 (DC IL 18 mut1) ,每次用其 1× 10 5 只皮下免疫小鼠 2次 ,然后测定脾细胞的NK活性及CTL杀伤活性 ;②以DC IL 18 mut1每次 2× 10 5 只皮下免疫 1次 ,然后再以 5× 10 53LL细胞攻击 ,在诱导及效应阶段分别以单抗阻断不同免疫成份 ,观察肿瘤的生长。结果 :以DC IL 18 mut1皮下免疫后可诱导出比DC mut1等免疫组更高水平的 3LL肺癌细胞特异性CTL ,并使NK活性明显增加 ;单抗体内阻断实验提示在DC IL 18 mut1免疫诱导阶段 ,CD4 + T细胞和抗原共刺激分子、IFN γ均起到重要作用 ,而效应阶段CD8+ T、IFN γ、NK起作用 ,而CD4 + T则是非必需的。结论 :DC IL 18 mut1皮下免疫后可诱导高水平的抗肿瘤免疫活性 ,其机理与抗原有效提呈、特异性CTL诱导、NK活性增加以及CD4 + 、CD8+ T、NK细胞、IFN γ参与密切相关。     

肺癌靶向多肽荧光分子探针的研制及其应用

目的:选择能与整合素α3受体结合的小分子多肽cNGQGEQc-L作为靶向载体，将羧基荧光素（FAM）与cNGQGEQc-L连接构建荧光分子探针，通过荧光成像探讨荧光多肽分子探针用于肺腺癌显像的可行性。方法:利用倒置荧光显微镜观察FAM-cNGQGEQc-L与肺腺癌A549细胞结合部位，流式细胞仪检测荧光多肽与A549细胞的竞争抑制实验，观察FAM-cNGQGEQc-L随浓度的增加与肺腺癌A549细胞结合能力的变化情况。通过小动物活体成像仪，观察荧光多肽在荷瘤裸鼠体内的生物分布特点。结果:倒置荧光显微镜显示荧光多肽cNGQGEQc-L能与A549细胞结合，结合部位在细胞膜和细胞质中。流式细胞仪测试结果证明荧光多肽与A549细胞的结合具有特异性和饱和性，当FAM-cNGQGEQc-L浓度为0.125 mmol/L时，荧光多肽与A549细胞的结合趋近饱和。荷瘤裸鼠活体成像显示移植瘤能够摄取荧光多肽，且荧光多肽通过泌尿系统和胆道系统排泄。结论:体外、体内荧光实验结果显示，荧光多肽分子探针FAM-cNGQGEQc-L可与肺腺癌A549细胞、肺癌移植瘤结合，能够特异性靶向肺腺癌。     

siRNA干扰跨膜转运蛋白21的表达对KO小鼠胚胎成纤维细胞γ分泌酶活性的影响

目的探讨跨膜转运蛋白21（TMP21）对γ分泌酶活性的影响。 方法将淀粉样前体蛋白基因缺陷型KO小鼠胚胎成纤维细胞[MEF（KO）]分为转染组（T）和对照组（C），转染组转染载有TMP21小分子干扰RNA（siRNA）的质粒，对照组转染空质粒。每组均制备包含细胞全膜蛋白的样品（T1、C1），经CHAPSO进一步溶解后超速离心制备所得纯化全膜蛋白样品（T2、C2），用γ分泌酶组分早老蛋白1（PS-1）特异性抗体免疫沉降C2或T2后获得的γ分泌酶样品（IPT2、IPC2）。蛋白质印迹法检测各类样品中γ分泌酶重要组分TMP21、PS-1和Nicastrin（NCT）蛋白表达量；应用ELISA法检测β淀粉样肽40和β＆#61472;淀粉样肽42的生成总量。 结果蛋白质印迹法检测显示，TMP21蛋白表达量在转染组样品IPT2中为（5294±247）ng/ml，在对照组样品IPC2中为（19110±579）ng/ml，组间差异有统计学意义（P〈0.05）；各类样品中PS-1与NCT蛋白表达量无明显变化；TMP21可与PS-1共沉降。ELISA法检测显示，转染组样品IPT2与饱和浓度底物C99反应生成的β淀粉样肽40和β淀粉样肽42总量为（348±18）pg/ml，对照组样品IPC2为与饱和浓度底物C99反应生成的β淀粉样肽40和β淀粉样肽42总量为（342±18）pg/ml，组间差异有统计学意义（P〈0.01）。 结论TMP21可能为γ分泌酶的组分之一。在TMP21蛋白低表达状态下γ分泌酶活性升高，提示TMP21为γ分泌酶的负调控因子之一。     

鹿茸多肽对胎大鼠脑神经干细胞体外诱导分化的实验研究

目的　探讨鹿茸多肽对胎大鼠脑神经干细胞体外分化的影响。　方法　从E12～ 14d的Wistar大鼠脑中分离扩增获得大量神经干细胞后 ,加入不同浓度的鹿茸多肽 ,观察其对胚胎神经干细胞分化的影响 ,并通过免疫组织化学染色检测神经干细胞分化为神经元和星形胶质细胞的状况。　结果　 5 0 μg L组分化细胞总数与对照组相比有显著性差异 (P <0 0 1) ;5 0 μg L、10 0 μg L、2 0 0 μg L组神经元特异烯醇化酶 (NSE)阳性率与对照组相比有显著性差异 (P <0 0 1) ,并呈一定的剂量依赖性。　结论　鹿茸多肽在体外可明显促进神经干细胞向神经元分化 ,为鹿茸多肽应用于神经系统损伤性疾病的治疗提供了实验依据。     

利用激光共聚焦显微镜研究MP多肽抑制粒细胞呼吸爆发造成的脂质过氧化作用

目的：研究MP多肽抑制呼吸爆发的作用机制。方法：培养人白细胞系THP1细胞，对照组细胞培养体系中仅给予内毒素(LPS，100ng／ml)刺激，治疗组在同样浓度的LPS刺激同时加入MP多肽(20μM)，采用乙酰乙酸盐2，7二氯氢化荧光素(D399)和碘化丙啶(PI)双标记，用D399及PI对两组细胞进行染色。激光共聚焦显微镜检测两组细胞D399在细胞内的脂质过氧化产物2，7二氯荧光素及PI的荧光强度。