白藜芦醇对大肠杆菌诱导的大鼠膀胱粘膜损伤保护作用机制的研究

目的 探讨白藜芦醇对大肠杆菌诱导的大鼠膀胱粘膜损伤的保护作用机制。 方法 将 45 只(170±10) g 雌性 SD 大鼠随机分为空白对照组、模型对照组和白藜芦醇实验组。 通过尿道向大鼠膀胱内植入导管并进行大肠杆 菌液灌注建立感染性膀胱粘膜损伤模型(模型对照组),白藜芦醇实验组按照 40 mg / kg 剂量灌胃给药,实验结束后 镜检观察大鼠膀胱内壁病理变化。 采用比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧 化氢酶(CAT)、一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量;采用 ELISA 法检测膀胱组织内细胞因子白介素-1β( IL-1β)、 IL-6、IL-8、IL-10 和肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量;采用 Western Blot 法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。 结果 白藜芦醇给药显著减少膀胱黏膜中炎性细胞数量,显著降低大鼠膀胱组织中 MDA、NO 含量,提高了 SOD、GSH -Px、CAT 活性;明显降低 IL -1β、IL-8、TNF-α,提高 IL-6、IL-10 含量;显著减少 TGF-β1 的蛋白表达。 结论 白藜 芦醇通过抗氧化、抗炎和降低纤维化作用改善大肠杆菌诱导的大鼠膀胱粘膜损伤,避免对膀胱组织伤害。     

三种LT突变体的幽门螺杆菌疫苗黏膜免疫佐剂效应比较

目的 探讨3种大肠杆菌不耐热肠毒素突变体在辅佐幽门螺杆菌候选疫苗尿素酶B亚单位(rUreB)中的佐剂效应.方法 各组Balb/c小鼠分别用PBS、rUreB、rUreB LTK63、rUreB LTR72、rUreB LTKR及rUreB CT进行4次口服免疫.ELISA检测胃、肠、气管冲洗液sIgA以及血清IgG亚类(IgG1,IgGa);RT-PCR差异显示T淋巴细胞IFN-γ、IL-4 mRNA;ELISPOT检测肠派伊尔氏结IgA、IgG抗体分泌细胞.结果 ①各rUREB加突变体佐剂组在胃、肠、气管的sIgA和血清IgG1、IgG2a水平显著高于PBS组和单独rUreB组(P＜0.01);②抗原刺激后取自各rUreB加突变体佐剂组T淋巴细胞表达的IFN-γ、IL-4 mRNA显著高于PBS组和rUreB组(P＜0.01);③各rUreB加突变体佐剂组小肠派伊尔氏结抗体分泌细胞数都显著高于PBS组和单独rUreB组(P＜0.01).结论 3种突变体都能辅佐rUreB在小鼠上产生特异的抗rUreB的抗体,且3种突变体诱导的免疫应答可能都是Th1/Th2型.LTR72的佐剂效应强于LTK63及LTKR.LTKR无毒,其稳定性高于LTR72,佐剂活性高于LTK63,是一个有希望的新型黏膜免疫佐剂.     

胰高血糖素衍生物在大肠杆菌的克隆表达和纯化

 目的 通过基因工程途径获得胰高血糖素衍生物。 方法 根据胰高血糖素基因及凝血酶酶切位点序列，分段合成引物行 PCR 扩增，以 PCR 扩增得到的胰高血糖素-甘氨酸基因序列和 pET-30a 质粒转化 E.coli DH5α，获得重组质粒 pET-G。将重组质粒 pET-G 转化至 E.coli BL21(DE3)，重组菌株命名为 E.coli BL21[pET-G]。以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，对表达产物进行SDS-Tricine- PAGE[十二烷基硫酸钠-三（羟甲基）甲基甘氨酸-聚丙烯酰胺凝胶电泳]分析和蛋白质印迹分析。对表达产物行Ni2+-NTA亲和层析纯化、凝血酶酶切和高效液相色谱（HPLC）纯化后，行 SDS-Tricine-PAGE分析和飞行质谱分析，并以 ELISA 方法检测其免疫活性。 结果 PCR 扩增获得的条带与预期的DNA表达片段大小一致，重组质粒 pET-G 测序结果与预期完全一致。SDS- Tricine-PAGE 和蛋白质印迹分析显示 E.coli BL21（DE3）的表达产物相对分子质量与预期相符。经亲和层析纯化、凝血酶酶切和 HPLC 纯化后得到了完整的重组胰高血糖素-甘氨酸衍生物，SDS-Tricine-PAGE 分析显示其相对分子质量约为 3500，飞行质谱分析相对分子质量为 3531，二者基本一致。ELISA 检测表明重组胰高血糖素-甘氨酸衍生物具有胰高血糖素免疫活性。 结论 采用基因工程技术在大肠杆菌中成功表达了胰高血糖素-甘氨酸衍生物，为通过体外酰胺化途径研制酰胺化胰高血糖素奠定了基础。     

我国腹泻病患者和家畜家禽粪便标本中携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌的调查

目的　了解携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌在我国腹泻病患者粪便标本、动物粪便标本及部分食品标本中的存在情况和所致腹泻病的临床特征。方法　使用菌落原位杂交、DNA打点杂交和PCR扩增等方法。结果　在各地送检的从腹泻病患者粪便标本中分离到的、用常规方法不能鉴定的大肠杆菌中 ,均检出带有小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌菌株 ,检出率为 2 7.0 5 % (436 / 16 12 )。从市售食品标本中分离的大肠杆菌中 ,携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌的检出率为 10 .2 3% (9/ 88)。从家畜家禽粪便中分离的大肠杆菌中 ,携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌检出率为 5 .71% (16 / 2 80 )。携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌所致腹泻的典型临床表现为食欲不振、腹痛、寒战乏力、正常体温或低热、每日腹泻多在 6次以上、多为粘液便。结论　携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌在我国分布广泛 ,检出率高于其他几类致泻性大肠杆菌 ,对我国人民的健康是一个潜在的威胁     

hEGF和hbFGF的C端(78-154aa)融合蛋白的表达、纯化及活性测定

目的:将人表皮生长因子(hEGF)与人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)的C端连接,构建出既可与肝素结合,又具有促进细胞生长活性的融合蛋白,并在大肠杆菌中高效表达。方法:将PCR扩增hEGF全基因与PCR扩增hbFGF5端的231bp的片段连接,克隆到表达载体pJN,构建出含融合基因的表达质粒pJRH。将pJRH转化BL21(DE3)表达菌株,获得融合蛋白的表达菌株pJRH(BL)。Westernblot检测表达产物免疫学活性。表达产物上肝素亲和柱和分子筛进行纯化。结果:融合蛋白表达产量为30%,融合蛋白不仅能与肝素结合,而且具有促细胞增殖的活性。Westernblot检测结果显示融合蛋白有EGF的免疫活性。融合蛋白的等电点为5.2。结论:本研究构建了一个hEGF和hbFGF的C端的融合蛋白,该蛋白基本保持了两者原有的生物活性。作为一个新的活性因子,本研究为探讨活性因子蛋白结构与功能的关系奠定基础。     

发病前细菌感染抑制过敏性哮喘发作的实验研究

目的： 研究发病前细菌感染对过敏性哮喘发病的影响。 方法： 用豚鼠作动物模型，观察金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌、肺炎双球菌等4种呼吸道常见细菌感染之后哮喘发作时肺泡灌洗液中的白细胞总数、酸性粒细胞总数和百分比以及肺部的病理变化。 结果： 各细菌感染组肺泡灌洗液(BALF)中的白细胞总数均明显低于对照组，金黄色葡萄球菌组和大肠杆菌组酸性粒细胞总数和百分比明显降低，病理结果表明各细菌感染组的病变程度都要明显轻于对照组。 结论： 部分细菌感染后能够抑制哮喘的发作。     

利用双顺反子系统在大肠杆菌中高表达bFGF

目的:由于人碱性成纤维细胞生长因子编码基因结构存在不利于原核表达的因素,构建了双顺反子的大肠杆菌表达系统,以期提高其表达量。方法:其中质粒表达载体pET-3c携带的T7噬菌体10基因N端氨基酸的编码序列为第一个顺反子,bFGF编码基因为第二个顺反子,二者同处于T7启动子的下游。结果:将重组子转导表达菌BL21(DE3),并经IPTG诱导表达,表达量达到菌体总蛋白的20%,并具有良好的活性。结论:证明双顺反子系统可以有效增加bFGF的表达量。     

2011年～2013年泌尿外科患者感染标本中大肠杆菌耐药性分析

目的:分析2011年~2013年泌尿外科患者感染标本中大肠杆菌耐药性分布情况,以指导临床合理使用抗生素。方法:收集泌尿外科住院治疗的患者243例,采集病房桌面、地面、用具及护士或医生的手、工作服等,同时采集患者谈液、尿液进行大肠杆菌的培养。对样本进行超广谱β-内酰胺酶检测和药敏试验。结果:2011年1月~2013年12月共采集4435份样本,大肠杆菌阳性率呈逐渐升高趋势(P<0.05)。大肠杆菌222检出率为5.0%;病房环境中污染最严重的是痰盂,其次是暖瓶塞和地面;患者痰液检出率高达9.1%;医护人员手未检出。在分离出的222株大肠杆菌中产超广谱β-内酰胺酶的菌株有90株,检出率为40.5%。产超广谱β-内酰胺酶的大肠杆菌对亚胺培南耐药性最低,其次为哌拉西林/三唑巴坦和阿米卡星。产超广谱β-内酰胺酶的大肠杆菌对多种抗生素的耐药性均明显高于非产超广谱β-内酰胺酶的大肠杆菌。结论:亚胺培南具有较高的抗菌活性,其疗效值得肯定,因此,可将其列为二线抗生素。对于一线药物的选择应根据细菌药敏试验结果和患者病情合理选用内酰胺类、氨基糖苷类等抗生素。     

千金子制霜前后提取物对大鼠肠道菌群的影响

目的研究千金子制霜前后提取物对正常大鼠肠道菌群的影响,为进一步阐明千金子制霜减毒机制提供参考。方法大鼠ig高、中、低剂量的千金子生品和霜品提取物,采用平板菌落计数法考察千金子制霜前后大鼠粪便中4类代表性肠道菌群双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠杆菌、肠球菌的数量变化。结果平板菌落计数实验结果表明,ig千金子生品与霜品提取物后大鼠出现菌群失调现象,且千金子霜品较生品引起的菌群紊乱程度低,在低剂量给药时可使条件致病菌肠球菌和大肠杆菌的数量减少。结论千金子制霜前后提取物均会影响肠道菌群的生物多样性,影响肠道菌群平衡,且千金子制霜后对4类肠道菌群的作用减弱,引起肠道菌群紊乱程度减小,这与千金子霜品泻下作用缓和的研究结果相一致,表明从肠道微生态角度考察千金子制霜前后对肠道菌群的干预作用,可揭示制霜与肠道菌群数量变化可能存在相关性。     

嗜冷克鲁依维尔氏菌与侵袭性大肠杆菌混合感染1例

2004年9月自1例急性腹泻患者的粪便中同时分离出嗜冷克鲁依维尔氏菌与侵袭性大肠杆菌，现报告如下：