氯霉素乙酰转移酶检测(CAT assay)

本文介绍一种快速方便的外源基因在哺乳动物细胞中瞬间表达检测系统,即氯霉索乙酰转移酶检测系统。该项检测技术不仅对基因的调控顺序(Cis-acting elements)如启动子、增强子等检测提供了有效的工具,而且为真核基因在哺乳动物细胞表达体系中,质粒的构建及筛选提供了行之有效的手段。并介绍了该技术的全过程及其操作要点。     

乙肝基因疫苗系列质粒的构建及其在真核细胞中的表达

目的 构建一系列乙肝病毒表面抗原大、中、小蛋白的真核细胞表达质粒,并研究其在真核细胞中的表达情况。方法 采用常规PCR法扩增S、前S2－S、前S1－前S2－S片断,利用重叠PCR法扩增出前S1－S片断后,分别插入Rc/CMV及pSG5UTPL/Flag载体质粒中,并在其ATG起始密码前加入KOZAK序列后转染SP2／0细胞,Western-Blot杂交检测所表达蛋白,并用核酸自动分析仪分析所插入片断的核酸序列。结果 插入片断的核苷酸序列与相应的大、中、小蛋白和前S1－S蛋白的编码基因一致,Western-Blot杂交检测出了相应的目的蛋白。结论 获得了8个能高效表达乙肝病毒表面抗原大、中、小蛋白和前S1－S蛋白的真核细胞表达质粒。     

从分子水平研究小儿细菌感染

小儿细菌感染很常见，但从分子水平研究小儿细菌感染的报告尚少，现将我们在这方面所做的工作报道如下。（一）质粒分析质粒（ｐｌａｓｍｉｄ）是染色体外的基因，与细菌致病性、耐药性等密切相关；耐药（Ｒ）质粒常含有多种耐药基因，它不但传给后代还可转移至无此质粒的...     

连续消毒中大肠杆菌O157:H7对碘伏抵抗力的变化及其与质粒pO157关系的研究

[目的]研究分析在连续消毒中大肠杆菌O157：H7对碘伏抵抗力变化及其与质粒pO157关系。[方法]用碘伏连续消毒6株大肠杆菌O157：H7 10代，对比消毒前后试验菌对该消毒剂的抵抗力、质粒图谱以及质粒酶切图谱，用SDS-高温法消除原始菌与连续消毒后试验菌的质粒。[结果]连续消毒10代后，试验菌对碘伏的抵抗力增加；试验菌的质粒图谱以及质粒pO157的Cal Ⅰ酶切图谱均无明显变化；消除原始菌的小质粒后，细菌对消毒剂的抵抗力不变，消除原始菌的大质粒和连续消毒后试验菌的质粒后，试验菌对碘伏的抵抗力增加。[结论]结果提示，连续消毒会使试验菌对碘伏的抵抗力增加，抵抗力增加的原因可能与质粒pO157无直接关系。     

RNA干扰及其技术的应用

RNA干扰(RNAi)是细胞内由双链RNA诱导降解与其配对的特定mRNA的过程。细胞内双链RNA在酶的作用下,形成20-25碱基大小的小干扰RNA(si RNAs),由si RNAs进一步掺入多组分核酸酶并使其激活,从而精确降解与si RNAs序列相同的mRNA,抑制该基因在细胞内的翻译表达。介绍了RNA干扰的分子机制、制备方法、以及RNA干扰技术在功能基因组学、微生物学、基因治疗和信号转导等研究领域里的应用。     

以减毒沙门菌将重组细胞因子导向免疫系统的新免疫疗法

作者用减毒沙门菌作为编码白细胞介素4(IL-4)和IL-18的原核表达质粒传递系统，并评估其在不同实验模型中调节免疫应答的能力。     

颜面部隐蔽小切口在颧骨复合体骨折内固定术中的应用

目的介绍经颜面部隐蔽小切口复位固定颧骨复合体骨折(ZCF)的方法与疗效。方法对32例ZCF骨折患者采用颜面部隐蔽小切口,即眶周小切口、上颌前庭沟切口、颞部发际前缘切口行颌骨骨折复位内固定术。结果31例伤口Ⅰ期愈合,颜面部无明显瘢痕,面部畸形与眼球功能完全恢复,张口受限明显改善。1例因面部复合伤咬肌与喙突纤维黏连,术后张口受限,二次手术后恢复正常。结论ZCF骨折经颜面部隐蔽小切口入路治疗创伤小、出血少,手术时间短,瘢痕隐蔽。