上海人群中TAP与IgA肾炎相关性的研究

目的探讨上海人群中抗原处理相关转运蛋白（ＴＡＰ）与ＩｇＡ肾炎的相关性。方法用ＰＣＲ－ＳＳＯ方法对上海地区８８名正常人及４０名ＩｇＡ肾炎患者ＴＡＰ进行分型。结果在病人组及对照组中共发现３种ＴＡＰ１（ＴＡＰ１Ａ、１Ｂ、１Ｃ）及４种ＴＡＰ２（ＴＡＰ２＊０１０１、＊０１０２、＊０２０１、＊０２０２）等位基因。未发现病人组与对照组之间ＴＡＰ等位基因分布的差异。结论本文结果未能证明ＴＡＰ基因与ＩｇＡ肾炎相关，但不排除未检测的多态位点与ＩｇＡ肾炎关联的可能性。     

前列腺癌组织中N-Myc、p53的表达及其临床意义

目的探讨N-Myc、p53在前列腺癌组织中的表达、两者的相关性及其临床意义。方法收集2015～2016年安徽医科大学第一附属医院行前列腺手术的前列腺癌患者63例及前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)患者50例,采用免疫组化MaxVision法检测病理组织中N-Myc、p53的表达。结果 N-Myc、p53在前列腺癌组织中的表达均升高(P 0. 05),前列腺癌组织中N-Myc、p53中表达与有无骨转移和TNM分期具有相关性(P 0. 05),与患者年龄、术前PSA水平等因素无关(P0. 05)。另外,p53表达与Gleason评分亦相关。结论 N-Myc和p53在前列腺癌中呈高表达,可能共同参与前列腺癌的恶性进展和转移,有望成为检测前列腺癌转移的新靶点。     

强直性脊柱炎患者MICA基因第2、3和4外显子的多态性及其与HLA-B抗原的连锁不平衡

目的探讨皖籍汉族人群MICA基因（major histocompatibility complex class Ⅰchain-related gene A，MICA）第2、3、4外显子的多态性，及其与HLA-B抗原的连锁不平衡在强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）发病中的作用。方法采用聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针杂交（polymerase chain reactionsequence-specific oligonucleotide probing，PCR-SS0）技术对56例AS患者和112名正常对照人群进行MICA基因第2、3、4外显子的多态性和HLA-B抗原的检测。结果AS患者和正常对照人群的MICA等位基因分布均以MICA＊008占优势，频率分别为32．14％和30．36％。两组人群MICA＊007等位基因的分布差异有统计学意义（X^2=10．18，P〈0．05，RR=2．50）。单倍型分析显示，AS患者和正常对照人群的MICA等位基因均显示出与多个HLA-B位点的连锁不平衡现象，两组间差异有统计学意义的单倍型为MICA＊007-B27（X^2=18．46，P〈0．05，RR=7．47）。分层分析结果显示，HLA-B27阳性与AS的相关性有统计学意义（P〈0．05），但MICA＊007基因与AS的相关性无统计学意义（P〉0．05）。结论AS患者中MICA＊007等位基因频率的显著升高可能源于MICA基因与HLA-B位点间的广泛连锁不平衡。     

抗体包被对红细胞变形性影响的研究

作者对抗体包被的红为性进行研究，发现抗体包被改变了红细胞的变形性，在我们研究的抗体量范围内，抗体量越多，红细胞的变形性越小，作者从血液流变学的角度对上述结果作了讨论，并提出了通过测定其对红细胞变形性的影响来比较准确地标定抗体效价的可能性。     

莱姆病螺旋体60kD抗原的基因克隆及表达

利用质粒ｐＡＴ１５３为载体，构建了莱姆螺旋体全细胞ＤＮＡ基因文库，用菌落原位固相酶斑法从文库中初选出一株表达６０ｋＤ抗原的克隆子，命名为ｐＬＷ２２７。经免疫印迹分析、核酸杂交、连续亚克隆分析，证明此重组菌株表达了莱姆螺旋体６０ｋＤ抗原，编码该抗原的基因表达单位为２．２ｋｂ或更小，位于莱姆螺旋体的染色体上。该抗原的表达为进一步研究莱姆病的致病机理打下了基础。     

RAI16蛋白合成肽多克隆抗体的制备及初步应用

目的: 制备RAI16蛋白的合成肽多克隆抗体, 并进行初步鉴定和应用, 为研究RAI16蛋白的功能及作用机制获得重要的实验工具.方法: 应用Fmoc法化学合成RAI16蛋白N端第44～55位氨基酸的多肽, 经C18的RP-HPLC纯化后, 通过高碘酸钠法将纯化的RAI16蛋白的多肽与KLH交联; 皮下注射抗原免疫新西兰纯种大耳白兔, 加强免疫得到抗血清, 应用蛋白G纯化获得多克隆抗体.对纯化的抗体进行ELISA、免疫组化、 Western blot等初步鉴定和应用.结果: 化学合成RAI16蛋白N端第44～55位氨基酸的多肽, 纯化后多肽纯度为96% , 达到免疫用抗原标准.多肽与KLH交联, 用于免疫动物.经纯化后的抗体效价为1∶ 125 000.该多肽抗体可特异识别人脾脏组织中相对分子质量(Mr)约为55 000的RAI16蛋白.结论: 所制备的多克隆抗体能与天然RAI16蛋白发生特异性反应, 可应用于ELISA、免疫组化、免疫沉淀和Western blot等实验, 为确定RAI16蛋白的组织分布和亚细胞定位、研究RAI16蛋白的功能及作用机制提供了重要的实验工具.     

氨甲酰磷酸合成酶单克隆抗体的制备、鉴定及应用

目的:制备抗人氨甲酰磷酸合成酶(CPSI)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定与应用.方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备 mAb,并通过间接ELISA法、Western blot、免疫组化及免疫荧光染色的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAP XR表达文库筛选鉴定抗原,借助免疫捕获的方法用抗体来分离复合物.结果:获得3株可稳定分泌抗人CPSI mAb的杂交瘤细胞系.mAb的Ig亚类(型)为IgGl(K),该mAb可用于ELISA检测、Western blot、免疫组化、免疫荧光染色、免疫沉淀实验和复合物的分离.结论:成功制备了抗人CPSI的mAb,为CPSI的研究提供了有力的工具.     

正丁醇提取的低分子量宫颈癌细胞表面抗原

本实验采用正丁醇提取方法以研究甲基胆蒽诱发的小鼠宫颈癌(U_(14))细胞表面抗原。用2.5%正丁醇溶液对U_(14)细胞进行提取所获得的正丁醇粗提物(CBE),经Lowry法测得其蛋白含量为147微克/毫升;在SDS-PAGE中显出8条区带,分子量为18-70kD;用ELISA检测表明CBE与抗宫颈癌单克隆抗体(AU_(14-1))和多克隆抗体均呈阳性反应。结果证明CBE系低分子量的宫颈癌细胞表面抗原,其中含有能够与AU_(14-1)发生免疫反应的肿瘤抗原决定簇。     

HLA-DRB1*07与慢性乙肝患者Th1/Th2因子表达水平的相关性

目的 :探讨广东地区汉族慢性乙型肝炎患者HLA DRB1 0 7与Th1 Th2因子表达水平的相关性。方法 :收集 12 0例广东地区汉族慢性乙肝患者新鲜抗凝血各 8ml,通过序列特异性引物套式PCR(PCR SSP)方法进行HLA DRB1 0 7检测 ,并同时用双抗体夹心法检测患者治疗前后外周血CD4 +T细胞分泌IFN γ、IL 2、IL 10和IL 4的水平。结果 :12 0例慢性乙肝患者HLA DRB1 0 7携带者 31例 ,携带率为 2 5 8% ,明显高于广东地区汉族人群的平均携带率 7 84 % ;HLA DRB1 0 7阳性患者IFN γ平均表达水平为 (1132 0 4± 75 36 )pg ml,IL 2平均表达水平为 (1184 0 6± 81 4 2 )pg ml,IL 4平均表达水平为 (876 79± 4 7 5 3)pg ml,IL 10平均表达水平为 (817 4 8± 2 4 4 0 )pg ml ;HLA DRB1 0 7阴性患者IFN γ平均表达水平为 (12 32 10± 198 13)pg ml,IL 2平均表达水平为 (12 0 8 17± 116 12 )pg ml,IL 4平均表达水平为 (6 81 99± 6 1 5 9)pg ml,IL 10平均表达水平为 (6 38 84± 76 17)pg ml。HLA DRB1 0 7阳性患者IL 4、IL 10表达水平高于阴性患者 (P <0 0 5 ) ,而IFN γ、IL 2表达水平与阴性患者差异无统计学意义 (P >0 0 5 )。结论 :HLA DRB1 0 7(+)慢性乙肝患者Th2因子表达水平高于HLA DRB1 0 7(- )慢性乙肝患者。     

HBeAg时间分辨荧光免疫分析法的建立

采用平衡饱和法建立了乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)时间分辨荧光免疫分析法.以针对HBeAg的单克隆抗体G8包被板,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3+及标记C4单抗,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液.数据采用Log-Logit法函数和四参数Logitc函数数据处理程序处理.结果表明方法的批内和批间CV分别为2.39%和5.28%,平均回收率为97.62%,灵敏度为0.58NCU/mL,可测范围为12.01-529.84NCU/mL,ED20、ED50和ED80分别为6.36NCU/mL、26.85NCU/mL和136.7NCU/mL.本方法与HBsAg有13.1%的交叉反应.Eu3+标记抗体-30℃保存6个月免疫反应性基本无损失,同批试剂连续5个月应用分析结果稳定.HBeAg时间分辨荧光免疫分析的质量参数优于EIA和IRMA.