PCR-RSSO基础上HLA-Ⅰ、Ⅱ基因分型的研究

目的通过对PCR-DNA技术的分析,探讨人类白细胞抗原(HLA)基因分型方法。方法采用PCR反向序列特异性寡核苷酸(polymerase chain reaction-reverse sequence specific oligonucleotide,PCR-RSSO)杂交技术,建立改良半量扩增体系全自动HLA-I、Ⅱ等位基因分型方法,进行了635份血液标本HLA-A、B、C、DR、DQ等位基因分型,其中166份DNA同时采用序列特异性引物技术(PCR-SSP)和手工全量扩增体系PCR-RSSO技术。对全自动半量PCR-RSSO、PCR-SSP、手工PCR-RSSO 3种方法做两两比较。结果全自动半量PCR-RSSO的分型成功率为98.4%(3 124/3 175),PCR-SSP为98.8%(656/664),手工PCR-RSSO为88.3%(733/830)。经χ2检验,全自动半量PCR-RSSO与PCR-SSP的分型成功率无统计学差异,与手工PCR-RSSO有显著差异(P<0.05)。结论PCR-RSSO可识别HLA-Ⅰ,Ⅱ共706个等位基因,覆盖WHO命名委员会2000年公布的936个等位基因的75.43%;对706个HLA等位基因的分型均为中~高分辨率,有分辨纯合子等位基因的能力;易长期保存书面的实验原始资料,即杂交条;具有成本低、劳动强度低、省时和DNA消耗量少等优点。PCR-RSSO适合于造血干细胞移植和建立造血干细胞及脐带血干细胞库的组织配型。     

CD14+单核细胞人类白细胞抗原DR表达率与脓毒症关系的研究

目的了解烧伤延迟复苏时CDl4^＋单核细胞人类白细胞抗原DR（HLA—DR）表达率的变化，分析其与脓毒症的关系。方法选择烧伤面积大于30％TBSA的25例烧伤延迟复苏患者，于伤后1、3、7、14、28d取外周血，其中7例患者住院期间并发脓毒症，于脓毒症发生后连续2d亦取其外周血。另取20例健康体检者外周血作为对照。流式细胞仪检测CD14^＋单核细胞HLA．DR表达率，酶联免疫吸附测定法检测血浆中肿瘤坏死因子α（TNF—α）、白细胞介素10（IL-10）的浓度。结果非脓毒症患者伤后1、3、7、14、28dCD14^＋单核细胞HLA—DR表达率分别为（15±6）％、（74±5）％、（264±17）％、（284-16）％、（474-16）％，明显低于健康体检者[（924±10）％，P〈0．01]；脓毒症患者发生脓毒症后1、2d，该指标亦明显低于健康体检者及非脓毒症患者伤后1、7、14、28d（P〈0．01）。脓毒症患者TNF—d检出率及TNF—α、IL-10浓度，均高于非脓毒症患者和健康体检者（P〈0．05或P〈0．01）。伤后1、7、28d，外周血CD14^＋单核细胞HLA—DR表达率与IL—10浓度呈显著负相关（r分别为-0．9963、-0．7459、-0．8474，P〈0．01）。结论烧伤延迟复苏患者免疫功能低下，促炎性介质释放量增加，并发脓毒症时则更为严重。外周血CD14^＋单核细胞HLA—DR表达率可作为动态检测患者免疫功能状态的有效指标。     

骨质疏松性骨折骨痂软骨细胞增殖和IGF-Ⅰ表达的实验研究

目的:通过去势大鼠骨质疏松骨折模型,研究骨质疏松骨痂软骨细胞的增殖及IGF-Ⅰ的表达情况.方法:建立去势大鼠骨质疏松及骨折模型,在术后10～40d内取材,行IGF-Ⅰ和PCNA免疫组化染色,观察骨质疏松骨折骨痂内软骨细胞的增殖及IGF-Ⅰ的表达情况.结果:骨质疏松性骨痂组织中IGF-Ⅰ早期上调表达,可以促进骨膜生发层细胞和骨折断端间充质细胞增殖、分化;IGF-Ⅰ在骨折后期一部分成熟软骨细胞中表达,可能延缓了软骨细胞向终末分化,在维持软骨细胞表型过程中发挥一定的作用.结论:IGF-Ⅰ在骨质疏松性骨折愈合过程中可能发挥着重要的调节作用.     

前列腺癌存活素基因表达与其临床病理特点、增殖活性及细胞凋亡的关系

为了解存活素 (survivin)在前列腺癌中的临床意义 ,作者检测了前列腺癌中存活素mRNA的表达水平 ,并对其与前列腺癌临床病理特点、增殖活性及细胞凋亡等因素的相关性进行分析。前列腺癌及对照组织标本来自1998年 7月至 2 0 0 2年 12月间行根治性前列腺切除的 15 0例患者。经病理证实并提取RNA的 16 2例标本中 ,前列腺癌82例 ,正常前列腺 80例。以G3PDH基因作对照 ,对前列腺组织存活素基因行PCR扩增。对 5 0例患者的PSA水平采用线性回归分析 ,计算术前PSA倍增时间 (PSA DT)。增殖细胞核抗原的免疫组化染色情况作为增殖活性的指标 ,…     

永生化肝细胞研究的现状及其进展

细胞永生化（immortalization）是指体外培养的细胞经过自发的或外界因素的影响从增殖危机中逃逸，从而具有无限增殖能力的过程。近年来，生物人工肝（biological artificial liver，BAL）已成为治疗暴发性和急性肝功能衰竭及支持肝移植过渡期的重要手段。肝细胞作为主要成分需要量占成人肝脏的10％～15％。理想的细胞材料应具有正常的表型，成熟肝细胞的代谢解毒合成功能，且易于快速高密度培养。     

游离与总前列腺特异性抗原及其比值的临床应用

目的探讨血清中游离前列腺特异抗原(fPSA)、总前列腺特异抗原(tPSA)及其比值对前列腺癌(Pca)的诊断价值。方法采用美国BECKMANCOUNTER全自动微粒子化学发光免疫分析仪定量测定经临床确认的Pca、前列腺增生(BPH)、正常人血清中的fPSAt、PSA并计算其比值。结果Pca、BPH患者PSA水平与正常人比较有非常显著性差异(P均<0.01);Pca患者PSA水平与BPH患者比较无显著性差异(P>0.05),而fPSA 2组比较有显著性差异(P<0.01)。结论fPSA与tPSA联合检测并计算比值可提高Pca的检出率。     

对IMMULITE Ⅰ型化学发光酶免疫技术中检测原理及相关内容的初评

美国德普(DPC)公司开发成功的IMMULITE Ⅰ型酶放大化学发光自动化分析仪及其配套的各项检测试剂盒是在IMMULITE系统条件下发展完善的.它以聚苯乙烯塑料珠为固相载体, 碱性磷酸酶(APase)标记抗体(或抗原),并作用于发光底物AMPPD[3-(2'-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3″磷酰氧基)苯基-1,2二氧乙烷].该仪器可完成单项、联合多项, 甚至十几项的常规项目物质浓度测定.每项检测原理及其反应模式不同.根据待测抗原的性质, 分子量大小, 各项试剂盒性能要求, 具体为每项检测内容设计了更为合理完美,结果准确的检测原理及其反应模式.信号数据处理也由自动化分析仪上电脑预先编制的软件完成, 备有多种标准曲线拟合方程, 以供不同免疫反应模式选择, 满足每项检测项目.本文在实践中了解和观察到32项常规项目的检测原理及相关内容, 用表格形式分析与初评如下.     

牵张力对体外培养兔鼻软骨细胞影响的实验研究

目的：探讨牵张力对体外培养的不同年龄兔鼻软骨细胞增殖活性的影响及牵张力大小与兔鼻软骨细胞增殖活性改变的量效关系。方法：将第4代体外培养的新生及6周龄新西兰白兔兔鼻软骨细胞置于细胞膜式牵张力施加装置上培养，流式细胞仪检测不同的牵张力(5kPa、10kPa)在0-12h内对兔鼻软骨细胞增殖活性的影响。结果：0-10h内5kPa牵张力组软骨细胞增殖指数随着牵张力作用时间的延长不断上升，增殖指数峰值位于10h处；0～8h内10kPa牵张力组软骨细胞增殖指数随着牵张力作用时间的延长不断上升，增殖指数峰值位于8h处；5kPa较10kPa牵张力对体外培养兔鼻软骨细胞具有更大的促增殖作用；牵张力对体外培养的新生兔兔鼻软骨细胞具有更大的促增殖作用。结论：牵张力可促进体外培养的新生及六周龄新西兰白兔兔鼻软骨细胞增殖活性。提示我们鼻软骨牵张方法不仅适用于临床矫治新生儿唇腭裂伴发鼻畸形，而且有可能用于矫治1岁左右婴儿甚至更大年龄患儿的唇腭裂伴发鼻畸形。     

Effect of nuclear factor-κB p65 ASOND on I typ collagen expression and rat hepatic stellate cells proliferation

Objective Sstudy effect of nuclear factor-κB ASOND on I type collagen expression and rat hepatic stellate cells(HSC)proliferation.Methods Rat HSCs were separated by affusing and digestingof Ⅳ type collagenenzyme and density acentric method.Lipid-mediated NF-κB p65 ASOND(0.001,0.01,0.1,1μmol/L)Was transferred into rat HSCs.Toxicity of HSCs caused by NF-κB p65 ASOND and activity of LDH were determined by trypan blue staining.Proliferation affection of transferring NF-κB p65 ASOND into HSCs was determined by MTT.In different concentration NF-κB p65 ASOND.expression of Ⅰ type collagen stimulated by 1mg/L TNF-αwas determined by RT-PCR and ELISA.Results After transfection of NF-κB p65 ASODN,expression of NF-κB protein in HSCs was decreasing.Toxicity experiment indicated that NF-κB p65 ASOND of different concentration(0.001,0.01,0.1 and 1.0 μmol/L)had no effect on HSCs livability and LDH activity(P<0.05).Four different concentration NF-κ B p65 ASOND could restrain HSCs proliferation stimulated by 1 mg/L TNF-α.The expression of I type collagen and mRNA stimulated by 1mg/LTNF-αwas increased,and had a positive correlation with concentration(P>0.05).Conclusion NF-κB p65 ASOND may depress NF-κB activity to restrain HSCs proliferation and Ⅰ type collagen expression,and reduce extracellular matrix.