利用实验设计优化和建立抗CD38单克隆抗体ADCP生物学活性测定方法

利用实验设计(design of experiment,DoE)方法建立抗CD38单抗(monoclonal antibody,mAb)的抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis,ADCP)生物学活性检测方法。以Jurkat/NFAT/CD32a-FcεRIγ转基因细胞系作为效应细胞,Daudi细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(BrightGlo^TMLucifer‐ase Assay system)检测抗CD38单抗的ADCP生物学活性,并运用DoE方法进行实验参数优化。结果显示,抗CD38单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)~B]+D,方法经统计学实验设计对多个实验参数进行筛选和优化,确定抗体工作浓度为800～20.81 ng·mL^-1,靶细胞和效应细胞的接种量分别为每孔7.5×10~4和2.5×10~4个,诱导时间为6 h。该方法具有良好的专属性;5个不同组回收率样本经3次检测,相对效价分别为(59.97±4.74)%...     

新生儿中性粒细胞胞外诱捕网形成研究进展

中性粒细胞是人体先天免疫系统的重要效应细胞。目前已知,中性粒细胞通过细胞吞噬作用(phagocytosis)与胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)介导的杀灭途径参与病原体感染的免疫应答反应。中性粒细胞的免疫功能对于新生儿,尤其对于早产新生儿特别重要。新生儿中性粒细胞功能低下或障碍与新生儿感染性疾     

自噬在熊果酸诱导的人脐静脉内皮细胞损伤中的作用

目的: 研究自噬在熊果酸诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤中的作用。方法: 体外培养HUVECs,运用不同浓度的熊果酸处理36 h,采用MTT法检测HUVECs增殖率的变化;透射电镜观察细胞超微结构的改变;单丹磺酰尸胺(MDC)荧光染色观察熊果酸对HUVECs自噬表达水平的影响;Western blotting检测微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3, LC3)及自噬相关蛋白Beclin-1的变化;RT-PCR检测LC3及Beclin-1 mRNA的变化;流式细胞术检测自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3-MA)抑制自噬前后经熊果酸处理的HUVECs凋亡率的变化。结果: 熊果酸抑制HUVECs增殖并呈剂量依赖性;熊果酸可诱导HUVECs产生自噬:透射电镜和MDC染色均显示HUVECs经熊果酸处理后自噬囊泡明显增加且自噬在基因及蛋白水平的表达均增加;3-MA与熊果酸联合作用于HUVECs时抑制了熊果酸诱导的HUVECs自噬空泡的积聚并且可明显促进HUVECs凋亡。结论: 熊果酸抑制HUVECs增殖,并诱导其发生自噬,自噬在此过程中对HUVECs起保护作用。自噬抑制剂3-MA能够增强熊果酸诱导的HUVECs的增殖抑制作用并且促进HUVECs发生凋亡。     

Rabex-5及其激活物Rab5的研究进展

细胞的吞噬作用是细胞维持正常生理功能的关键,小分子GTP激酶在其中扮演了至关重要的角色。在Ras超家族中,已证实有超过50种小分子GTP激酶,其中Rab家族在调控细胞吞噬和囊泡运输中的作用,近年备受关注。     

双歧杆菌脂磷壁酸对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬和NO释放的影响

目的 探讨双歧杆菌脂磷壁酸(LTA)对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬功能和NO释放的影响.方法 将无菌收集培养的小鼠腹腔巨噬细胞分为RPMI 1640完全培养液组和地塞米松处理组(终浓度为100"g/m1),分别向每组培养孔内加入不同终质量浓度的LTA,于培养4 h和24 h后,分别用中性红法和Griess Reagent试剂盒检测并分析LTA对巨噬细胞体外吞噬和NO释放的影响.结果 终浓度为5、10、20、40 ptg/ml的LTA对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬功能和NO的释放均有明显的促进作用(P<0.05),并且可以有效拮抗地塞米松的抑制效应(P<0.05).LTA的上述作用与其浓度呈一定的梯度关系.结论 LTA不但可以显著激活小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬功能和促进NO的释放,还能有效拮抗地塞米松对巨噬细胞的体外抑制作用.