某三甲医院重点科室耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药性及同源性分析

目的了解某三甲医院重点科室耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)的耐药性及同源性。方法回顾性研究2020年1—12月内蒙古自治区人民医院重点科室患者标本及环境标本中分离到的46株CRAB,对菌株进行耐药性分析及脉冲凝胶电泳(PFGE)分型。结果CRAB主要来自痰标本,科室以ICU检出最多;46株CRAB对常见抗菌药物呈高度耐药,仅对左氧氟沙星、复方新诺明、妥布霉素和庆大霉素耐药率稍低,耐药率在80%~90%;PFGE结果显示46株CRAB共分为A—J 10个聚类,其中F聚类是主要的流行型别(17株),其次为G聚类(6株)、B聚类(5株)、H聚类(5株)和E聚类(4株),其余聚类仅含1~3株。结论该院存在科室与科室间、患者与环境间CRAB的交叉传播,应加强院内环境和医疗仪器表面消毒,强化医务人员手卫生意识,防止院内感染的暴发。     

2株间日疟原虫18SrDNA的克隆及其同源性分析

目的克隆间日疟原虫河南分离株与湖北分离株红内期18SrDNA,并进行同源性分析。方法采用PCR方法从间日疟患者血样DNA中扩增间日疟原虫18SrDNA,纯化后与pGEM．Teasy质粒连接,转化大肠埃希氏菌JMl09;阳性克隆质粒经双酶切鉴定后,进行序列测定,采用BLAST和MEGA4生物软件分析同源性。结果间日疟原虫18SrDNA扩增片段大小为998bp：阳性克隆重组质粒经双酶切鉴定,与预期结果相符;序列测定结果显示,河南、湖北2分离株间日疟原虫18SrDNA序列完全相同．与GenBank中报道的12株间日疟原虫相同序列进行比对,其同源性均大于99％：用邻位连接法（neigh—bor-joining,NJ）和非加权组平均法（UPGMA）2种方法构建系统发生树发现,河南分离株、湖北分离株与间日疟原虫X13926．1株遗传距离小．同属一个分支。结论克隆了间日疟原虫河南与湖北分离株红内期18SrDNA,该基因序列在不同地理株间遗传稳定。     

赖型钩端螺旋体基因库的构建及致病性钩端螺旋体DNA同源序列的克隆

作者应用质粒载体pUC9构建了肺弥漫性出血型构端螺旋体(钩体)病的主要病原——赖型钩体的基因库,并从中筛选出与致病钩体DNA同源的重组质粒pCX7和pCX9。重组质粒pCX9可识别致病钩体017株DNA1.7kb片段、601株9.0kb片段及610株30.0kb片段,而不与非致病的双曲钩体Patoc I株和illini细螺旋体DNA杂交。本研究结果进一步表明:致病钩体与非致病钩体DNA的同源性很低;致病钩体间DNA同源性较高。     

人和猪软骨细胞aggrecan球间区域基因的克隆和同源性分析

目的 分析人和猪软骨细胞aggrecan球间区域(interglobular domain,IGD)蛋白酶水解位点的同源性，在分子水平探讨猪软骨细胞作为组织工程化软骨研究模型的意义。方法 通过RT-PCR扩增人和猪软骨细胞aggrecan IGD片段，将纯化的RT-PCR产物克隆人T-载体，通过测序、软件分析及Northern杂交，比较二基因和氨基酸序列的同源性。结果 人和猪aggrecan IGD cDNA有84％的同源性。经PSI-BLAST(Position Specific Iterated BLAST)分析，相关的氨基酸序列的同源性也达到84％，表明其在进化过程中高度保守。Northem杂交可见，人和猪的aggrecan IGD探针对猪总RNA均有明显的分子量大小相同的放射自显影条带。结论 猪软骨细胞可以作为组织工程化软骨研究的模型，对软骨细胞老化和体内构建软骨的降解等过程中蛋白酶参与的aggrecan水解反应进行深入的探讨，为完善组织工程化软骨的构建提供分子水平的依据。     

人脑胶质瘤差异表达的基因韵获得及一条全长新基因的克隆

目的 运用基因芯片技术获取正常成人脑组织与人脑胶质瘤中差异表达的基因，并对其中一条基因进行了初步的研究。方法 抽提正常成人脑组织与人脑胶质瘤组织中的mRNA来制备探针，经杂交、洗涤后，通过计算机观察两者表达谱的差异情况，对681F05克隆子进行了Nozxhem blot，5’RACE和生物信息学分析。结果通过4次基因芯片筛选，获得15条与胶质瘤相关的新基因，经Northem blot证实681F05基因在人正常脑组织中低表达，而在人脑胶质瘤中高表达。BLASTn和BLASTx分析显示，它们编码蛋白与线虫Cyp-10蛋白同源性分别为52％和72％。cDNA序列分析发现这两上克隆是同一个基因[命名为cyclophilin-like gene(PPIL-3)]的两个不同的剪切体(PPIL3a和PPIL3b)。结论 基因芯片筛选正常脑组织与人脑胶质瘤差异表达的基因具有样品用量少，高质量，高速度。高敏感等特性。681F05基因可能是与人脑胶质瘤形成有关的一条全长新基因。     

问号钩端螺旋体属lipL32/1-ompL1/1融合基因的真核表达及其表达产物的免疫反应性

目的:构建问号钩端螺旋体(简称钩体)的融合基因lipL32/1-ompL1/1真核表达系统并鉴定表达产物的免疫反应性.方法:采用连接引物PCR构建融合基因lipL32/1-ompL1/1,克隆测序后构建lipL32/1-ompL1/1的毕赤酵母真核表达系统pPIC9K-lipL32/1-ompL1/1-P.pastorisGS115.用MM和MD平板分离His Mut 型菌落,YPD平板筛选出G418高抗性的His Mut 转化子.以酵母裂解酶处理的高拷贝转化子His Mut 克隆裂解产物为模板,5'AOX1和3'AOX1为引物,用PCR检测所构建的毕赤酵母工程菌株染色体DNA中的目的融合基因.在BMMY培养基中用甲醇诱导目的重组蛋白rLipL32/1-rOmpL1/1表达.采用硫酸铵沉淀,Ni-NTA亲和层析提纯培养物上清液中的rLipL32/1-rOmpL1/1.采用SDS-PAGE和Western blot分别检测rLipL32/1-rOmpL1/1的产量及其免疫反应性.结果:获得的lipL32/1-ompL1/1融合基因约为1 794 bp.其核苷酸和氨基酸序列与原始lipL32/1和ompL1/1基因型比较,相似性分别高达99.94%和100%.所构建的真核表达系统可分泌rLipL32/1-rOmpL1/1,SDS-PAGE后位于预期位置处,产量约占上清总蛋白的40%.rLipL32/1和rOmpL1/1兔抗血清均能与表达的rLipL32/1-rOmpL1/1结合.结论:本研究成功地构建了钩体lipL32/1-ompL1/1融合基因高效毕赤酵母真核表达系统,所表达的融合蛋白具有特异的免疫反应性,可作为研制钩体新疫苗的候选抗原.     

应用分子杂交对钩端螺旋体DNA同源性的研究

作者以~(32)P标记的黄疸出血群赖型017株钩体DNA为探针,分别与2个属5个血清群的6株钩体DNA进行分子杂交。结果表明,黄疸出血群赖型017株与同群、型的56601株同源性较高,与秋季群(56606株)、七日热群(56610株)次之,与双曲钩体patoc型Patoc Ⅰ株、细螺旋体属illini细螺旋体同源性很低;~(32)P标记的钩体DNA探针能检测四川地区流行的致病性钩体。     

致倦库蚊溴氰菊酯抗性株细胞色素P450基因的克隆,鉴定及同 …

根据果蝇的ＣＹＰ４Ｄ１保守区氨基酸序列，设计了１对简并引物，从致倦库蚊溴氰菊酯抗性株的基因组ＤＮＡ中，扩增出１条特异性ＤＮＡ片段，其大小与设计的细胞色素Ｐ４５０基因片段相符。将这个片段与ｐＵＣ１９质粒重组，并克隆到ＤＨ５α大肠杆菌中，经筛选后测序，得到１条长４５６的核酸序列。将推导的氨基酸序列进行同源性分析，表明该序列与ＣＹＰ４家族成员同源性较高，提示该序列属于ＣＹＰ４家族；该序列与ＣＹＰ４Ｊ亚家     

鲍曼不动杆菌30株基因同源性分析

鲍曼不动杆菌广泛存在于人体皮肤、呼吸道和泌尿生殖道,是引起医院内感染的常见机会致病菌。目前世界上已有多个国家和地区报道多重耐药鲍曼不动杆菌医院感染爆发流行,给临床治疗带来极大困难。为了解河北省临床分离的鲍曼不动杆菌的耐药情况,我们对2004年12月至2008年8月从河北省3家医院分离的30株鲍曼不动杆菌的耐药谱进行了测定,并检测其耐药基因携带情况,采用ERIC—PCR方法对不同医院的分离株进行基因同源性分析,为及时控制多重耐药菌株的进一步传播提供实验依据。     

发热伴血小板减少综合征临床误诊3例患者的病原及免疫学检测与鉴定

目的探讨发热伴血小板减少综合征易被误诊的原因。方法采用间接免疫荧光法检测患者急性期与恢复期血清中新布尼亚病毒IgG抗体,荧光RT-PCR检测新布尼亚病毒RNA及S、M、L3个特异性基因鉴定,新布尼亚病毒核酸测序及比对分析。结果2例误诊患者的血清中IgG抗体效价恢复期较急性期增高4倍以上,3例患者的急性期血清中均能检测到新布尼亚病毒核酸及3个特异性基因,S基因序列比对均为新布尼亚病毒,重症患者与轻症患者的基因序列有一定的差异。结论通过病毒特异性基因鉴定、序列比对分析以及双份血清新布尼亚病毒IgG抗体效价检测,3例临床误诊的患者均为由新布尼亚病毒感染引起的发热伴血小板减少综合征。