3种检测方法在携带鼠疫噬菌体现场样本中的联合应用

2008年6月青海省地方病预防控制所鼠疫菌专业实验室收到青海省天峻县疾病预防控制中心送交的6份疑似鼠疫样本。为及时判定疫情,同时用胶体金免疫层析法（RGICA）、鼠疫反向间接血凝试验（RIHA）和细菌分离培养法平行检测6株疑似鼠疫样本,结果均为阳性。在细菌分离培养过程中发现4号和6号样本携带鼠疫噬菌体,出现此类情况,     

计算机模拟研究肝素联合川芎嗪的协同抗血栓药理机制

目的：基于计算机模拟研究肝素联合川芎嗪治疗血栓性疾病协同增效的分子机制。方法：在PDB数据库中寻找肝素靶蛋白,与肝素进行分子对接;利用反向分子对接服务器（DRAR-CPI）和毒性与基因比较数据库（CTD）对川芎嗪进行靶点预测和筛选;运用正向分子对接软件AutoDock Vina探究川芎嗪与潜在抗血栓靶点亲和力;利用STRING平台构建肝素及川芎嗪抗血栓靶点的蛋白互作（PPI）网络;利用生物学信息注释数据库（KEGG）将川芎嗪及肝素的抗血栓靶点进行KEGG通路富集。结果：肝素诱导AT Ⅲ变构、激活,抑制凝血酶活性。而川芎嗪则能抑制凝血因子Ⅹ、凝血因子IX、凝血因子VⅡ、酪氨酸蛋白激酶JAK2、纤溶酶原激活物抑制剂1、血浆激肽释放酶6个靶点。二者联合从上下游多重阻断凝血级联反应通路。结论：肝素联合川芎嗪能作用于多个凝血因子以及凝血酶、纤溶酶原激活物抑制剂等血栓形成关键蛋白,调节凝血纤溶系统,协同产生抗凝、溶栓类抗血栓作用。     

利用Stein-Weiss解析函数结合反向传播神经网络进行血管分割

针对传统反向传播（BP）神经网络对血管进行分割存在耗时长且识别率不高的问题,本研究提出一种新的基于Stein-Weiss解析函数的BP神经网络算法用于血管分割。首先为每个体素构建一个Stein-Weiss函数,然后根据Stein-Weiss解析函数的解析性,计算出相应体素的16个特征值,将这些特征值输入到BP神经网络的输入层,采用BP神经网络的自学习能力对这些数据进行分类学习,最后通过BP神经网络的泛化能力来获取血管边缘。对肝脏血管分割的实验结果表明,相对于传统的BP神经网络分割算法,该算法提取的函数血管边缘识别率高、细节丰富,分割效率也明显提高。     

云南地区乙型肝炎病毒基因型分布与临床的相关性

目的: 了解云南地区乙型肝炎病毒基因型分布特征, 探讨其与慢性HBV感染者的性别和年龄、不同临床疾病谱、病毒复制水平的关系.方法:选择云南地区慢性HBV感染者117例, 其中慢性无症状乙型肝炎表面抗原携带者(ASC)26例、慢性乙型肝炎(CHB)55例(轻度21例、中度24例、重度10例)、慢性重型肝炎(CLF)18例、乙肝后肝硬化(LC)11例及原发性肝细胞肝癌(HCC)7例, 采用反向杂交技术(RDB)检测HBV基因型, 并对与其性别年龄、临床分型和病毒复制水平的关系进行分析.结果: 云南地区HBV基因型以B型和C型为主, 分别为41.0%(48/117)和54.7%(64/117) , 并以C型为最多(χ2 = 4.38, P = 0.036);D型1例(0.86%), B、C混合型2例(1.71%), A、C混合型2例(1.71%). B基因型在轻度慢乙肝组所占的比例显著高于中、重度慢乙肝组(χ2 = 8.27、11.98, P = 0.004、0.001)、ASC组(χ2 = 5.46, P = 0.02)、CLF组(χ2 = 4.13, P = 0.042)和LC/HCC组(χ2 = 11.3, P = 0.001). C基因型在LC/HCC组和重度慢乙肝组所占的比例均显著高于轻度慢乙肝组(χ2 = 11.3, P = 0.001;χ2 = 8.78, P = 0.003), 与其他各临床型组间的比较则无显著性差异(P>0.05). C基因型在HBV DNA( )组和HBeAg(-)组r所占的比例均分别显著高于HBV DNA(-)组(χ2 = 6.63, P = 0.01)和HBeAg( )组(χ2 = 7.12, P = 0.008). B基因型在HBV DNA低水平复制组中所占的比例显著高于高水平复制组(χ2 = 4.12, P = 0.042). C基因型在HBV DNA高水平复制组中所占的比例显著高于B基因型(χ2 = 3.89, P<0.05). C基因型在年龄≥30岁组中所占的比例(63.3%)高于年龄<30岁组(45.6%)(χ2 = 3.7, P = 0.05). HBV基因型在性别间的分布无统计学差异(P>0.05)结论:云南地区存在HBV的B、C、D、B C和A C基因型, 以B型和C型为主要基因型, 并以C型为最多. B基因型在轻度慢乙肝的比例显著高于其他各临床型HBV感染者, 并且与HBV的低水平复制和低年龄有关. C基因型主要分布于重度慢乙肝和LC/HCC、HBV DNA高水平复制、年龄≥30岁的患者中. 提示C基因型与慢乙肝重度、肝硬化、肝细胞肝癌及HBV DNA高水平复制关系密切.     

改进型反向基因操作系统的构建和流感病毒变异株的选育

目的构建一个新型的反向基因操作系统,并利用该技术获得流感病毒变异株。方法用分子生物学方法把表达蛋白载体(pQBI50_BFP_fA1)和转录基因载体(pHH21)两个载体有机地整合,构建出既能表达病毒蛋白又能转录基因的单一载体(pPol_Ⅱ/Ⅰ);同时通过RT_PCR提取A/Ann Arbor/6/60病毒的cDNA,然后把8个病毒基因分别克隆到pPol_Ⅱ/Ⅰ载体;通过点变异和基因删除方法对M和NS基因进行改进;用细胞培养和细胞免疫染色法测定重组病毒的生物特征。结果成功构建了由8个小质粒组成的转染细胞能力较强的一个新型反向基因操作系统。同时在M和NS基因上加以分子生物学的改进,并获得2个对温度敏感和增殖力低的新毒株。结论一个改进型反向基因操作系统被成功建立,且利用这个系统拯救出2个流感变异株。这个系统不仅在流感病毒的分子基础研究而且将在减毒性活疫苗的研发上发挥重要作用。这2个流感变异株作为减毒性活疫苗的候选株具有较好的开发前景。     

内脏感觉的检测方法

内脏敏感性在功能性胃肠病的发病机制中得到越来越多的证实,其检测方法的研究也得到了重视.我们简要介绍了RⅢ反射反向抑制技术、恒压器检测技术、脑显像技术、黏膜电刺激方法和温度刺激方法在检测内脏敏感性中的应用．     

疫后医学发展的思考——中华中医药学会中医体质分会第十八次学术年会讲话

正1研究体质要回归生命的本质从基因到表型,基因决定了生命的功能、人体的机能,包括发生的疾病,但从RNA到蛋白质到调控,中间有很多很多故事。王琦老师的体质学说,我对体质的"质"的理解有3个层面,第一个是物质的"质",第二个是质量的"质",还有一个是本质的"质",生命的本质。无论是西医还是中医,都应该研究生命的本质。中医的阴阳图,不仅仅只有平面层次上下的转动、左右的转动,还有立体的前后的转动。这样的转动,在各方位相交的位置有若干个碰撞,在碰撞的过程中就会产生力量、发生变化,要么是两种物质传递的结果,     

人乳头状瘤病毒亚型PCR/RDB基因分析方法的建立及初步评价

目的建立一种基于PCR和RDB技术的临床实用、价格低廉、能对目前已知的绝大多数高危型及常见的低危型人乳头状瘤病毒(HPV)进行基因分型的检测方法(PCR/RDB法),并对该方法用于HPV分型检测做出方法学评价。方法根据HPV基因序列设计可扩增包含目前常见的HPV型别的通用引物,并根据14种HPV高危亚型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68)和7种低危亚型(6、11、42、43、44、53、CP8304)的序列特点设计针对这21种HPV型别的型特异性探针。21种HPV亚型标准毒株PCR产物与HPV型特异性探针进行杂交,建立一次性对21种HPV亚型进行分型的PCR/RDB检测方法。将PCR/RDB法用于213例经杂交捕获法(hybird capture,HCⅡ)检测为高危型HPV阳性样本的HPV型别诊断。结果建立的PCR/RDB法均能鉴定出21种HPV亚型,无假阳性和假阴性结果,未出现交叉反应;含有相当于10个以上HPV分子的质粒标准品均能成功获得PCR产物检测的阳性结果;盲法分析结果显示,195例经HCⅡ法检测为高危型HPV阳性的样品被PCR/RDB检测出具体的HPV型别,共检测出13种高危型HPV亚型,检出率分别是32.31%(16型)、23.08%(52型)、17.95%(58型)、11.79%(31型)、10.26%(68型)、9.74%(33型)、8.21%(18型)、6.15%(66型)、3.08%(59型)、2.05%(45型)、2.05%(39型)、1.54%(56型)、1.03%(51型)。单一HPV亚型感染及2种、3种和4种HPV亚型混合感染构成比分别为59.46%、30.81%、8.65%和1.08%。18例未能检测出HPV的具体型别,PCR/RDB法与HCⅡ法的高危型HPV检测结果的符合率为91.5%(195/213)。结论PCR/RDB法与HCⅡ法高危型HPV检测阳性符合率高,并可一次性分析出21种HPV型别,是一种准确、高效、经济的HPV型别检测方法,可用于HPV的常规基因型分型诊断及人群筛查。     

反向点杂交法在β-地中海贫血基因诊断中的应用

目的初步评价反向点杂交法对β-地中海贫血基因的诊断效能。方法使用反向点杂交法对1 004例疑似β-地中海贫血病例进行基因诊断。结果1 004例外周血样品中有283例β-地中海贫血。共发现11种突变,其中CD41-42(40．89％),IVS-2-654(22．68％),CD17(12．71％),TATAbox-28(14．43％),CD43 (3．78％)和CD26(1．72％),占突变的95％以上。结论反向点杂交法具有快速、准确的优点,适用于普通人群的β-地中海贫血分子检测和产前诊断。     

广东湛江地区β地中海贫血基因突变类型的研究

经血液学方法检出的湛江地区β地贫杂合子３６例,用聚合酶链反应扩增其β珠蛋白基因,再经反向点杂交确定基因突变类型。结果表明共有５种β地贫基因,其中ＣＤ４１－４２（－ＴＣＴＴ）２１例,占５８３％;ＩＶＳ２ｎｔ６５４（Ｃ→Ｔ）９例,占２５％;β－２８（Ａ→Ｇ）３例,占８３％;ＣＤ１７（Ａ→Ｔ）２例,占５６％;ＣＤ７１－７２（＋Ａ）１例,占２８％。本研究结果对在本地区开展地贫基因分析、婚姻指导和产前诊断具有重要意义。