多重引物PCR和异源双链毛细管电泳技术在B细胞淋巴瘤诊断中的应用

目的探讨多重引物PCR和异源双链毛细管电泳技术(heteroduplex analysis HA)在B细胞淋巴瘤诊断中的应用。方法从普通石蜡切片组织中提取基因组DNA用多重引物PCR扩增。利用双链异源技术进行毛细管电泳,并对其产物进行分析。结果 32例B细胞淋巴瘤中29例检测有克隆性重排,检出率90.65%。10例反应性增生病例均成多克隆性重排。结论在B细胞受体IgH和IgK基因克隆重排检测中,多重引物PCR及异源双链毛细管电泳技术具有样本来源便利,灵敏度高,特异性强,耗时短等特点,可作为B细胞淋巴瘤的诊断及鉴别诊断的辅助检测手段。     

抗双链DNA抗体与系统性红斑狼疮肝损伤的关系

目的探讨抗双链DNA抗体(抗ds-DNA抗体)与系统性红斑狼疮(SLE)肝损伤的关系。方法选择SLE患者50例,根据抗ds-DNA抗体阳性与阴性将患者分为两组:研究组抗ds-DNA抗体阳性,对照组抗ds-DNA抗体阴性。两组均给予来氟米特片+甲泼尼龙片治疗,观察治疗第2、4、8周时肝功能的变化,并进行统计学分析。结果治疗2周和4周时,两组患者肝功能异常发生率间差异无统计学意义(P>0.05);在治疗第8周时,研究组患者肝功能异常发生率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在SLE治疗过程中,抗ds-DNA抗体阳性患者较抗ds-DNA抗体阴性患者更易发生肝损伤。     

双链RNA依赖的蛋白激酶在非小细胞肺癌预后预测及靶向治疗中的作用

【目的】探索双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)联合其他肿瘤代谢相关蛋白能否作为非小细胞肺癌(NSCLC)的更有效的预测因子;同时拟研究部分肿瘤代谢相关化合物,如胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)抑制剂、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂等与PKR表达的关系,拟求达到更好的靶向治疗及个体化治疗的目的。【方法】免疫组化检测212例NSCLC中PKR、IGF-1R表达情况,并用于Kaplan-Meier生存分析。Western Blotting检测13种肺癌细胞株PKR、p-PKR表达;磺基罗丹明B法(SRB)检测PPP、Rapamycin等药物作用后对高表达及低表达p-PKR细胞的抑制率。【结果】全组NSCLC患者中,PKRlow/IGF-1Rhigh患者的5年总生存率(21.6%)明显低于PKRhigh/IGF-1Rlow患者(74.6%)及其他患者(58.2%)(P<0.0001),单、多因素分析提示PKR/IGF-1R联合标记物为NSCLC患者总生存率的独立预后因素。SRB结果提示,第1～3天,IGF-1R抑制剂PPP 3μmol/L在6个肺癌细胞株中均能显著抑制细胞生长,在0.3μmol/L剂量低表达PKR和/或p-PKR的H1792和H292细胞株中,较其他细胞株更能抑制细胞生长。而mTOR抑制剂Rapamycin采用1、0.1及0.01μmol/L 3个剂量级在各细胞株均未见明显抑制细胞生长的区别。【结论】PKR联合IGF-1R可预测NSCLC的预后,PKR低表达的H1792、H292细胞株中,IGF-1R抑制剂PPP具有显著抑制作用,但对于mTOR抑制剂Rapamycin,未见明显作用,提示可通过检测PKR的表达来选择适合IGF-1R抑制剂PPP的病人。     

TopBP1在DNA损伤修复及乳腺癌发生中的作用

一、概述人类DNA拓扑异构酶Ⅱβ结合蛋白1(DNA to-poisomeraseⅡβ-binding protein 1,TopBP1)是最初于1997年由Yamane等人经双杂交筛选分离得到的一种能结合到DNA拓扑异构酶Ⅱβ蛋白C末端区域的蛋白[1]。TopBP1基因定位于人类染色体3q22.1,     

固有免疫调控蛋白PKR串联亲和纯化系统的建立及应用

目的 构建固有免疫调控蛋白--双链RNA(dsRNA)调控的蛋白激酶(PKR)的串联亲和纯化系统(TAP),初步研究PKR蛋白功能,以用于与PKR相互作用的新蛋白的鉴定与功能分析.方法 通过PCR扩增PKR目的基因,克隆至真核表达载体pcTAP-A中.将重组质粒pcTAP-PKR通过脂质体法转染PKR稳定沉默(PKRk...     

抗脂蛋白酶抗体、抗双链DNA抗体和抗C1q抗体联合检测在狼疮性肾炎诊断中的价值

目的探讨抗双链DNA抗体（抗dsDNA）、抗脂蛋白酶抗体（抗LPL）和抗C1q抗体（抗C1q）单项检测和联合检测在狼疮性肾炎（LN）诊断中的价值。方法将77例SLE患者分为A组（LN组,41例）和B组（非LN组,36例）,比较抗dsDNA、抗LPL和抗C1q单项及联合检测与LN的关系。结果在A组患者中抗dsDNA、抗LPL、抗C1q单项和联合检测阳性率均显著高于B组（P〈0．05）。3种自身抗体联合检测与单项检测比较,敏感性有所降低,但特异性明显提高。抗LPL、抗C1q与抗dsDNA诊断一致性均较好（KLPL=0．447,P〈0．001;KC1q=0．436,P〈0．001）。结论抗dsDNA、抗LPL和抗C1q单项和多项联合检测能很好有助于LN的早期诊断,抗LPL和抗Clq在一定程度上可弥补抗dsDNA对LN诊断的不足。     

人CD59 RNAi逆转录病毒载体系统的构建与鉴定

目的 利用siRNA表达载体法构建并筛选携带针对CD59基因pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体及稳定产毒的细胞克隆.方法 用DNA重组技术,将3条60 bp能转录产生靶向CD59小发夹RNA(shRNA)的寡核苷酸序列定向克隆入逆转录病毒载体pSUPER retro,脂质体法转染包装细胞系Phoenix A,建立产生逆转录病毒的细胞克隆.结果 重组载体经PCR及限制性内切酶酶切鉴定初步成功后测序序列正确;重组载体转染包装细胞,可表达绿色荧光蛋白,表明包装成功.结论 特异性沉默CD59基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体以及稳定产毒的细胞系构建成功,为后续进行肿瘤细胞的研究奠定了基础,可望为肿瘤治疗开辟新途径.     

实时荧光定量PCR检测HBVcccDNA临床应用研究

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)属嗜肝脱氧核糖核酸科(hepadnaviridae),不完全双链DNA病毒,是引起急慢性肝炎的最主要病原之一。乙型肝炎病毒与其他DNA病毒相比,不同之处在于它特殊的反转录复制形式,以及特殊的复制中间体共价闭合环DNA(covalently closed circular DNA,c     

北京汉族群体线粒体DNA高变区多样性研究

线粒体是存在于细胞质中的一种细胞器，线粒体拥有自身的遗传物质——线粒体DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)。人类mtDNA是由约16569碱基对组成的呈母系遗传的闭合双链环状DNA，其中大部分为编码区。除编码区外，线粒体DNA还有一大小约为1100bp的非编码区(16024—16569，1—576)，称为控制区(control region，CR)或D-环区(displaceloop，D-loop)。     

细胞因子与HCMV致病性关系初探

人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus HCMV)即疱疹病毒5型，属疱疹病毒科，为线状双链DNA病毒。人巨细胞病毒感染在我国相当普遍，多在婴幼儿期发生，儿童感染率85％左右，成人感染率95％左右，由于HCMV是一种弱的致病因子，多数感染者为无症状或潜伏感染，但在免疫功能下降或缺陷时，可引起疾病。