DNA异源双链电泳分离识别β地中海贫血的一种突变

β地中海贫血密码子41～42(—4bp)突变的杂合子经PCR体外扩增后,聚丙烯酰胺凝胶电泳除显示预定扩增片段外,还显示由DNA异源双链组成的额外双带,据此设计出简单的识别β41～42突变纯合子、杂合子及相应的正常个体的方法,并成功地应用于产前断诊。     

肾病综合征合并巨核细胞再生障碍性贫血1例

1病例介绍病人男,63岁,2年前在我院确诊为原发性肾病综合征,经激素正规治疗8周后尿蛋白转阴,逐渐减量至强的松10mg/d维持,病情稳定。于2005年6月复查血常规示:血小板37×109/L,余无异常,收入院。查体:T37℃,BP120/80mmHg,皮肤黏膜无黄染及出血点,浅表淋巴结无肿大,心肺无异常,肝脾肋下未     

经皮经腔血管成形术后DNA双链结构断裂的研究

目的通过观察H2AX组蛋白变异体的磷酸化形式(γ-H2AX)的焦点对下肢动脉经皮经腔血管成形术(PTA)后DNA双链结构的断裂(double-strand breaks,DSBs)进行定     

RNA干扰——治疗HIV感染的新方法

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA介导的，特异性沉默内源或外源性同源基因的过程。RNAi的分子生物学特征当前已被用于抗HIV感染和治疗AIDS病。本文就RNAi抗HIv机制和近两年来RNAi在抗HIV-1感染方面的最新研究进展及在RNAi实验设计上需注意的问题等方面加以综述。     

干涉RNA抑制人骨肉瘤细胞PCNA表达的实验研究

目的：构建增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen，PC-NA)短发夹状RNA表达载体，检测其对骨肉瘤细胞PCNA mRNA及蛋白表达的影响。方法：体外构建PCNA shRNA表达载体pSilence2．1-neo-PCNA，转染骨肉瘤细胞系MG-63，RT-PCR和免疫组化方法检测转染后PCNA mRNA及蛋白的表达，MTT比色法和集落形成实验检测细胞增殖活性。结果：pSilence2．1-neo-PCNA载体转染能显著抑制PCNA mRNA和蛋白的表达，转染后24.48和72h mRNA表达抑制率分别为68．62％、80．62％和73．11％，PI值分别为空白组的47．72％、23．37％和35．90％。转染后48h细胞增殖的抑制率为68．89％。结论：pSilence2．1-neo-PCNA可显著抑制MG-63细胞PCNA mRNA和蛋白的表达及细胞的增殖活性。     

Ku80在鼻咽癌中的表达及其临床意义

目的：探讨Ku80在鼻咽癌中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化sP法检测223例鼻咽癌石蜡标本中DNA—PK的三个亚基Ku80的表达情况，并结合患者的临床及预后资料分析其相关性。结果：Ku80在鼻咽癌组织中的过表达率为44％。Ku80表达强弱与患者的性别、年龄、病理分型无显著相关（P〉0．05），与TNM分期、N分期、M分期有关（P〈0．05）。单因素Kaplan—Meier生存分析显示，Ku80过表达组总生存率低于低表达组，Ku80对总生存率的影响有趋势，但尚未达到统计意义（P=0．141）。结论：Ku80在大部分鼻咽癌组织中的均有表达；Ku80与鼻咽癌的转移行为有关；初步研究未发现Ku80表达与鼻咽癌预后存在显著相关性，但有必要扩大样本进一步深入研究。     

四种抗双链DNA抗体检测方法的评价

四种抗双链ＤＮＡ抗体检测方法的评价王杰，朱世钧，殷文金，秦志芳，张杏书（南京鼓楼医院临床实验中心，南京２１０００８）关键词抗双链ＤＮＡ抗体，酶联免疫吸附试验，放射免疫法，间接免疫荧光法，斑点免疫结合试验本文报道用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫...     

应用单链构象多态性和异源双链分析研究拉米夫定耐药变异

目的 应用单链构象多态性/异源双链分析技术研究慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗前后乙肝病毒准种组成的改变。方法 聚合酶链反应扩增6例患者治疗前后共12份血清标本中目的片段并逐一分析。结果 拉米夫定治疗前患者体内乙肝病毒聚合酶基因序列准种组成较复杂,准种数在7-14(平均9.8),均高于治疗后准种数4-8(平均5.7),t=3.98,P<0.05。6例患者治疗前的准种分布中有一种或两种优势准种,但比例较低(33.3％-81.80％);治疗后显著升高(78.80％-90.9％),t=3.24,P<0.05。选择优势克隆测序,6例患者经拉米夫定治疗后2例在酪氨酸-蛋氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸(YMDD)序列出现M550V/L528M,3例为M5501变异,1例无变异。结论 采用单链构象多态性/异源双链分析技术对人体内病毒作整体性的研究,可避免其他研究方法的片面性,为发现新的变异点提供机会,进一步解释拉米夫定的耐药机制。     

抗核抗体、抗双链-DNA及核抗原抗体联合检测对系统性红斑狼疮临床诊断的价值

目的分析抗核抗体(ANA)、抗双链DNA(抗ds-DNA)、核抗原抗体(ENA)的联合检测,对系统性红斑狼疮(SLE)的临床诊断的意义。方法测定68例SLE患者和76例其他自身免疫病患者,以及50例健康人群血清中的自身抗体进行间接免疫荧光法测定ANA,以间接结合的放射性核素测定抗ds-DNA,以斑点法测定ENA。结果本文68例SLE患者血清自身抗体检测中,ANA、抗ds-DNA、ENA阳性率,分别为91.2%、72.1%、82.4%;特异性分别为71.4%、96.0%、79.3%。其中,ENA的检测包括6种,以抗Sm抗体为主,阳性率为42.6%,特异性为99.2%。3者联合检测阳性率为97.1%,特异性为71.4%。结论在检测的3种自身抗体中以ANA敏感性最高,其他两种抗ds-DNA与抗Sm抗体特异性可达96%以上,不过敏感性低。3者联合检测可较大程度提高SLE检测阳性率,并且单独检测特异性时,特异性有显著差异,且3者具有明显的互补作用。     

多重引物PCR和异源双链毛细管电泳技术在B细胞淋巴瘤诊断中的应用

目的探讨多重引物PCR和异源双链毛细管电泳技术(heteroduplex analysis HA)在B细胞淋巴瘤诊断中的应用。方法从普通石蜡切片组织中提取基因组DNA用多重引物PCR扩增。利用双链异源技术进行毛细管电泳,并对其产物进行分析。结果 32例B细胞淋巴瘤中29例检测有克隆性重排,检出率90.65%。10例反应性增生病例均成多克隆性重排。结论在B细胞受体IgH和IgK基因克隆重排检测中,多重引物PCR及异源双链毛细管电泳技术具有样本来源便利,灵敏度高,特异性强,耗时短等特点,可作为B细胞淋巴瘤的诊断及鉴别诊断的辅助检测手段。