RNA干扰介导ABCE1基因沉默对人肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的ABCE1在人肺腺癌A549细胞增殖中的作用进行初步探讨。方法以人肺腺癌A549细胞系为研究对象,针对其ABCE1基因序列设计小干扰RNA片段,重组其短发夹状RNA（shRNA）表达载体,转染入细胞。用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹（Western blot）方法分别检测转染后ABCE1的mRNA和蛋白的表达水平,MTT法检测增殖能力。结果RT-PCR和Western blot显示shRNA对ABCE1基因和蛋白水平均有显著的下调作用。人肺腺癌A549细胞的生长速度减慢。结论下调ABCE1基因后,A549细胞的增殖能力得到了明显的抑制,有可能成为临床治疗A549的靶点之一。     

棘突椎板原位回植治疗峡部裂腰椎滑脱远期疗效分析

目的:探讨病椎棘突椎板整块取下,神经根管减压,RF内固定复位,椎间植骨,病椎棘突椎板再原位回植,治疗峡部裂性腰椎滑脱的远期疗效。方法:收治峡部裂性腰椎滑脱症患者中资料齐全的68例,均行后路病椎棘突椎板整块取下,神经根管减压,RF内固定,椎间盘切除,滑脱椎复位,椎间植骨融合,棘突椎板再原位回植。随访时观察患者的疗效,椎间是否融合,滑脱是否复发,测量术前,术后及随访时固定椎间隙的高度变化。结果:随访12～60个月,平均32个月。21例I度滑脱与39例II度滑脱术后全部解剖复位,8例III度滑脱,有2例留有I度滑脱,所有病例椎体间完全融合,65例术后疼痛完全消失,有3例尚有不同程度的疼痛。结论:预防术后复发及并发性反应的发生,远期疗效好,是治疗峡部裂腰椎滑脱比较理想的手术方式。     

4株蚊媒病毒多重RT-PCR快速检测方法的建立

目的建立登革1、2型病毒、黄热病毒及流行性乙型脑炎病毒的多重RT-PCR快速检测方法。方法参照病毒核酸序列设计多重RT-PCR引物,并检索GenBank国际基因序列数据库初步验证其特异性,随后对Mg2+、dNTP及引物浓度,RT-PCR反应条件进行优化,建立稳定、特异的多重RT-PCR快速检测4株病毒方法 ,并以同属于黄病毒科的登革3型病毒、登革4型病毒及甲病毒属基孔肯亚病毒、辛德毕斯病毒为对照,验证其特异性。结果应用多重RT-PCR反应体系,对引物的相关性实验结果表明引物之间不会因相互干扰而出现假阳性结果 ;采用多重RT-PCR引物对登革1、2型病毒、黄热病毒及流行性乙型脑炎病毒进行扩增,分别获得574、251、879、422 bp片段,与设计相符,而对照病毒组均无非特异性扩增条带。结论实验证明,所建立的多重RT-PCR方法能够快速地检测登革1、2型病毒、黄热病毒及流行性乙型脑炎病毒,为其检测提供了一种方便易行的方法 。     

胸腔内血容积和全心舒张末期容积监测肝移植术患者心脏前负荷的准确性

目的 评价全心舒张末期容积(GEDV)和胸腔内血容积(ITBVTPTD)在肝移植术围术期的应用价值与意义.方法 择期肝移植术患者8例,年龄42～50岁,ASA Ⅲ～Ⅳ级.经股动脉及颈内静脉分别置人PiCCO plus热稀释导管和CCO导管,监测GEDV、ITBV及每搏输出量(SVPAC,经CCO肺动脉导管测得)、肺动脉阻塞压(PAOP)、中心静脉压(CVP)等参数.于麻醉诱导前(T0)、无肝期前10 min(T1)、无肝期10 min(T2)、新肝期10 min(T3)及术毕(T4)采集数据.结果 与T0、T1、T3及T4相比,T2时点GEDV与ITBV均明显降低(P<0.05);与T0及T1相比,Tr2时点SVPAC显著降低(P<0.05).GEDV、ITBV与SV正相关(P<0.01),PAOP、CVP与SV不相关.PAOP、CVP与GEDV、ITBV不相关.结论 GEDV与ITBV较PAOP、CVP能更准确反映心脏前负荷的变化.     

PCNA在胆管癌中的表达及意义

目的探讨PCNA其在胆管癌发生发展中的作用及机制,为胆管癌诊断和治疗寻找新的靶点。方法分别采用免疫组化SP法和RT-PCR法检测PCNA蛋白和mRNA在胆管癌组织、癌旁组织及正常组织中的表达,结合患者的年龄、性别以及肿瘤大小、部位、分化程度、淋巴结转移等临床病理因素进行综合分析。结果胆管癌组织、正常胆管组织中PCNA蛋白表达的阳性率分别为71.19%和25.00%,胆管癌组织的阳性率亦明显高于正常组织(P<0.05);胆管癌组织的PCNAmRNA表达高于正常组织(P<0.05)。结论 PCNA在胆管癌中的表达明显高于正常的胆管组织,且PCNA的表达随着肿瘤恶性程度的升高(即肿瘤的病理学分化程度的降低)而升高,说明了PCNA是一个有价值的肿瘤标志。     

准分子激光原位角膜磨镶术235例心理干预

目的探讨心理干预在准分子激光原位角膜磨镶术矫治近视治疗中的临床应用价值。方法将470例近视患者随机分为观察组和对照组各235例,对照组采用常规护理方法,观察组在对照组的基础上同时给予心理干预。结果两组患者治疗前焦虑评分比较无显著性差异（P〉0.05）,干预后观察组的焦虑评分优于对照组,两组比较有显著性差异（P〈0.01）;观察组患者对护士的满意度高于对照组,两组比较有显著性差异（P〈0.01）。结论围术期的有效心理干预能减轻患者的焦虑情绪,增强患者手术信心,减少手术并发症的发生,提高手术效果和患者的满意度。     

温敏型原位凝胶的热力学及流变学性质研究

目的:以磷酸川芎嗪为模型药物,探讨运用泊洛沙姆P407(P407)制备鼻用温敏型原位凝胶的可行性。方法:采用搅拌转子法测定不同处方磷酸川芎嗪原位凝胶的胶凝温度(胶凝温度:T);在不同温度下,以旋转式黏度计测定加入不同浓度辅料后P407溶液的黏度,以考察黏度随温度的变化规律。结果:P407溶液浓度越高,T越低;辅料的加入可以使P407溶液T升高,而处方药物和等渗调节剂(0.9%NaCl)使P407溶液T降低。当温度升高时,P407黏度增大,而辅料的加入会使P407黏度突变点的温度升高,黏度变小。结论:通过调节P407溶液的浓度或加入一定量辅料的方法,可以使TMPP原位凝胶在鼻腔温度(33℃左右)下胶凝,从而达到增大生物利用度和减少给药流失的要求。     

平喘宁对哮喘大鼠肺组织cAMP/cGMP及TGF-β1 mRNA表达的影响

目的:研究平喘宁对寒性哮喘大鼠肺组织中cAMP/cGMP及TGF-β1表达水平的影响。方法:雄性Wistar大鼠70只,随机分为空白对照组、模型组、地塞米松组、桂龙咳喘宁组以及平喘宁高、中、低剂量组。以卵蛋白致敏及寒冷刺激复制大鼠哮喘模型,造模7 d后,各治疗组开始给药,空白对照组、模型组每天给予等量蒸馏水灌胃。4 w后取出肺组织,采用ELISA法检测大鼠肺组织cAMP、cGMP含量,并计算cAMP/cGMP;采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)半定量检测TGF-β1 mRNA表达丰度。结果:与模型组比较,平喘宁高、中、低剂量组cGMP含量降低,cAMP/cGMP上升,TGF-β1 mRNA表达水平降低(P<0.01,P<0.05)。结论:平喘宁可明显减轻哮喘大鼠气道炎症反应,逆转气道重构。     

人季节性H1N1流感病毒小鼠感染模型的建立

目的制备人季节性H1N1流感病毒的小鼠感染模型,为研究流感病毒致病性、研发抗病毒药物提供模型动物。方法将人季节性H1N1流感病毒在鸡胚尿囊腔扩增后,滴鼻接种小鼠,4 d后将小鼠处死,挑选感染体征严重者进行实时荧光PCR(FQ-PCR)检测肺中的流感病毒,将检测阳性的肺上清在鸡胚尿囊腔扩增,接种于下一代小鼠。比较各代小鼠对流感病毒的适应情况,直至小鼠出现明显的感染体征,取肺研磨制成匀浆,获得流感病毒鼠肺适应株并检测其半数致死量(LD50)。将10 LD50的病毒液接种于小鼠,建立人季节性H1N1流感病毒的小鼠感染模型,观察模型小鼠的一般活动状态、体质量变化、肺部病变,HE染色观察肺部病理切片,计算肺指数,FQ-PCR检测病毒RNA。结果人季节性流感病毒在小鼠体内传代4次后,鼠肺适应株制备完成,其经鼻的LD50为10-2.41/0.05 mL。人季节性流感病毒的小鼠感染模型,一般状态差,体质量明显减轻,肺指数增大,70%出现死亡。病理切片观察病变明显,FQ-PCR显示流感病毒阳性。结论成功建立了人季节性H1N1流感病毒的小鼠感染模型。     

当归肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析

目的 对当归肌动蛋白（Actin）基因进行克隆及序列分析。方法 根据已经克隆的植物Actin基因的保守序列设计一对简并性引物,以当归根部总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增Actin基因片段并连接到pMD19-T载体上,阳性克隆经PCR检测后进行测序。结果 得到一段598 bp的序列,序列分析表明,该片段编码198个氨基酸,与高等植物Actin基因核苷酸序列同源性在83%以上,与其他肌动蛋白氨基酸序列同源性达94%以上。结论 首次从当归中克隆出了Actin基因,为有效利用该基因奠定了基础。