广东菲牛蛭中有效抗凝物质的分离纯化

目的从广东菲牛蛭鲜体中分离纯化有效抗凝物质,并对其生化性质进行测定。方法用水提醇沉、离子交换、反相层析法等分离纯化广东菲牛蛭中的抗凝物质,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其蛋白的分子质量,并运用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI—TOF—MS／MS）进行分析。结果从广东菲牛蛭中分离出得到一种电泳纯的活性多肽,其相对分子质量为19．2kDa。所得菲牛蛭抗凝活性多肽每克蛋白所含单位抗凝活性≥2548000ATU,活性回收率约为53％。结论从广东菲牛蛭鲜体中分离出的活性抗凝多肽对凝血酶具有极强的抑制作用,开发应用前景广阔。     

陕产黄花油点草总黄酮部位纯化工艺研究

目的 优选大孔吸附树脂纯化陕产黄花油点草总黄酮部位的最佳工艺。方法 以紫外分光光度法测定总黄酮的量。采用每克树脂纯化转移总黄酮的量为指标,通过考察动态吸附-解吸附、静态吸附-解吸附过程,对AB-8、D-101、HPD-450、HPD-600、HPD-700大孔树脂进行了优选;再进一步考察提取药液质量浓度、洗脱剂用量、径高比、药液的pH值对树脂纯化工艺的影响,确定最佳工艺条件,并对优选工艺条件进行了验证试验。结果 药液质量浓度为1.2 g/mL,径高比为1∶5,药液pH 6.47,生药材-树脂为1∶3,上样体积流量为1 BV/h,洗脱液为40%乙醇,洗脱体积流量为1 BV/h,洗脱体积为2 BV。结论 该工艺科学合理,可有效实现总黄酮部位的富集。     

人HCT116结肠癌细胞系中CD133+结肠癌干细胞分离及鉴定

目的 从人结肠癌细胞系(HCT116)中分离鉴定结肠癌干细胞,并观察其体外生物学特性.方法 利用RT-PCR、免疫荧光、流式细胞等技术检测HCT116细胞中CD133的表达情况;利用免疫磁珠分选技术分选CD133+细胞;采用无血清培养基培养分选后的CD133+细胞鉴定其体外增殖特性;采用含血清培养基诱导干细胞克隆球分化并采用免疫组化检测CK20表达情况鉴定其分化特性.结果 HCT116细胞系中存住CD133+细胞,免疫磁珠能有效的分选CD133+细胞,分选后的阳性含量为91.92%,分选后的阳性细胞具有典型干细胞的体外增殖、分化特性.结论 CD133+结肠癌干细胞在体外具有和普通干细胞类似的无限增殖、自我更新和分化能力,同时它们也表达ABCG2等耐药相火蛋白.     

大鼠肝星状细胞的分离培养鉴定

目的改良分离培养大鼠肝星状细胞的简便方法。方法经过门静脉插管、推注肝素稀释液、肝脏灌流、胶原酶离体循环消化、过滤、离心分离等步骤,分离肝星状细胞,省去了链霉蛋白酶E消化过程,采用台盼蓝染色排斥法鉴定细胞活率,desmin免疫细胞化学染色法鉴定HSCs纯度。结果每只鼠肝HSCs的得率为0.5~1.0×107,纯度为(92.2±2.0)%,活率为(97.8±0.3)%,数量及活率均符合实验要求。结论该方法简便、廉价、实用,值得进一步探索。     

不同用途的心室肌细胞的分离

目的 :建立适合于不同用途的心室肌细胞的酶解分离方法。方法 :恒流 Langendorff灌流 ,I型胶原酶酶解分离 ,应用膜片箝技术记录离子电流、双波长显微荧光光度术检测细胞内游离钙离子浓度及视频跟踪系统测定心肌单细胞收缩。结果 :采用不同分离技术参数获得的心肌细胞能满足上述三种实验条件下的要求。酶解分离的单个心室肌细胞静息电位为 (- 74 .0 6± 4 .5 4 ) m V,记录到心室肌细胞典型的钾、钠、钙离子电流和稳定的心室肌细胞内游离钙比值 ,心室肌单细胞收缩特性稳定。结论 :通过调整分离技术参数获得的心室肌细胞性能稳定 ,具有正常的电 -机械生理特性和耐钙性。     

髓鞘素的提取与鉴定

通过口服抗原诱导免疫耐受治疗自身免疫性疾病,是一种应用前景非常广阔的治疗方法。目前研究较多的是口服髓鞘素（myelin)、髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein,MBP)、髓鞘碱性蛋白的多肽片段等,用以防治实验性变态反应性脑脊髓炎（experimental allergic encephalovomyelitis,EAE),进而治疗多发性硬化（multiple sclerosis,MS)。本文介绍一种简便实用的方法,用以提取粗制的髓鞘抗原,以便用于实验和临床口服免疫耐受的研究。     

闽产木立芦荟多糖的分离纯化及初步分析

目的 分离纯化及初步分析产木立芦荟中的多糖。方法 芦荟经沸水提取，醇沉，Sevage法去除蛋白质，Sephadex G-200柱色谱分离纯化，制得闽产木立芦荟多糖，以硫酸－苯酚法测定其总糖含量。结果 闽产木立芦荟多糖经紫外吸收光谱扫描具有多糖特征吸收峰，未见核酸和蛋白质吸收峰，多糖含量可达89．7％，初步分析由D－甘露糖和D－葡萄糖等单糖组成。结论 从闽产木立芦荟中可提取分离纯度较高的杂多糖。     

基于多分辨率和区域增长的两点Dixon水脂分离技术

目的 提出一种改进的基于区域增长的水脂分离方法,使其可以在低信噪比情况下更可靠.方法 对获取的两幅场向量图分别进行隔行隔列降采样,得到四幅子图像.每幅子图像分别运用区域增长算法获得误差向量图,然后再利用空间相邻像素相位平滑的性质来合并获得的四幅子误差向量图,从而获得一幅平滑的误差向量图,并实现水和脂肪的准确分离.结果 提出方法分别应用于仿真数据和真实数据,仿真数据表明本文方法产生的误差更小.真实数据实验结果表明,提出方法在膝盖、腹部和大腿等部位都能够准确的实现水和脂肪的分离.结论 相对于原始全局区域增长方法,提出方法更加可靠和稳定,能够在不同解剖部位实现准确水脂分离.     

赐百龄胶囊质量标准的实验研究

赐百龄胶囊系选用螺旋藻为原料直接精制而成。本研究采用吸收光谱法鉴别蓝藻蛋白，可见６２０ｎｍ的特征吸收峰。采用三氯化锑试管反应鉴别β－胡萝卜素，显蓝绿色。采用ＴＬＣ鉴别氨基酸，可显７个斑点。采用ＴＬＣ鉴别多糖水解液，可显３个斑点，其中２个斑点与葡萄糖、半乳糖对应．采用氨基酸分析仪测定游离、水解氨基酸，含丰富的人体必需的氨基酸，总量高达５５％以上。采用凯氏定氮法测定总氮量，提示蛋白质总量高达６０％以上。采用柱层析－ＵＶ法测定β－胡萝卜素，含量为４４ｍｇ％。     

基于新型溶剂系统筛选的高速逆流色谱分离油橄榄叶中的多酚类化合物

目的采用HEMW(正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水)系统组成基于9×9表新型溶剂系统筛选的方法应用于高速逆流色谱(HSCCC)分离油橄榄叶中的多酚类化合物橄榄苦苷、木犀草素-4'-O-β-D-葡萄糖苷和羟基酪醇。方法通过测定目标物在4种溶剂体系中的分配系数K值并在LogK值和溶剂系统数之间构建相关的线性关系,筛选出最佳溶剂系统HEMW(1.2∶8.8∶1.7∶8.3,V/V)进行HSCCC分离油橄榄叶提取物并优化了流速、转速及进样量等参数。结果计算所得HEMW (1.2∶8.8∶1.7∶8.3,V/V)为溶剂系统,流速为1.5 mL/min、转速为950 r/min、进样浓度为20 g/L从500 mg油橄榄叶提取物中分离得到45.8 mg橄榄苦苷、17.7 mg木犀草素-4'-O-β-D-葡萄糖苷及6.8 mg羟基酪醇,且3种化合物纯度均大于90%。结论本研究表明9×9表溶剂系统筛选应用于HSCCC分离天然产物领域中具有可行性和高效性,并为HSCCC溶剂系统快速筛选及提高其从复杂体系中分离制备目标化合物的效率提供了技术支持。