人类胚胎冷冻:真的到了由慢速向玻璃化方法过渡的时代?

自第一例冻融人类胚胎获得妊娠以来,胚胎冷冻已经成为辅助生殖技术中的一项常规操作.近年来,玻璃化冷冻技术成功用于冻存人类卵母细胞及胚胎.那么,玻璃化冷冻方法已经安全到可以广泛应用,甚至可以取代慢速冷冻方法了吗？实际上仍有许多问题有待解决,包括冷冻保护剂毒性、开放式载体的交叉污染、复苏胚胎发育潜能及损伤鉴定等.     

玻璃化冷冻小鼠胚胎对胎鼠及胎盘H19DMD甲基化状态的影响

目的 研究胚胎玻璃化冷冻对胎鼠及胎盘H19基因印记控制区(DMD)甲基化状态的影响. 方法 以正常生育期雌雄鼠合笼获得的14 d胎龄的胎鼠及胎盘为对照组;以促排卵、体外受精、体外培养及胚胎移植后获得14 d胎龄的胎鼠及胎盘作为体外受精组;冷冻组与体外受精组不同的是体外培养的胚胎经玻璃化冷冻复苏后再移植.对获得的胎鼠及胎盘提取基因组DNA,经亚硫酸盐变性后克隆测序分析H19 DMD的甲基化状态. 结果 体外受精组胎鼠H19 DMD区有甲基化丢失,胚胎冷冻组中丢失更严重;胎盘中也存在明显的甲基化丢失,但冷冻组与体外受精组相比无明显改变. 结论 本研究提示小鼠胚胎的玻璃化冷冻过程会加重体外操作等引起的植入后胎鼠H19 DMD甲基化丢失;对胎盘H19 DMD甲基化状态无明显影响.     

优化底物酶及冻存剂组成对软骨细胞增殖力及活力的影响

[目的]本文研究的目的在于找到软骨细胞分离的合适方法及优化冰冻保存软骨组织的配方。[方法]来源于骨关节炎膝关节置换术的软骨标本被用于本次试验,采用300或400 u/ml II型胶原酶(CTII-1或2)进行软骨细胞体外分离,保存在不同组成的冷冻剂中,进行梯度冷却并保存在液氮中48 h,随后进行软骨细胞活力及增殖潜力的测定。[结果]CTII-1较CTII-2更能分离出高活力的软骨细胞(P<0.05),并且300或400 u/ml的底物酶浓度比较合适。10%DMSO+90%FCS是一种比较合适的冰冻保护剂,能够最大程度保留软骨细胞的增殖潜力与活力,并且毒副作用小。[结论]通过相关的优化措施诸如软骨细胞体外分离底物酶以及冰冻保护剂的组成,从关节软骨组织中分离具有高增殖潜力的活力软骨细胞是一种可行的方法。     

超低温液氮冷冻技术冻存复苏黑素细胞移植治疗大面积白癜风

目的:研究应用超低温液氮冷冻技术冻存复苏黑素细胞的生物学活性及分析自体黑素细胞移植治疗大面积白癜风的疗效。方法:负压吸疱获取患者正常表皮片,Hu16培养基体外培养黑素细胞,应用超低温液氮冷冻技术冻存复苏黑素细胞,检测黑素细胞的分裂时间(DOT)、黑素含量(M)、黑素制造量(MP)和树突数。受皮区应用超脉冲二氧化碳激光磨削去表皮后,以黑素细胞密度6～10×104个/cm2进行移植。所有患者均至少跟踪观察疗效6个月。结果:11例患者黑素细胞培养至第二代进行超低温液氮冷冻,15例患者黑素细胞培养至第三代进行冷冻,所有的26例患者冻存6、12和24个月复苏黑素细胞的生物学活性指标DOT、M、MP和树突数均与未冻存的细胞无明显差异。未冻存、冻存6、12和24个月的黑素细胞移植治疗的痊愈率为57.69%、61.54%、57.69%和53.85%,有效率为84.61%、88.46%、80.77%和80.77%。冻存6、12和24个月的黑素细胞移植的痊愈率和有效率与未冻存的黑素细胞移植的痊愈率和有效率均无显著性差异。结论:超低温液氮冷冻技术能很好的储存白癜风患者体外培养的黑素细胞,应用冻存复苏的黑素细胞自体移植治疗大面积白癜风皮损疗效确切。     

接台腔镜手术衔接不利的原因分析

目的:分析影响腔镜手术准时开台的手术室原因,以提高腔镜手术开台准时率.方法:回顾性分析2009年1月至2010年5月我院手术室影响腔镜手术准时开台的原因并探讨对策.结果:手术室影响腔镜手术准时开台的原因为无二氧化碳、仪器故障、汇日灭菌器灭菌不合格、腔镜手术器械准备不足等方面.结论:通过培训,加强手术室护理人员技术能力及手术室管理是解决手术室影响腔镜手术准时开台的重要措施.     

直肠癌Miles术手术器械台摆放的改进

目的探讨直肠癌Miles手术器械台合理的摆放方法。方法针对直肠癌Miles手术体位的特点,取消常规手术的托盘器械台,添加自制器械袋,合理布局器械桌。结果改进后的器械台摆放使手术配合便捷,并减低污染风险。结论通过对Miles手术器械台的摆放进行改进,取消有诸多弊端的托盘器械台,添加自制器械袋,使手术配合更为便捷。改进后的器械台摆放方便医、护、麻三方的工作,使手术配合便捷,减低了污染风险。     

37例输卵管积水患者冷冻胚胎移植前反复积水抽吸的疗效观察

输卵管积水特别是B型超声可见的严重输卵管积水影响体外受精-胚胎移植结局已得到多数学者的认可,辅助生殖技术助孕前腹腔镜下输卵管结扎离断可提高妊娠率,但部分患者对生育前输卵管结扎不能接受,故我中心尝试对冷冻胚胎移植前输卵管积水进行反复穿刺,根据积水细菌培养及药敏试验的结果进行抗炎治疗,取得良好的疗效,现报告如下.     

羟基磷灰石义眼台植入术后临床观察

目的：观察羟基磷灰石义眼台植入术后的临床效果。方法：本组32例（32眼）,其中外伤眼球破裂15例,青光眼绝对期5例,眼球萎缩9例,球内容物刮除术后3例（分别为术后7、5、4年）,均行球内容物刮除羟基磷灰石义眼台植入术。结果：术后1d内患眼均有不同程度的疼痛及眼睑水肿,28例术后反应轻,4例患眼同侧头痛,给予对应治疗,2d后均缓解。结膜水肿7~10d消退,术后随访1~5年,无一例排斥反应,双眼外形对称,眼球的活动度好,结膜愈合良好,无巩膜暴露及义眼台脱出。结论：球内容物刮除羟基磷灰石义眼台一期植入,并发症少,眼球活动度好,眼部外观对称,可达到美容效果。     

两种不同羟基磷灰石义眼台植入术的临床观察

目的：比较眼球摘除+义眼台植入+异体巩膜移植术与眼内容物摘除+义眼台巩膜壳内植入术两种手术方式,探讨异体巩膜作为羟基磷灰石义眼台覆盖材料的优点。

方法：临床观察60例60眼,眼球摘除+HA植入覆盖同种异体巩膜者为异体巩膜组30眼,眼内容物摘除+HA自体巩膜壳内植入为自体巩膜组30眼。两组在术后1,3d; 1wk; 1,6mo进行随诊,观察结膜伤口愈合情况以及有无HA眼台的暴露。

结果：异体巩膜组中有6眼结膜伤口裂开,1眼HA眼台暴露。自体巩膜组中有7眼结膜伤口裂开,5眼HA眼台暴露,2例义眼台暴露后取出。

结论：眼球摘除+义眼台植入+异体巩膜移植术用于临床有较多优越性,术后并发症少。     

保留眼外肌的羟基磷灰石义眼台巩膜腔植入术66例

正0引言羟基磷灰石义眼台植入术方法繁多,义眼台肌锥内植入,义眼台外包自体巩膜或异体巩膜肌锥内植入及其多种变法。上述手术方法均要切断上下内外直肌,将4条直肌的断端缝合在义眼台上,重新构建义眼台的转动功能。我们设计了保留眼外肌的义眼台麻花状巩膜腔内植入方法,经过5a的临床观察取得满意结果,现报道如下。1临床资料总结2006-03/2010-03行羟基磷灰石义眼台麻花状巩膜植入术66例